biofisica espectro

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INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA: DETERMINAÇÃO DO ESPECTO DE ABSORÇÃO DE CORANTES E CONSTRUÇÃO DE CURVA PADRÃO
Carlos Roberto Silva Neves
Italo Parreira Carvalho do Vale
Kamilla Soares Santana
Karollyne Silva Borges
Lavynia Lourenço de Miranda
INTRODUÇÃO
Escpetofotometria
A espectrofotometria é um método que estuda a interação da luz com a matéria e a partir desse princípio permite a realização diversas análises. Cada composto químico absorve, transmite ou reflete luz ao longo de um determinado intervalo de comprimento de onda. A espectrofotometria pode ser utilizada identificar e quantificar substâncias químicas a partir da medição da absorção e transmissão de luz que passa através da amostra. Vamos supor que você olhe para duas soluções da mesma substância, uma com maior intensidade de cor que a outra. O senso comum diz que o mais escuro é o mais concentrado. Assim, tal como a cor da solução se intensifica, sua concentração também aumenta. Esta é uma analogia com o princípio da espectrofotometria: a intensidade da cor é a medida da quantidade de um material em solução. Um segundo princípio é que cada substância absorve ou transmite certos comprimentos de onda, mas não outros. Por exemplo, a cor de uma folha está relacionada com comprimento de onda de luz. Cada cor tem um comprimento de onda diferente, então quando a luz atinge um objeto, alguns comprimentos de onda são absorvidos e outros refletidos de volta. A clorofila absorve luz vermelha e violeta, enquanto que transmite amarela, verde e azul. Os comprimentos de onda transmitidos e refletidos nos fazem perceber a cor verde. É esse mesmo princípio de cor e comprimento de onda em que um espectrofotômetro se baseia. Esse equipamento mede e compara a quantidade de luz que uma substância absorve. Dessa forma é possível realizar uma análise quantitativa e qualitativa, identificando e determinando a concentração das substâncias conforme a interação com a luz. ( KASVI, 29 de julho de 2016).
O espectrofotômetro é usado para medir (identificar e determinar) a concentração de substâncias, que absorvem energia radiante, em um solvente. Sendo assim ele é usado como por exemplo na medição do crescimento bacteriano ou medir determinados ingredientes de uma droga.
Lei de lambert
Lambert (1870) observou a relação entre a transmissão de luz e a espessura da camada do meio absorvente. Quando um feixe de luz monocromática, atravessava um meio transparente homogêneo, cada camada deste meio absorvia igual a fração de luz que atravessava, independentemente da intensidade da luz que incidia. A partir desta conclusão foi enunciada a seguinte lei: " A intensidade da luz emitida decresce exponencialmente à medida que a espessura do meio absorvente aumenta aritmeticamente ".
Esta lei pode ser expressa pela seguinte equação:
I = Io . 10-x1
Onde: I = Intensidade da luz transmitida
Io = Intensidade da luz incidente
x = constante denominada coeficiente de absorção e que depende do meio absorvente empregado
1 = Espessura do meio absorvente
LEI DE BEER
Beer em 1852 observou a relação existente entre a transmissão e a concentração do meio onde passa o feixe de luz. Uma certa solução absorve a luz proporcionalmente à concentração molecular do soluto que nela encontra, isto é, " A intensidade de um feixe de luz monocromático decresce exponencialmente à medida que a concentração da substância absorvente aumenta aritmeticamente ".
Expressa pela equação:
I = Io . 10-kc
Onde: I = Intensidade da luz transmitida
Io = Intensidade da luz incidente
k = Constante denominada coeficiente de absorção
c = Concentração do meio absorvente
Espectro de absorção e curva-padrão
Quando uma solução de um dado composto é submetida a leituras de absorbância ao longo de uma faixa de comprimentos de onda eletromagnética, passamos a ter informações referentes à capacidade do composto em absorver luz. A representação gráfica dos valores de comprimento de onda () versus absorbância é denominada espectro de absorção.
