Métodos para quantificar o crescimento

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Métodos para quantificar o crescimento
Quantificação direta: 
contagem em placas. Técnica mais utilizada na determinação do tamanho da população bacteriana.
vantagem: qualificação de células viáveis.
desvantagem: tempo (±24 h para o aparecimento das colônias).
filtração. Nº de bactérias = pode ser utilizado o método de filtração para a sua contagem.
Concentração de bactérias sobre a superfície de uma membrana de filtro de poros muito pequenos após a passagem de um volume de 100 ml de água. filtro posteriormente transferido para uma placa de petri contendo meio sólido.
método do número mais provável. •utilizado para microrganismos que não crescem bem em meio sólido.
A) diluição a partir de um alto volume de inóculo (ex. 10 ml)b) diluição a partir de um médio volume de inóculo (ex. 1 ml)c) diluição a partir de um baixo volume de inóculo (ex. 0,1 ml)d) contagem do nº de tubos positivose) estimativa do nº de células/ml de bactérias
contagem direta ao microscópio. •um volume conhecido de suspensão bacteriana é colocado em uma área definida da lâmina de microscópio.
A amostra pode ser corada ou analisada a fresco. utilizam câmaras de contagem
Desvantagens:
•não separa células mortas e vivas
•pode haver erros de contagem
•difícil contagem para bactérias móveis
quantificação indireta:
turbidimetria. Monitoramento do crescimento bacteriano através da turbidez
•espectrofotômetro (540 -660 nm) a quantidade de luz que atravessa o detector é inversamente proporcional ao nº. De bactérias.
atividade metabólica. Quantidade de um certo produto (como ácido ou co2) é diretamente proporcional ao número de células bacterianas.
peso seco. •principalmente para fungos filamentosos
A) fungo é removido do meio por filtração b) seco em dessecadorc) posterior pesagem
Coliformes totais: grupo de bactérias constituído por bacilos gram-negativos, aeróbios ou anaeróbios facultativos, não formadores de esporos, capazes de crescer na presença de sais biliares e que fermentam a lactose com produção de aldeído, ácido e gás a 35ºcem24-48horas.ex.escherichia,citrobacter,enterobactereklebsiella. Coliformes fecais ou coliformes termotolerantes: são coliformes capazes de se desenvolver e fermentar a lactose com produção de ácido e gás à temperatura de 44,5°cem24horas. O principal componente deste grupo é e.coli, sendo que alguns coliformes do gênero klebsiella e citrobacter também a presenta mesma capacidade.
Fatores necessários para o crescimento
Fatores físicos:
temperatura. A maioria dos microrganismos cresce bem nas temperaturas ideais para os seres humanos. Temperatura de crescimento mínima:Temperatura de crescimento ótima:
Temperatura de crescimento máxima:
•Temperatura onde a espécie é capaz de crescer
•onde a espécie apresenta melhor crescimento
•temperatura, onde ainda é possível o crescimento
Psicrófilos: crescem em baixas temperaturas (-10 a 15°C).
Mesófilos: crescem em temperaturas moderadas (15 a 40°C).
Termófilos: crescem em altas temperaturas (40 a 70°C)
Termófilosextremos:(70 a 110°C).
ph. Refere-se a acidez ou a alcalinidade de uma solução;
•Maioria dos microrganismos cresce melhor perto da neutralidade (ph 6,5 –7,5);
•Poucas bactérias são capazes de crescer em ph ácido (como ph 4,0)
pressão osmótica (ex. Concentração de sal).	Psicrófilos: crescem em baixas temperaturas (-10 a 15°C).
Mesófilos: crescem em temperaturas moderadas (15 a 40°C).
Termófilos: crescem em altas temperaturas (40 a 70°C)
Termófilosextremos:(70 a 110°C).
fatores químicos:
água. Essencial para os microrganismos-disponibilidade variável no ambienteambiente com < concentração de água:
•desenvolvem mecanismos para obter água através do aumento da concentração de solutos internos seja pelo bombeamento de íons para o interior celular ou pela síntese de solutos orgânicos (açúcares, alcoóis ou aminoácidos).
fontes de carbono e nitrogênio. Essencial para a síntese de todos os compostos orgânicos necessários para a viabilidade celular (elemento estrutural básico para os seres vivos) organismos quimio-heterotróficos: obtém c a partir de materiais orgânicos como proteínas, carboidratos e lipídeos. organismos quimioautotróficos organismos fotoautotróficos p
Nitrogênio utilizado para sintetizar os grupos aminos presentes nos aminoácidos.enxofre
•utilizado na síntese de aminoácidos contendo s e de vitaminas (tiamina e biotina) fósforo
•essencial para a síntese dos ácidos nucléicos e para os fosfolipídios componentes da membrana celular.
minerais.
oxigênio. Extremamente importante no desenvolvimento microbianoos organismos classificados em:1. Aeróbios
2. Anaeróbios
fatores orgânicos.
