1 - Introducao estudo histologia - 2h

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21/08/2014
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Prof. Dr. Daniel Bartoli de Sousa
Célula
Tecidos
Órgãos
Sistemas
Organismo
“Estudo dos tecidos do corpo e 
como estes tecidos se organizam 
para constituir órgãos”
 Tecido epitelial
 Tecido conjuntivo
 Tecido muscular
 Tecido nervoso
Cada tecido fundamental é formado por vários 
tipos de células características e por 
associações e arranjos entre células 
e matriz extracelular
Tecidos Células
Matriz 
extracelular
Funções
Epitelial
Poliédricas e 
justapostas
Pequena 
quantidade
Revestimento 
de superfícies/ 
cavidades do 
corpo e 
secreção
Conjuntivo
Vários tipos de 
células fixas e 
migratórias
Abundante
Preenchimento 
e proteção
Muscular
Alongadas e 
contráteis
Quantidade 
moderada
Movimento
Nervoso
Longos 
prolongamentos
Nenhuma
Transmissão de 
impulsos 
nervosos
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Tecido epitelial Tecido conjuntivo frouxo
Tecido nervoso Tecido muscular
 Células
Matriz extracelular (MEC)
 Vários tipos de moléculas
 Estruturas organizadas e complexas
 Fibrilas de colágeno e membranas basais
 Apoio mecânico para as células
 Transportar nutrientes para as células
 Retornar com catabólitos e produtos de
secreções
 Interação entre células e matriz extracelular
 Células produzem a MEC
 Células são influenciadas e controladas pela MEC
 Cortes histológicos
 Procedimento mais usado
 Microscopia de luz (óptica)
 Cortes muito delgados, colocados em lâminas
 Permite a melhor passagem da luz
 Permite maior detalhamento que colocar a peça
inteira
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Coleta do 
material
Fixação
Desidratação
Diafanização
ou 
Clareamento
Inclusão ou 
Impregnação
Emblocamento
Microtomia
Colagem do 
corte na 
lâmina
Coloração*
Montagem
 Biópsia
 Retirada do fragmento do indivíduo vivo
 Punções
Necropsia
 Retirada do órgão com o indivíduo morto
 Finalidades
 Evitar a digestão dos tecidos
 Enzimas proteolíticas das próprias células -Autólise
 Bactérias
 Endurecer os fragmentos
 Preservar a estrutura e composição molecular das
células e tecidos
 Aumentar a afinidade das estruturas pelos
corantes
Métodos
Químicos
 Físicos
 Fixadores
 Substâncias químicas que mantêm a integridade do
tecido após a morte, sem alterações da estrutura
celular
A escolha do fixador é de suma importância, pois 
dele vai depender os estudos que se quer fazer 
como também das técnicas a serem aplicadas
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Utilizar um volume de fixador maior que as
peças a serem fixadas
Agitação do frasco pode ajudar a penetração 
do fixador
O tempo de fixação varia com o tipo de
fixador e com a temperatura em que ele se
encontra
 Formol Neutro - Tamponado (aldeído fórmico a
37%)
 Bouin
 Fixador de proteínas, glicogênio e ácidos nucléicos
 Helly
 Evidenciar estruturas citoplasmáticas
 Carnoy
 Verificação de glicogênio
 Paraformaldeído
 Glutaraldeído
 Baixo poder de penetração (fragmentos pequenos)
Visa retirar a água do interior da célula a fim 
de permitir a impregnação da peça com 
parafina
O tecido deve ser aos poucos desidratado
 Banhos em concentrações crescentes de
etanol
 70% até 100% (absoluto)
Infiltração dos tecidos por um solvente da 
parafina e ao mesmo tempo desalcolizante
 Etanol deverá ser substituído por solvente
orgânicos
 Miscível tanto em etanol como em parafina ou resina
 Xilol
 Tecidos quase transparentes ou translúcidos
 Infiltração de substâncias que proporcionem
uma consistência rígida ao fragmento de
tecido
