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Criopreservação do sêmen canino Criopreservação do sêmen canino UENFProfª Isabel Candia Nunes da Cunha 99Inseminação ArtificialInseminação Artificial 99Refrigeração e Congelamento de SêmenRefrigeração e Congelamento de Sêmen 99Obtenção dos Oócitos, MIV, FIV e CIVObtenção dos Oócitos, MIV, FIV e CIV 99 Criopreservação de oócitos e embriõesCriopreservação de oócitos e embriões 99Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóides Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóides 99Conservação dos ováriosConservação dos ovários Biotecnologias que podem ser aplicadas à reprodução canina Biotecnologias que podem ser aplicadas à reprodução canina Inseminação artificial é a biotécnica mais procurada por proprietários de cães Inseminação artificial é a biotécnica mais procurada por proprietários de cães 9Possibilita reprodução entre animais com alterações de comportamento 9Supera particularidades raciais que possam dificultar a monta 9Possibilita a utilização de técnicas de reprodução assistida 9Favorece o melhoramento genético rápido e eficiente 9Proporcionar acasalamentos genéticos dirigidos VantagensVantagens da IA em da IA em cãescães 9Controle de doenças 9Prevenção de acidentes que podem ocorrer com a fêmea quando o macho é muito pesado ou agressivo 9Uso de machos com problemas adquiridos e impossibilitados de efetuarem a monta 9Possibilita acasalamento entre animais que vivem em regiões distantes 9Aumento do número de descendentes de um cão 9Uso de machos após a morte VantagensVantagens da IA em da IA em cãescães Sucesso em uma IASucesso em uma IA Óvulo EspermatozóideEspermatozóide Encontro dos gametas Fertilização Fases do Ciclo EstralFases do Ciclo Estral 9Proestro 9Estro 9Diestro 9Anestro Ciclo Estral nas CadelasCiclo Estral nas Cadelas espermatozóides são capazes de fertilizar por mais de 4 - 6 dias proestroproestro estro (dias)estro (dias) diestrodiestro 0 \ 1 \ 2 \ 3 \ 4 \ 5 \ 6 \ 7 \ 8 p r o g e s t e r o n a estrógeno pico LH 2 dias Ovulações ocorrem durante 24 - 96 h Ovócitos primários levam de 24 - 48 h para se capacitar Cada óvulo é fertilizável por um período de 12 a 24h Adaptado de Nelson e Feldman (1996) Métodos de Detecção da ovulação Métodos de Detecção da ovulação 9Comportamento 9Citologia Vaginal 9Vaginoscopia 9Dosagem de progesterona 9Ultra-sonografia Inseminação Artificial em Cães Inseminação Artificial em Cães É a deposição do sêmen no interior do É a deposição do sêmen no interior do trato reprodutivo da fêmeatrato reprodutivo da fêmea sêmen fresco sêmen refrigerado sêmen congelado Inseminação Artificial com Sêmen à Fresco Inseminação Artificial com Sêmen à Fresco Sêmen não diluído 9 forma mais comum 9 taxa de concepção de 75 a 80% Sêmen diluído 9 enriquecimento do sêmen para prolongar a sua viabilidade para 12 a 48h 9Aumenta o volume do ejaculado Protocolo para IA com sêmen à fresco Protocolo Protocolo para IA com sêmen à frescopara IA com sêmen à fresco detecção do momento da ovulaçãodetecção do momento da ovulação •inseminar no pico céls. Superficiais •repetir a cada 48h •avaliação • volume de 5 a 10 ml •dose inseminante de 150 milhões de sptz. viáveis coleta e avaliação do sêmen coleta e avaliação do sêmen •posteriores da fêmea elevados durante 15 minutos inseminação no fundo de vagina inseminação no fundo de vagina Inseminação Artificial em Cães Inseminação Artificial em Cães É a deposição do sêmen no interior do É a deposição do sêmen no interior do trato reprodutivo da fêmeatrato reprodutivo da fêmea sêmen fresco sêmen refrigerado sêmen congelado Finalidades da criopreservaçãoFinalidades da criopreservação 9Baixa metabolismo espermático 9Aumenta sobrevida do sêmen 9Utilização do sêmen no momento desejado Refrigerado ou CongeladoRefrigerado ou Congelado Utilidade do sêmen criopreservado Utilidade do sêmen criopreservado Mercado PET 9Animais que vivem em locais distantes 9Utilização de material genético de alto valor zootécnico 9Reserva biológica de machos melhoradores Utilidade do sêmen criopreservado Utilidade do sêmen criopreservado Preservação animal 9Reserva biológica do país 9FrozenZoo Refrigeração do sêmen de cãoRefrigeração do sêmen de cão Menores danos à integridade da célula Sêmen de cão reaquecidoSêmen de cão reaquecido Alta fertilidadeAlta fertilidade Curto tempo de preservação!Curto tempo de preservação! Congelação do sêmen de cãoCongelação do sêmen de cão Longo período de conservação Maiores danos à integridade da célula Sêmen de cão descongeladoSêmen de cão descongelado Baixa fertilidadeBaixa fertilidade Curto tempo de utilização!Curto tempo de utilização! Refrigeração do sêmen de cãoRefrigeração