resumo biotec g1

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Biotecnologia clássica: uso de organismos vivos para solucionar problemas ou desenvolver produtos novos;
	Leveduras e Bactérias -> Pão e vinho
	Manipulação: tentativas e erros / Não havia entendimento dos mecanismos
Biotecnologia atual: uso de células e moléculas biológicas para solucionar problemas ou produzir novos produtos;
	DNA, RNA e proteínas -> engenharia de tecidos, cultura de céls., bioprocessamento
	Manipulação: compreende-se o processo a nível molecular
			Prevê os efeitos e direciona as mudanças desejadas
	
Bioprocessamento: células vivas ou componentes bioquímicos para sintetizar produtos, degradar substâncias, produzir energia.
Engenharia genética: 
Natural: crossing over; fertilização; transformação;
Biodegradação: microrganismos ou enzimas usadas para degradar moléculas orgânicas
Biorremediação: - remover poluentes tóxicos do ambiente (solo e água)
		- metabolismo microbiano : decompõe os poluentes
IN SITU: atua no local onde ocorreu a contaminação
EXTRA SITU: quando o material poluído é removido para áreas específicas de tratamento.
Pq bactérias???
- adaptáveis a todos os ambientes de diferentes temperaturas
- extremófilos
Limitação: Micróbios que atuam em um determinado local, não atua em outro diferente
	- insere-se um gene de interesse de um determinado organismo que pode atuar no outro local
Tecnologia do DNA recombinante
Ligam segmentos de diferentes origens: isola a sequencia e insere no vetor
Gene com funções conhecidas transferidos para outros organismos;
	CRUZAMENTO SELETIVO
	ENGENHARIA GENÉTICA
	Todo organismo
	Célula ou molécula
	Conjunto de genes
	1 gene
	Dentro ou entre espécies (taxonômico)
	Sem limitação taxonômica
ENZIMAS:
ENDONUCLEASES DE RESTRIÇÃO:
- Reconhecem as sequências palindrômicas do DNA -> sequência que são lidas da mesma forma em diferentes direções
- Clivam a molécula nesta posição deixando uma extremidade coesiva (corte feito para ser complementar ao fragmento que será inserido)
DNA POLIMERASE:
- Sintetizam a nova fita à partir do primer;
- Só adicionam nucleotídeos na extremidade 3’ onde fica a mólecula de OH exposta.
RNA POLIMERASE: 
- lê a sequencia de DNA e sintetiza o RNA complementar
- precisam da região promotora
DNA LIGASE: 
- liga a extremidade coesiva dos fragmentos de DNA ou RNA entre si
TRANSCRIPTASE REVERSA:
- Lê a sequencia de RNA e sintetiza a sequencia de DNA complementar a partir do RNA mensageiro
- Produzidas por vírus de RNA
VETORES DE CLONAGEM
- carregam moléculas de DNA capazes de auto-replicação para o interior de uma célula hospedeira;
- precisam ser resistentes a drogas para ter certeza de que o vetor será incorporado à bactéria;
- precisam ter um sítio de clivagem para a endonuclease de restrição
PLASMÍDEO:
- é o DNA circular fora dos cromossomos das bactérias
Vantagens: além de serem pequenas, eles são replicados pelas células hospedeiras e passam para as células-filhas na divisão celular, mantendo o gene introduzido estável nas céls. descendentes.
VÍRUS:
- Combinam seu DNA com o do hospedeiro;
- Incorporam o DNA como se fossem deles próprios;
- Insere-se o gene no DNA do vírus, deixa ele levar o novo DNA para dentro da célula hospedeira e recombina seu DNA com o do hospedeiro.
Vantagens: grande especificidade pelo hospedeiro
- consegue inserir maiores fragmentos para dentro da célula.
COSMIDIAIS:
- Híbrido entre uma molécula de DNA de fago e uma de plasmídeo bacteriano
Vantagens: capacidade de se replicar autonomamente em E. Coli
	- podem acomodar inserções maiores;
	- aceitam inserções de DNA exógeno de 35 a 45 kb
CROMOSSOMOS ARTIFICIAL DE LEVEDURA:
- minicromossomo de levedura geneticamente construído
Vantagens: acomodam inserções de DNA exógeno de 200 a 500 kb
BAC’s CROMOSSOMOS ARTIFICIAL DE BACTERIAS
Vantagens: mais fáceis de construir que os de levedura
	- mto utilizado para estudo de grandes genomas
	- aceitam inserções de DNA exógeno de 150 a 300 kb 
INTRODUÇÃO DO VETOR PARA DENTRO DA CÉLULA
-Tratar a célula da bactéria com ClCa para criar poros na sua membrana possibilitando a entrada do plasmídeo
- ELETROPORAÇÃO: submeter as células ao choque; a idéia é a mesma.
CONCEITOS:
OPERON: unidade funcional na bactéria que possui 3 genes que codificam enzimas específicas nas bactérias que quebram toxinas;
PRIMER: qualquer pedaço de DNA que pareia as suas bases com a fita molde;
	- a extremidade 3’ tem que estar disponível para servir como ponto de inicio
OLIGONUCLEOTÍDEOS: sequencias curtas de DNA sintetizadas a partir do zero
	- é digitado no computador uma sequencia de oligonucleotideos desejada
SONDA: pedaço de DNA simples fita que só irá se hibridizar com o DNA de interesse (por causa da sequencia de bases – pareamento)
HIBRIDIZAÇÃO: duas fitas simples de DNA com bases complementares mantêm-se unidas para formar uma molécula de DNA fita dupla correspondente;
PCR
- Amplificação de sequencia de DNA in vitro
- Reproduz a habilidade natural de replicação
1º se determina o segmento de DNA que se deseja amplificar
2º síntese de 2 moléculas pequenas de fita simples complementares a cada uma das extremidades do segmento (primers)
INICIO:
PRIMERS + MOLECULA MOLDE + NUCLEOTIDEOS + TAZ POLIMERASE = todos no mesmo tubo
1º - Aquecimento a 95°C para desnaturar as fitas
2° - Diminuição da temperatura a 60°C. Nesta etapa as duas fitas IRIAM se ligar novamente, mas como tem muitos PRIMERS, eles que se ligam nos seus sítios complementares em cada uma das fitas antes
3º - TAC POLIMERASE começa a adicionar nucleotídeos para distender os primers ligado a cada uma das 2 fitas.
Por fim tem-se duas fitas duplas no 1º ciclo.
Acontece o mesmo com cada uma das fitas para os próximos ciclos.
ELETROFORESE
Separar os fragmentos.
Prepara-se o gel de agarose -> o DNA é introduzido em pequenos poços do gel -> corrente elétrica é aplicada -> o DNA migra até o eletrodo positivo -> como ele tem diferentes tamanhos, os menores chegam mais rapidamente ao outro polo enquanto que os maiores vao ficando mais próximos do polo negativo -> após eles são corados para tornarem-se visíveis.
PARA DESCOBRIR A SEQUENCIA DE INTERESSE??
Técnica de Blotting
Cobrir o gel de agarose com uma membrana e papel absorvente -> os fragmentos do gel são transferidos na mesma disposição .
Nesta membrana eles podem ser hibridizados às sondas para checar a presença de segmentos específicos
	Southern Blotting: transferência do DNA
	Nothern Blotting: transferencia do RNA
	Westhern Blotting: transferencia de proteinas