MEIO DE CULTIVO
Meio de cultura: material nutriente preparado no laboratório para o crescimento de microrganismos.
Cultura: microrganismos que crescem e se multiplicam no meio de cultura.
Meio definido:Toda a composição química é conhecida.
Meio complexo: composição química não conhecida (composto por nutrientes como extrato de levedura, de carne ou de plantas).
MEIO SELETIVO:
•favorece o crescimento de uma determinada bactéria de interesse, impedindo o crescimento de outras bactérias.ex: ágar sabouraud dextrose, ph 5,6, é utilizado no crescimento de fungos que são favorecidos, em relação as bactérias, pelo baixo ph.
MEIO DIFERENCIAL:
•facilita a identificação de um determinado organismo.ex: meio ágar-sangue, utilizado para a identificação de bactérias capazes de destruir células sangüíneas (anel claro em torno da colônia).
MEIO DE ENRIQUECIMENTO:
•favorece o desenvolvimento de uma população bacteriana que esta em desvantagem entre outras populações.
MEIOS REDUTORES:
•meios com reagentes, como o tioglicolatode sódio, que é capaz de se combinar com o oxigênio dissolvido eliminando este elemento do meio de cultura (específico para microrganismos anaeróbicos).
Por que controlar o crescimento microbiano? O bem estar da humanidade depende em grande parte da capacidade do homem em controlar a população dos microrganismos ,visando:
Prevenir a transmissão de doenças. 
Evitar a decomposição de alimentos. 
Evitar a contaminação da água e do ambiente.
Esse controle de microrganismos é possível pela ação de agentes físicos e químicos, que possuem propriedades de matar a célula microbiana, ou de impedir a sua reprodução.
Controle de microrganismosas:substâncias químicas que matam os microrganismos ou previne o seu crescimento são chamados de agentes antimicrobianos (antibacterianos, antifúngicos, antivírus, antiprotozoários).
O método de escolha depende do tipo de material que contém o microrganismo:
Meio de cultura. 
Produtos farmacêuticos. 
Instrumentos cirúrgicos.
Sala de cirurgia.
Alimentos.
Definições:
Esterilização. Destruição de todas as formas de vida microbiana, incluindo os endosporos(formas mais resistentes).
Método mais comum: Aquecimento
Desinfecção. Processo que promove a inibição, morte ou remoção de vários microrganismos patogênicos e saprófitas, emeliminar todas as formas de vida.
Somente a destruição dos patógenos vegetativos e não dos endosporos.
Métodos:
Substâncias químicas.
Radiação ultravioleta.
Anti-sepsia. Quando estetratamento é para um tecido vivo.
Produto químico=anti-séptico.
Anti-Sépticos: menos tóxicos que os desinfetantes
Sanitização. Processo que leva à redução dos microrganismos, a níveis seguros, de acordo com os padrões de saúde pública(elimina99,9%dasformasvegetativas).
Degerminação. Remoção mecânica dos microrganismos ,em vez da morte, em uma áre alimitada.
Mata somente os microrganismos e não os endosporos
TAXA DE MORTE MICROBIANA
DEFINIÇÃO:A morte microbiana ocorre na forma exponencial. Após uma rápida redução da população, a taxa de morte torna-se mais lenta devido à sobrevivência de células mais resistentes.
PADRÃO DE MORTE DE UMA POPULAÇÃO MICROBIANA
O critério de morte de um microrganismo em microbiologia é baseado em uma única propriedade: a capacidade de se reproduzir.A morte de um microrganismo é definida como a perda da capacidade de reprodução
3°minuto-9.000 bactérias mortas,1.000 sobreviventes.
4°minuto-900 bactérias mortas, 100 sobreviventes.
5°minuto-90 bactérias mortas,10 sobreviventes.
6°minuto-9 bactérias mortas,1 sobrevivente.
A avaliação da eficiência de um agente microbicida pode ser testada cultivando uma amostra do material tratado para determinar o número de sobreviventes.
FATORES QUE INFLUENCIAM O CONTROLE DE MICRORGANISMOS
Tamanho da população. Quanto>a população microbiana> o tempo de tratamento.
Naturezada população. Presença de Endosporos: mais resistentes.
Diferentes estágios de crescimento: células jovens mais suscetíveis.
Presença de Mycobacterium(mais resistentes).
Concentração dos agentes. Quanto+ concentrado o agente>a eficiência.
Exceção: álcool.
Relação não linear
Tempo de exposição. De acordo com a OMS(Organização Mundial da Saúde) o tempo mínimo de exposição=30minutos(chance de haver sobreviventes de1em106 indivíduos).
Temperatura. Temperaturas mais altas: mais eficiência no tratamento.
1ºCaumenta 10 vezes a eficiência(potencializa o controle e em conjunto com o agente pode-se diminuir sua concentração).
Condições ambientais. Presença de material orgânica: inibe a ação dos antimicrobianos químicos.
pH do meio e calor: ácido(potencializa o resultado).