A curva-padrão corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância (A) e os de concentração. Com base na análise gráfica é possível verificar a linearidade da reação e calcular um fator de conversão de valores de absorbância em concentração.
OBJETIVO GERAL
Determinar o espectro de absorção de soluções de metilorange (MO);
Caracterizar o comprimento de onda onde ocorre absorção máxima;
Construir uma curva padrão para cada um dos corantes nos comprimentos de onda (°) adequado.
Materias
Solução de metilorange 0,01mg/ml
Espectrofotômetro 
Pipeta volumétrica 
Pêra 
Tubo de ensaio
 Métodos
A amostra deve ser preparada com a quebra da amostra os métodos mecânicos, químicos ou físicos. A amostra foi solubilizada no solvente escolhido que foi a água destilada em um tudo de ensaio limpo e seco.
No identificados tudo B,1,2,3,4 e 5.
No tubo B não houve adição de MO, somente 5,0mL de H2O.
No tubo 1 foi adicionado 1,0 de MO e 4,0mL de H2O.
No tubo 2 foi adicionado 2,0mL de MO e 3,0mL de H2O.
No tubo 3 foi adicionado 3,0mL de MO e 2,0mL de H2O. 
No tubo 4 foi adicionado 4,0mL de MO e 1,0mL de H2O.
No último tubo de número 5 foi colocado somente 5,0 de MO.
 Em uma cubeta foi colocado solvente puro e lido no comprimento de onda o mesmo que será lida a amostra. Esse procedimento é chamado leitura em branco (Tubo B) e tem como finalidade minimizar os erros causados, pela absorção de luz ocasionada pelo vidro e pela água. Após esse procedimento a solução de interesse foi lida e dessa absorbância foi subtraída leitura do branco. Posteriormente, foi realizado a leitura da Absorbância do elemento X. 
RESULTADOS
O espectro de absorção do metilorange (MO), teve os resultados na tabela e gráficos a seguir:
	Comprimento de onda (nm)
	415
	445
	460
	490
	520
	535
	550
	580
	610
	640
	Absorbância 
	0,346
	0,457
	0,478
	0,494
	0,141
	0,057
	0,019
	0,03
	0,004
	0,003
A absorção máxima foi de 0,494 e foi observada no comprimento de onda de 490 nm.
A concentração das soluções dos tubos 1,2,3,4 e 5 foram obtidas através do cálculo: C1(concentração MO) . V1(Volume de corante nos tubos) = C2(concentração final) . V2 (Volume final)
Foram feitos 5 cálculos no total, obtendo assim a concentração final em cada um dos tubos (exceto tubo “branco”). O volume final é sempre 5 ml, já que a numeração dos tubos indica a quantidade (em mL) de corante adicionado aos tubos, sendo a quantidade restante para alcançar o volume final de 5 mL completados com água, quando necessário.
Tubo 1: 
Tubo 2: 
Tubo 3: 
Tubo 4: 
Tubo 5: 
A tabela a seguir mostra a absorbância e a concentração obtida em cada uma das soluções dos tubos:
	Tubos
	B
	1
	2
	3
	4
	5
	Absorbância
	0
	0,073
	0,152
	0,231
	0,255
	0,363
	Concentração (mg/ml)
	0
	0,002
	0,004
	0,006
	0,008
	0,01
O resultado crescente mostra que a absorbância está diretamente relacionada com a concentração de metilorange (MO) na solução. Oque também pode ser observado também no gráfico a seguir:
A partir desse gráfico e da equação da reta, pode-se calcular a concentração do elemento X:
Elemento x= 0,125
Y= 34,15 x 0,125 + 0,0099
Y= 4,27
CONCLUSÃO
A aula obteve resultados satisfatórios, dentro da normalidade e não houve problemas para a realização dos procedimentos supracitados.
O coeficiente de correlação foi satisfatório, já que o recomendado é aproximado de 1 e o valor encontrado pelo grupo foi r² = 0,974.
REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA
http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/curvapadrao.html
http://www.kasvi.com.br/espectrofotometria-principios-aplicacoes/