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Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Higiene e Microbiologia de Alimentos Aula: Fatores que afetam o crescimento microbiano Profa. Luciana Moura 1 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Microbiologia de Alimentos 2 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Porque estudar microbiologia alimentar? Ações benéficas: - atividades metabólicas para reciclagem de nutrientes - degradação da matéria orgânica - na produção de alimentos, remédios, enzimas entre outros... 3 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Curiosidades Não podemos ver os microrganismos a olho nu, a não ser que milhões deles estejam agrupados Ex.: colônias (formada a partir do cultivo de um microrganismo) ou milhares de células fúngicas juntas como pão embolorado). A atividade metabólica dos microrganismos é inversamente proporcional ao seu tamanho (20’) 4 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Curva de Crescimento 5 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Lag (latência):Pode durar alguns minutos a algumas horas geralmente uma a três horas. Esta fase é quando o inóculo inicial é proveniente de culturas mais antigas. Fase de adaptação do microorganismo ao ambiente de crescimento – fase onde se inicia a aproveitamento dos nutrientes presentes no meio. 6 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fase lag Outros fatores podem afetar a duração da fase de latência: fatores genéticos: algumas espécie se adaptam mais rapidamente; a idade das bactérias: as células jovens, oriundas de culturas em fase exponencial, tem uma fase de latência mais curta do que as provenientes de culturas mais velha, em fase estacionária ou decrescente; a composição do meio: quanto mais este for semelhante ao meio de origem, mais curto será o tempo de adaptação. 7 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fase Log Log ou exponencial: nesta etapa, as células estão plenamente adaptadas, absorvendo os nutrientes, sintetizando seus constituintes, crescendo e se duplicando. A taxa de crescimento exponencial é variável, de acordo com o TG (tempo de geração) do organismo em questão. 8 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fase estacionária Estacionária: Nesta fase, os nutrientes estão diminuindo e os produtos tóxicos estão mais abundantes. Nesta etapa não há um crescimento líquido da população, ou seja, o número de células que se divide é equivalente ao número de células que morrem. Nesta etapa as BACTÉRIAS ESPORULANTES produzem o seu endósporo. 9 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fase Declínio Declínio: As condições tornam-se cada vez menos favorável a divisão celular, fazendo com que muitas células percam sua capacidade de multiplicar e morram (apoptose celular). As células se transformam em diferentes formas, tornando- se de difícil identificação. O pequeno número de sobreviventes pode resistir durante, meses ou anos. 10 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição CRESCIMENTO EM MEIO RENOVADO Na indústria de alimentos onde se utilizam microrganismos para produzir certos gêneros alimentícios, como vinagre, pode ser útil manter a fase exponencial durante o maior tempo possível. Uma técnica bastante utilizada é renovar o meio constantemente. 11 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento microbiano 12 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento Fatores Intrínsecos: ????????????????? Fatores Extrínsecos: ??????????????? pH Atividade de água (Aw) Potencial de óxido-redução (Eh) Composição química Fatores antimicrobianos Estrutura biológica Interação entre microrganismos Temperatura Umidade Composição gasosa da atmosfera 13 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento – pH • Os microrganismos apresentam valores de pH, mínimo, ótimo e máximo para multiplicação. • A maioria dos microrganismos crescem melhor em pH próximo da neutralidade (6,5 a 7,5) 14 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento – pH • Maior tolerância a valores baixos de pH Bolores > leveduras > bactérias Microrganismos patogênicos apresentam uma faixa de pH mais estreita 15 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento – pH Alimentos pouco ácidos - pH > 4,5 = mais sujeitos ao crescimento microbiano Alimentos ácidos - pH entre 4,0 e 4,5 = predominância do crescimento de bolores e leveduras - poucas bactérias (láticas e espécies de Bacillus) • Alimentos muito ácidos - pH < 4,0 - crescimento de bolores e leveduras 16 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Aw = atividade de água; • Os microrganismos necessitam de água livre para suas atividades metabólicas. • Os microrganismos apresentam: Aw mínima Aw ótima Aw máxima 17 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Aw = atividade de água; • P = pressão parcial de vapor da água do alimento • P0 = pressão parcial de vapor da água pura. Aw varia de 0 a 1 18 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Aw = atividade de água; 19 Aw dependente de outros fatores = temperatura, disponibilidade de nutrientes, pH e outros Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento • Fatores Intrínsecos – Aa Atividade de Água da água Pura = 1,00 20 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento – Aa 21 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Aa e alteração nos alimentos: 22 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição 23 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição 24 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento • Diminuição da Aw = aumento da duração da fase lag e a diminuição do crescimento microbiano - adição de soluto = sal, açúcar, glicerol - remoçãoda água = desidratação e congelamento Redução da atividade de água no alimento 25 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento • Fatores Intrínsecos – Potencial redox (Eh) medido em mV • Aeróbios Eh + presença de oxigênio na faixa de +350 a +550 mV\ • Anaeróbios Eh – ausência de oxigênio ou na faixa de + 30 a -550 mV • Facultativos + 100 