do sêmen de cão 9Manutenção do sêmen a uma temperatura de 5ºC por no máximo 72h 9Ideal para o transporte de sêmen 9Menores danos à integridade da célula 9Taxas de concepção de aproximadamente 80% 9Manejo do ciclo estral e técnica de inseminação mais fáceis e baratos Inseminação Artificial com Sêmen Congelado Inseminação Artificial com Sêmen Congelado 9Manutenção do sêmen a temperatura de -196ºC por período de tempo indefinido 9Baixas % de motilidade ao descongelamento 9Diluídor adequado que deve conter crioprotetor 9Dose inseminante de 150 milhões de sptz. viáveis 9Sobrevida de 18 a 24 horas após o descongelamento Técnicas de deposição do Sêmen no Trato Reprodutivo da cadela Técnicas de deposição do Sêmen no Trato Reprodutivo da cadela 9Fundo de Vagina- com pipeta plástica rígida e seringa plástica * 9 Transcervical – catéter Norueguês * 9Endoscopia - utilizado para a cateterização cervical* 9Intra uterina - laparoscopia ou laparotomia* Taxas de concepção com sêmen congelado Taxas de concepção com sêmen congelado IA intra vaginal - 0 a 60% IA intrauterina - 46 a 83% Preparo do sêmen canino para o transporte Preparo do sêmen canino Preparo do sêmen canino para o transportepara o transporte Transporte do sêmen refrigeradoTransporte do sêmen refrigerado 9Soluciona problemas de distância entre a Matriz e o Reprodutor 9 Possibilita várias inseminações em um mesmo ciclo com uma coleta de sêmen 9Mais de uma cadela pode ser inseminada com uma mesma remessa de sêmen 9Amplia a diversidade racial e familiar em uma região longínqua do país Transporte do sêmen refrigeradoTransporte do sêmen refrigerado 9Evita a quarentena e diminui o contágio de doenças 9 Possibilita o transporte de sêmen de animais de cativeiro entre zoológicos. 9 Possibilita remessa de sêmen para análise em centros distantes de onde se encontra o macho Diluidores para transporte de sêmen canino Diluidores para transporte Diluidores para transporte de sêmen caninode sêmen canino 9TRIS sem glicerol 9Glicina Gema sem Glicerol 9Meio á base de leite desnatado e glicose (Cunha, 1997; Rota, 1997) Diluidor á base de leite desnatado e glicose (Kenney, 1975) Diluidor á base de leite desnatado e glicose Diluidor á base de leite desnatado e glicose (Kenney, 1975)(Kenney, 1975) Glicose..........................................................4,9g Leite Molico...................................................2,4g Bicarbonato de sódio (solução a 7,5%).........2ml Sulfato de gentamicina (50mg/ml).................2ml Água destilada..............................................92ml Osmolaridade = 375 ± 2 pH= 6,99 ± 0,02 Cuidados com o equipamento para o transporte sêmen Cuidados com o equipamentopara o transporte Cuidados com o equipamento para o transporte sêmensêmen 9O sêmen deve ser acondicionado em recipientes resistentes. 9A temperatura do equipamento de transporte não pode ser NUNCA inferior a zero. 9Deve haver um sistema de refrigeração para manter e a temperatura entre (0 a 18ºC). 9O equipamento de transporte deve indicar o seu conteúdo diminuindo o risco de que este seja violado. Transporte de sêmen refrigerado Transporte de Transporte de sêmen sêmen refrigeradorefrigerado Transporte de sêmen refrigerado Transporte de sêmen Transporte de sêmen refrigeradorefrigerado 9Os tubos de transporte devem ser devidamente marcados com: ¾Doador (nome do certificado) ¾Raça ¾Diluidor utilizado ¾Data e hora da coleta ¾Local da coleta ¾Veterinário responsável Identificação do sêmen para o transporte sêmen Identificação do sêmen para o Identificação do sêmen para o transporte sêmentransporte sêmen O Veterinário responsável pela O Veterinário responsável pela refrigeração deverá expedir um relatório refrigeração deverá expedir um relatório detalhado do processo de refrigeração, detalhado do processo de refrigeração, facilitando, desta forma, a correta facilitando, desta forma, a correta utilização do sêmen pelo Veterinário que utilização do sêmen pelo Veterinário que realizará as IAs.realizará as IAs. 9O doador de sêmen e a matriz deverão atender as exigências genéticas, zootécnicas, sanitárias (Brucelose e Leptospirose com validade de 30 dias) , andrológicas e de identificação segundo o CBKC. 9O doador e a matriz devem ter certificado de DNA expedido por laboratório credenciado pelo CBKC. Exigências do CBKC para o transporte sêmen Exigências do CBKC para o Exigências do CBKC para o transporte sêmentransporte sêmen CBKC – Confederação Brasileira de Cinofilia Obrigada!Obrigada! cunhaicn@uenf.br * *Slide 22 LaparotomiaLaparotomiaLaparotomia LaparoscopiaLaparoscopiaLaparoscopia * * Inseminação Artificial com Sêmen Congelado
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