pops todos juntos

Prévia do material em texto

Procedimento Operacional Padrão
POP n° 01
	Título: Caracterização de taninos.
	Revisão: Carolina Finder
	Data: 24/04/18 
1. Objetivo
Estabelecer os procedimentos para a execução caracterização de taninos em drogas vegetais no laboratório de Farmacognosia da Univille. 
2. Procedimentos: 
2.1 Reações qualitativas de taninos
2.1.1 Extração: 
Pesar a droga vegetal transferir para um béquer;
Colocar volume indicado da solução extrativa no béquer com a droga vegetal;
Preparar por decocção durante 15 minutos;
Resfriar no banho de gelo;
Filtrar.
2.1.2 Ensaios:
a) Reações da gelatina:
Adicionar 0,5 mL do extrato em um tubo de ensaio;
Adicionar solução de gelatina 2,5% gota a gota;
b) Reação com sais alcalóides:
Adicionar 0,5 mL do extrato em um tubo de ensaio;
Adicionar 1-2 gotas de sulfato de estricnina 0,1%;
c) Reação com sais de ferro:
Adicionar 0,5 mL do extrato em um tubo de ensaio;
Adicionar 2 mL de água destilada;
Adicionar 1-2 gotas de solução de cloreto férrico 1% em metanol.
d) Reação de acetato de chumbo:
Adicionar 0,5 mL do extrato em um tubo de ensaio;
Adicionar 1 mL da solução de ácido acético 10%;
Adicionar 0,5 mL de solução de acetato de chumbo 10%.
e) Reação com vanilina clorídrica: 
Adicionar 1ml do extrato em um tubo de ensaio;
Adicionar 5 gotas de solução de vanilina 1%;
Adicionar 0,5 mL de HCl concentrado.
f) Reação de ácido nitroso:
Adicionar 1 mL do extrato em uma cápsula de porcelana;
Adicionar 4 mL de água;
Adicionar alguns cristais de nitrito de sódio;
Adicionar 1-2 gotas de uma solução de HCl 10% - NÃO AGITAR.
2.2 Separação de tanino hidrolisáveis e condensados – Reação de Stiasny
Preparo do reativo de Stiasny:
Adicionar 5 mL de HCl concentrado;
Adicionar 10 mL de formol; 
Submeter ao refluxo por 20 minutos;
Resfriar em banho de gelo.
2.2.2 Extração: 
Adicionar 15 mL do reativo de Stiasny a droga vegetal;
Misturar;
Submeter ao refluxo por 30 minutos;
Resfriar em banho de gelo.
Detecção de taninos hidrolisáveis:
Transferir 10 mL do filtrado para um tubo de ensaio;
Adicionar 2g de acetato de sódio;
Adicionar 5 gotas de solução de cloreto férrico 1% em metanol.
	Procedimento Operacional Padrão
POP n° 02
	Título: Extração de droga vegetal
	Revisão: Carolina Finder 
	Data: 24/04/18 
1. Objetivo
Estabelecer os procedimentos para a execução de extração de droga vegetal no laboratório de Farmacognosia da Univille.
2. Procedimentos: 
2.1 Maceração: 
Pesar a amostra conforme prescrito e transferir para um erlenmeyer;
Colocar em contato com a quantidade definida de líquido extrator durante 10 minutos;
Agitar periodicamente sob abrigo de luz e em temperatura ambiente;
Filtrar para uma proveta, prensar o marco e anotar o volume filtrado;
Completar o volume exigido usando o mesmo líquido extrator.
2.2 Infusão:
Pesar a amostra conforme prescrito e transferir para um erlenmeyer;
Aquecer o líquido extrator em um béquer sobre a chapa de aquecimento durante 10 minutos até a ebulição;
Verter o líquido extrator aquecido sobre a amostra;
Tampar a amostra com o filtro de relógio;
Deixar em repouso durante 10 minutos;
Resfriar o sistema no banho de gelo;
Filtrar para uma proveta, prensar o marco e anotar o volume filtrado;
Completar o volume exigido usando o mesmo líquido extrator.
