Microrganismo Análise e Contagem

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Microrganismos
Análise e Contagem
Microbiologia de Alimentos
Profas: Ana Paula Colares, Danielle Alves e Milena Bomfim
Análise de Alimentos
◦Utilização de técnicas microbiológicas
◦ Pesquisar presença de microrganismos; 
◦ Estimar número de microrganismos
◦ Identificar os microrganismos
Análise de alimentos
◦ Etapas da análise microbiológica
◦ Amostragem; 
◦ Preparação da amostra;
◦ Contagem de microrganismos; 
◦ Isolamento e identificação de microrganismos; 
◦ Sorologia.
Amostragem 
◦Especificação de dados; 
◦Evitar contaminação com outros alimentos; 
◦ Transporte
◦ Alimentos perecíveis: 0-4ºC; 
◦ Alimentos congelados: congelados; 
ANÁLISE NO MÁXIMO EM 36H
PREPARAÇÃO DA AMOSTRA
◦Homogeneização da amostra; 
◦Cuidado: velocidade e tempo ⇒ evitar aquecimento 
da amostra e danos aos microrganismos; 
◦Melhor método: Stomacher.
Método Stomacher
Contagem de Microrganismos
◦MÉTODOS DIRETOS
◦ 1) Contagem em placa; 
◦ 2) Método de filtração
◦ 3) Método do Número Mais Provável 
◦ 4) Contagem direta ao microscópio
Contagem em placa
◦ Técnica mais utilizada na determinação do tamanho da 
população bacteriana;
◦ Vantagem
◦ Qualificação de células viáveis 
◦ Desvantagem
◦ Tempo (24 h para o aparecimento das colônias) 
◦ Cálculo
◦ nº de colônias na placa x índice de diluição da amostra = nº 
de bactérias/mL
DILUIÇÃO SERIADA  MÉTODO DE ESPALHAMENTO EM PLACA
Filtração
◦nº de bactérias = pode ser utilizado o método de 
filtração para a sua contagem
◦Concentração de bactérias sobre a superfície de uma 
membrana de filtro de poros muito pequenos após a 
passagem de um volume de 100 mL de água
◦ Filtro posteriormente transferido para uma placa de 
Petri contendo meio sólido.
Método do Número Mais Provável
◦Utilizado para microrganismos que não crescem bem 
em meio sólido
◦ Diluição a partir de um alto volume de inóculo (ex. 10 mL) 
◦ Diluição a partir de um médio volume de inóculo (ex. 1 mL) 
◦ Diluição a partir de um baixo volume de inóculo (ex. 0,1 mL)
◦Contagem do nº de tubos positivos 
◦Estimativa do nº de células/mL de bactérias
Contagem direta ao microscópio
◦Um volume conhecido de suspensão bacteriana é 
colocado em uma área definida da lâmina de 
microscópio
◦A amostra pode ser corada ou analisada a fresco
◦Utilizam câmaras de contagem 
◦Desvantagens
◦ Não separa células mortas e vivas
◦ Pode haver erros de contagem
◦ Difícil contagem para bactérias móveis
Câmara de Neubauer
Contagem de Microrganismos
◦MÉTODOS INDIRETOS
◦ 1) Peso seco 
◦ 2) Medida da turbidez
◦ Monitoramento do crescimento bacteriano através da turbidez 
espectrofotômetro (540 - 660 nm) 
◦ 3) Atividade metabólica
◦ Quantidade de um certo produto (como ácido ou CO2) é 
diretamente proporcional ao número de células bacterianas
Isolamento e Identificação de 
Microrganismos
◦Características morfológicas 
◦Morfologia bacteriana
◦ Diz pouco sobre as células
◦ Útil na identificação de algumas bactérias
◦ Endosporos, flagelos, cápsula
Testes bioquímicos
◦Atividade metabólica  utilizada para diferenciar bactérias
◦ Bactérias intimamente relacionadas  separadas por testes 
bioquímicos
◦ Reduzir o tempo
◦ Uso de técnicas seletivas
◦ Utilização de meios seletivos e diferenciais e diferentes condições de 
cultivo
◦ Utilização de testes rápidos
Prova da catalase
Prova da coagulase