a – 350 mV 26 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Potencial redox (Eh) medido em mV • Facilidade com que determinado substrato ganha ou perde elétrons • Substrato perde elétrons Oxidado • Substrato ganha elétrons Reduzido • Transferência de elétrons de um composto para outro gera = diferença de potencial (mV) 27 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Potencial redox (Eh) medido em mV • Quanto mais oxidado = mais positivo • Substrato mais reduzido = mais negativo 28 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição 29 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Divisão em relação ao oxigênio 30 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores Intrínsecos – Conteúdo de nutrientes • Carboidratos, aminoácidos, vitaminas.. • ENERGIA = açúcar, álcool, aminoácido, amido, celulose, gordura; • NITROGÊNIO = aminoácidos, peptídeos, proteínas; • MINERAIS = sódio, potássio, cálcio, magnésio, ferro, cobre, manganês, fósforo, zinco, enxofre, cobalto e molibidênio. 31 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento • Fatores Intrínsecos – Constituintes antimicrobianos • Cravo-da-índia (eugenol) • Canela (aldeído cinâmico) • Alho (alicina) 32 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores intrínsecos Fatores antimicrobianos Naturais: Mantém a estabilidade de alguns alimentos contra ataques de microorganismos, retardando ou inibindo a multiplicação bacteriana. Condimentos: óleos essências (eugenol no cravo, alicina no alho, isotimol no orégano etc..) Ovo: A clara contem diversos agente antimicrobianos (lisozima,avidina etc..) alem do pH desfavorável a multiplicação (9 a 10). Leite do gado: Contem substancias antimicrobianas naturais, especificas e inespecíficas ( Imunoglobulinas, fator complemento, macrófagos e linfócitos) 33 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores intrínsecos Fatores antimicrobianos Naturais: 34 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores intrínsecos Fatores antimicrobianos Naturais: 35 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento • Fatores Intrínsecos – Estruturas biológicas (barreira mecânica) • Película das frutas; cascas de sementes e nozes, casca do ovo etc., 36 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores Intrínsecos Microbiota do alimento • Ex. Bactérias láticas inibem o desenvolvimento de patógenos por produzirem ácido lático. 37 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores intrínsecos Interações entre microorganismos: Produção de metabólitos. Ex bactérias lácticas.( pH), certas leveduras ( pH) Estreptococos e lactobacilos produzem água oxigenada que é inibidor para muitas bactérias. Muitos microorganismos produzem substancias bactericidas ( bacteriocinas) Exclusão competitiva. Ex: Usado no controle de contaminação de aves por patógenos como Salmonella e Campylobacter. 38 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores Extrínsecos Temperatura 39 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento • Fatores extrínseco – Umidade relativa (UR) • A UR influencia diretamente a Aa – Presença de gases no meio • Atmosfera controlada 40 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento Psicrotróficos Pseudomonas, Alcaligenes, Flavobacterium, Micrococcus. Mesófilos A maioria das espécies Maior parte dos patógenos Termófilos Algumas espécies de Bacillus e Clostridium 41 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Taxa de crescimento microbiano em função da temperatura 42 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Temperatura otima de crescimento: 43 43 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Temperatura otima de crescimento: • Bolores faixa ampla de temperatura crescem em temperatura de refrigeração • Leveduras crescem na temperatura de psicrotróficos e mesófilos 44 44 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento • Fatores extrínseco – Umidade relativa (UR) • A UR influencia diretamente a Aa • UReq = umidade relativa de equilíbrio UR > Aw absorção de água UR< Aw perda de água 45 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição 46 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Fatores que afetam o crescimento Presença de gases no meio • Atmosfera controlada ATMOSFERA MODIFICADA!!! Substituição parcial ou total do O2 por outros gases = prolonga o tempo de armazenamento dos alimentos. CO2; Nitrogênio. 47 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Teoria dos obstáculos de Leistner 48 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Microorganismos de importância em alimentos CONTAMINANTES OU ÚTEIS 49 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Microorganismos de importância em alimentos • Deteriorantes: – Pseudomonas, enterobacérias, Flavobacterium, bactérias láticas, Bacillus, Clostridium, bolores e leveduras. • Patogênicos: – Bacillus cereus, Clostridium botulinum e perfringens, Listeria monocytogenes, Salmonella spp.,Staphlylococcus aureos Aspergillus flavus. 50 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Microorganismos de importância em alimentos • Indicadores: – Bactérias do grupo coliformes, bolores e leveduras • Úteis: – Bactérias, bolores, leveduras… 51 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de NutriçãoBactérias ESPORO • Algumas espécies bacterianas, particularmente as G + dos gêneros Bacillus e Clostridium, tem a capacidade de formar organismos de resistência chamados de esporos ou de endósporos, visto que eles aparecem no interior da célula bacteriana. • Estrutura de resistência da bactérias formadas em condições adversas • Resistência ao calor, as radiações e agentes químicos • Gêneros importantes em alimentos:Bacillus, Clostridium. • Os esporos trazem todas as informações genéticas das células que lhes deram origem 52 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição Quando em ambiente propício, germinam e dão origem a células normais 53 Disciplina: Higiene e Microbiologia de Alimentos Escola de Ciências da Saúde Curso de Nutrição 54
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