 Realizar cortes delgados
 Substâncias
 Parafina
 Resinas de plástico
Os tecidos são submetidos a banhos de
parafina
 Parafina quente e derretida
 56 a 60ºC
 Evaporação do solvente orgânico
 Elimina o xilol
 Parafina preenche espaços no tecido
Em estado líquido, a parafina penetra nos 
tecidos, dando-lhes, depois de solidificada, 
certa dureza
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 Retira-se a peça da estufa e a coloca em
temperatura ambiente para solidificar
 Colocar a parafina de inclusão na caixinha
fora da estufa
 Blocos de parafina
 Após solidificação
 Cortados
 Micrótomo
 A espessura dos cortes geralmente varia de 1
a 10 µm (micrômetros)
 Mais utilizada: 4 a 6 micrômetros
 1 µm = 0,001 mm
É imprescindível para que haja transparência 
do tecido e assim uma boa visualização
 Após cortes
 Fragmentos colocados em água aquecida e,
posteriormente, sobre as lâminas de vidro
 Lâminas vão à estufa a 37°C para que se dê a
colagem do corte à lâmina
 Tem a finalidade de dar contraste aos componentes
dos tecidos, tornando-os visíveis e destacados uns dos
outros
 O mecanismo das colorações está relacionado a dois
fatores:
 Corantes
 Elementos a corar
 Seletividade dos corantes aos tecidos, células e MEC
 Relativa
 Corante
 Compostos químicos com determinados radicais
ácidos ou básicos que possuem cor, e apresentam
afinidade de combinação com estruturas básicas
ou ácidas dos tecidos.
Os corantes podem ser
 Naturais ou Sintéticos
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 A maioria dos corantes apresentam-se como
ácido ou como base
 Ácidos
 Cromóforos aniônicos
 Básicos
 Cromóforo catiônico
 Componentes que se coram com corantes
ácidos
 Acidófilos
 Componentes que se coram com corantes
básicos
 Basófilos
 Reagem com componentes ácidos presentes no
tecido
 Ácidos nucléicos
 Glicosaminoglicanos
 Glicoproteínas ácidas
 Corantes Básicos
 Azul-de-toluidina
 Azul-de-metileno
 Hematoxilina
 Reagem com componentes básicos presentes
no tecido
 Mitocôndrias
 Grânulos de secreção
 Proteínas citoplasmáticas
 Colágeno
 Corantes Ácidos
 Orange G
 Eosina
 Fucsina ácida
 Combinação frequentemente usada
 Hematoxilina
 Eosina
 Hematoxilina
 Cora em azul, violeta ou roxo
 Núcleo das células
 Citoplasma rico em RNA
 Matriz da cartilagem hialina
 Eosina
 Cora em cor-de-rosa
 Citoplasma
 Colágeno
 Tricrômicos
 Núcleo
 Citoplasma
 Diferenciam colágeno de músculo liso
 Tricrômicos
 Mallory
 Masson
 Fenômeno em que determinado corante
muda de cor após reagir com determinado
componente tecidual
 Reflexo da presença de numerosas cargas
aniônicas próximas no tecido (agregado das
moléculas do corante)
 Substância fundamental da cartilagem
 Grânulos dos mastócitos
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 Colagem da lamínula sobre o corte
 Após a montagem, levam-se as lâminas à
estufa para secagem
A lamínula impede que haja hidratação do 
corte pela umidade do ar ambiente, 
permitindo então que estas lâminas se 
mantenham estáveis por tempo indefinido
 Tecidos são fixados por congelamento rápido
 Micrótomo
 Criostato
 Processo rápido
 Ideal para procedimentos cirúrgicos
 Recomendação
 Proteínas
 Lipídeos
 São dissolvidos pelo xilol
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 Distorções e artefatos causados no
processamento dos tecidos
 Processo longo
 Fixação até coloração
Artefatos de técnicas
 A totalidade do tecido
 Difícil visualizar os diferentes componentes das
células e tecidos em um único preparo
 Duas dimensões e três dimensões
 Cortes delgados de estruturas tridimensionais
parecem bidimensionais
 Comprimento e largura