2.2 Decocção: 
Pesar a amostra conforme prescrito e transferir para um erlenmeyer;
Colocar em contato com a quantidade definida de líquido extrator;
Aquecer na chapa de aquecimento durante 10 minutos até a ebulição;
Resfriar o sistema no banho de gelo;
Filtrar para uma proveta, prensar o marco e anotar o volume filtrado;
Completar o volume exigido usando o mesmo líquido extrator.
2.3 Refluxo: 
Limpar um balão com água; detergente e enxaguar;
Borrifar álcool 70% no balão limpo;
Pesar a amostra conforme prescrito;
Colocar a amostra em um balão com a quantidade definida do líquido extrator e 3 bolinhas de vidro;
Inserir o balão no aparelho de refluxo e extrair durante 10 minutos;
Resfriar o sistema no banho de gelo;
Filtrar para uma proveta, prensar o marco e anotar o volume filtrado;
Completar o volume exigido usando o mesmo líquido extrator.
	Procedimento Operacional Padrão
POP n° 03
	Título: Análise por cromatografia de camada delgada (CCD)
	Revisão: Carolina Finder
	Data: 24/04/18
1. Objetivo
Estabelecer os procedimentos para a execução Análise por cromatografia de camada delgada (CCD) no laboratório de Farmacognosia da Univille. 
2. Procedimentos: 
Preparar o eluente como prescrito diretamente na cuba;
Aplicar com o auxílio de capilares as amostras na placa;
Verificar a concentração na câmera de UV;
Colocar a placa em um ângulo de 45o na cuba; 
Retirar quando o eluente chegar no front;
Levar a placa para a capela para eliminar o solvente com a pistola de aquecimento;
Revelar em UV e revelar empregando revelador químico;
Ler a placa no ultravioleta e no visível.
	Procedimento Operacional Padrão
POP n° 04
	Título: Caracterização de cumarinas. 
	Revisão: Carolina Finder
	Data: 24/04/18 
1. Objetivo
Estabelecer os procedimentos para a execução da caracterização de cumarinas em drogas vegetais no laboratório de Farmacognosia da Univille. 
2. Procedimentos: 
Extração Citrus limon (L.):
Calcular e pesar a droga vegetal e transferir para um erlenmeyer;
Macerar em etanol comercial uma pequena quantidade de droga vegetal por alguns minutos;
Filtrar.
Reações cromáticas:
Adicionar 2-3 gotas de extrato sobre o vidro de relógio, mantendo-o sobre a superfície branca.
Observar a cor do estrato;
Adicionar 1 gota de solução NaOH 10%;
Observar alteração de cor;
Adicionar 3 gotas de solução de HCl 10% e observar.
Luz Uv:
Observar em um tubo de ensaio o extrato obtido sob Luz UV 366 nm;
Adicionar algumas gotas do extrato sobre uma tira de papel filtro;
Observar a mancha sob Luz UV 366 nm;
Fluorescência:
Submeter ao aquecimento a droga vegetal em pó em um béquer coberto com um vidro relógio por 10 minutos para promover a sublimação das cumarinas;
Dissolver o sublimado em 0,5 mL de metanol;
Adicionar 5 gotas em um único ponto da solução metanólica sobre o papel filtro;
Secar, juntar uma gota da solução alcoólica de hidróxido de sódio 10% e secar novamente; 
Cobrir uma das manchas com papel preto;
Expor a luz UV 366 nm;
Observar continuamente durante 1 minuto;
Descobrir a outra mancha e observar.
Espectroscopia:
Levar o extrato em um tubo de ensaio para o espectrofotômetro;
Lavar a cubeta com o solvete e depois com a amostra;
Ler a amostra no espectrofotômetro;
Adicionar na amostra NaOH 10%, homogeneizar;
Refazer a leitura no espectrofotômetro.
	Procedimento Operacional Padrão
POP n° 05
	Título: Caracterização de flavonóides
	Revisão: Carolina Finder
	Data: 24/04/18 
1. Objetivo
Estabelecer os procedimentos para a execução caracterização de flavonoides em drogas vegetais no laboratório de Farmacognosia da Univille. 
2. Procedimentos: 
2.1 Extração 
Pesar a quantia requerida da droga vegetal e transferir para um béquer;
Extrair a droga vegetal com solução de Etanol 70% com o volume suficiente para cobrir o mesmo sob aquecimento por 1 a 2 minutos;
Filtrar.
Reação geral para compostos polifenólicos:
Reação com cloreto férrico: 
Transferir 1 mL do extrato filtrato para um tubo de ensaio;
Adicionar 1-2 gotas de solução de cloreto férrico 2,5%;
Observar se há desenvolvimento de cor.
Reações características para flavonóides:
Reação de cianidina ou shinoda: 
Transferir 3 mL do extrato filtrado para cápsula de porcelana;
Aquecer até a secura;
Resfriar em banho de gelo;
Retomar 1,5 de metanol e verter para um tubo de ensaio grande;
Adicionar cuidadosamente 1-2 fragmentos de magnésio - CUIDAR COM POSSÍVEIS PROJEÇÕES;
Verter cuidadosamente pelas paredes do tubo de ensaio cerca de 0,5 mL de HCl concentrado;
Observara coloração.
	Flavonóide
	Coloração
	Flavona
	Amarelo ou laranja a vermelho
	Flavona e Diidroflavonol
	Vermelho a vermelho-sangue
	Flavanona
	Vermelho a violeta
	Derivados antociânicos 
	Vermelho tornando-se rosa
	Chalconas, auronas, diidrochalconas, isoflavonas
	Sem coloração (reação negativa)
	Quando o Mg é substituído por Zn, somente diidroflavonóis reagem positivamente.
Reação oxalo bórica ou taubock:
Transferir 2 mL do extrato filtrado para cápsula de porcelana;
Aquecer até a secura;
Resfriar em banho de gelo;
Adicionar ao resíduo 0,5 mL de solução de ácido bórico 3% e 0,5 mL da solução de ácido oxálico 3%;
Aquecer novamente até a secura;
Resfriar em banho de gelo;
Dissolver o resíduo em 1 mL de álcool etílico;
Verter a solução etérea para um tubo de ensaio;
Verificar a fluorescência.
	Flavonóide
	Coloração
	Positivo para flavonóis 
	Laranja ao vermelho
Reação com hidróxido de sódio:
Transferir 0,5 mL do extrato para um tubo de ensaio;
Adicionar 5 gotas de NaOH 10%;
Verificar a coloração.
	Flavonóide
	Coloração
	Flavonas
	Amarelo, algumas vezes também desenvolvem colorações avermelhadas
	Flavonóis
	Amarelo e laranja-escuro (castanho)
	Isoflavonas
	Vermelho
	Chalconas
	Púrpura
	Antocianinas
	Azul
Reação com cloreto de alumínio:
Preparar 2 pedaços de papel filtro;
Pingar 1 gota do extrato em cada pedaço de papel;
Colocar em uma das manchas 1 gota de solução de cloreto de alumínio a 2%;
Observar os dois papéis sob luz ultravioleta.
	Flavonóide
	Coloração
	Flavonas, flavonóis 
	Fluorescência intensa
	Procedimento Operacional Padrão
POP n° 06
	Título: Caracterização de compostos fenólicos. 
	Revisão: Carolina Finder
	Data: 24/04/18 
1. Objetivo
Estabelecer os procedimentos para a execução da caracterização de compostos fenólicos em drogas vegetais no laboratório de Farmacognosia da Univille. 
2. Procedimentos: 
Extração de Psidium guajava:
Calcular e pesar a DV;
Extrair o farmacógeno por decocção com 10 mL de Etanol 70% durante 1 a 2 minutos;
Filtrar a frio.
Extração de Rhamnus purshiana:
Calcular e pesar a DV;
Extrair o farmacógeno por maceração com 5 mL de Diclorometano, 5 minutos sob agitação intensa;
Filtrar.
Caracterização:
Reação com cloreto férrico:
Em um tubo de ensaio reagir 1 mL da solução extrativa com uma solução de cloreto férrico 2,5%;
Observar a formação de cor.
Reação de Borntrager: 
Em um tubo de ensaio reagir 1 mL da solução extrativa com uma solução de NH3:H2O (1:1);
Agitar vigorosamente;
Observar a formação de cor.
3. Resultados:
	Reação
	Psidium guajava
	Rhamnus purshiana
	Cloreto férrico
	Preto
	Imiscível
	Borntrager
	Laranja
	Laranja