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Microbiologia Área da ciência que dedica-se ao estudo de organismos que somente podem ser visualizados ao microscópio Ex. Procarióticos (bactérias, archaeas), Eucarióticos (algas, protozoários, fungos) e também seres acelulares (Vírus) Definição (clássica) Por que estudar Microbiologia? Microbiota normal (1014 microrganismos) (90% do número de células do organismo humano) (500 a 1000 espécies) Estamos em contato íntimo com os micro- organismos; Relacionados a saúde e ao ambiente; Desempenham importante papel na produção de alimentos e medicamentos; Fornecem modelos úteis para muitos processos vitais que todos os organismos realizam (Biologia Celular) Por que estudar Microbiologia? Micro-organismos e Humanos Pouquíssimos micro- organismos são sempre patogênicos Alguns micro-organismos são potencialmente patogênicos Maioria dos micro-organismos são não patogênicos Infecções assintomáticas Doenças clássicas clinicamente Doenças menos severas Conceito iceberg das doenças infecciosas Agricultura Alimentos Doenças Energia/Ambiente Biotecnologia Microbiologia x Saúde Pública Zoonoses 1. Ambientes gelados (Psicrófilos) Ex. Polaromonas vacuolata (-4ºC) 2. Fontes termais (mar e superficie) (Termófilos e Hipertermófilos) Ex. Methanopyrus kandleri, Pirolobus fumarri (105-113ºC), Thermus aquaticus (70ºC) 3. Fontes sulfúricas (Acidófilos) Ex. Sulfolobus acidocaldarus 4. Lagos salgados (Halófilos) Ex. Haloferax volcanii, Halobacterium salinarum 5. Lagos alcalinos (Alcalinófilos) Ex. Natronobacterium gregoryi Ambientes extremos Microbiologia Básica Morfologia, Fisiologia, Genética, Taxonomia, Ecologia, etc) Microbiologia Aplicada Ciência dinâmica com ramificações em todos os aspectos da vida humana Ex. Microbiologia Veterinária, Zootécnica, Médica, Agrícola, Alimentos, Industrial, etc) Nomes da Microbiologia Girolano Fracastoro (1483 – 1553) Hans & Zacharias Jensen (1595) Robert Hooke (1635 – 1703) Nomes da Microbiologia A. van Leeuwenhoek “Animálculas” (1632-1723) Nomes da Microbiologia Louis Pasteur (1822-1895) Inexistência de geração espontânea Teoria microbiana das doenças Fermentação e decomposição (ação de microrganismos) Pasteurização Vacina anti-rábica, carbúnculo hemático Nomes da Microbiologia Estudo do antraz - Postulados de Koch Técnicas para obtenção de culturas puras Técnicas de coloração Estudos com Mycobacterium tuberculosis (Bacilo de Koch) Descrição de Vibrio cholerae 1905 - Prêmio Nobel de Medicina Robert Koch (1843-1910) Nomes na Microbiologia Semelhanças entre Archaea e Eucariotos Eubactérias Archaea Eucariotos Núcleo Não Não Sim (envolvido por membrana) Nucleossomos / histonas Não SIm SIm Operons / RNAm policistrônicos SIm SIm Não Introns Não Não SIm proteína de ligação à TATA box Não SIm SIm Organelas Não Não SIm: mitocôndrias, lisossomos, retículo endoplasmático, etc. Cromossomos Um, circular Um, circular Mais que um RNA polimerase Uma: simples Mais que uma: complexas Mais que uma: complexas Aminoácido de iniciação protéica N-formil metionina Metionina Metionina Sensibilidade da síntese de proteína à toxina diftérica Insensível Sensível Sensível Peptidoglicano Sim Não Não Síntese de proteína fatores de iniciação proteínas ribossômicas fatores de alongamento os dos Archaea são mais semelhantes àqueles dos eucariotos do que aos de eubactérias Morfologia Bacteriana Tamanho Forma Agrupamento Morfologia colonial redonda irregular filamentosa rizóide enrolada BORDA FORMA filamentosa lisa ELEVAÇÃO Ondulada lobada plana convexa elevada umbonada Tamanho (0,2 – 4,0 μm) Semelhante ao tamanho de uma mitocôndria ou plasto Teoria simbiôntica (Origem dos eucariotos) Thiomargarita namibiensis (Pérola de enxofre) Schulz, H. N. et al. (1999). Science, 284:493-495 - Fig. 1. Thiomargarita namibiensis. (A) The white arrow points to a single cell of Thiomargarita, 0.5 mm wide, which shines white because of internal sulfur inclusions. Above there is an empty part of the sheath, where the two neighboring cells have died. The cell was photographed next to a fruit ßy (Drosophila viriles) of 3 mm length to give a sense of its size. (B) A typical chain of Thiomargarita as it appears under light microscopy. (C) At the left end of the chain there are two empty mucus sheaths, while in the middle a Thiomargarita cell is dividing. (D) Confocal laser scanning micrograph showing cytoplasm stained green with ßuorescein isothiocyanate and the scattered light of sulfur globules (white). Most of the cells appear hollow because of the large central vacuole. (E) Transmission electron micrograph of the cell wall [enlarged area in (D)] showing the thin layer of cytoplasm (C), the vacuole ( V), and the sheath (S). Cocos Micrococcus (M. luteus, M. glutamicum) Neisseria (N. meningitidis, N. gonorrhoeae) Streptococcus ( S. pyogenes, S. equi, S. agalactiae, S. pneumoniae, S. bovis, etc). Staphylococcus (S. aureus, S. hyicus, S. epidermidis, etc) Enterococcus, Lactococcus, Sarcina, Gaffkia, Bacilos ou Bastonetes Enterobacteriaceae (Escherichia coli, Salmonella, Enterobacter, Klebsiella pneumoniae, etc) Bacillus (B. anthracis, B. cereus, B. thuringiensis, B. licheniformis, B. polymyxa, etc) Clostridium (C. botulinum, C. tetani, C. chauvoei, C. perfringens, etc) Corynebacterium (C. diphteriae, C. pyogenes, C. renale, etc) Lactobacillus Bacilos ou Bastonetes paliçada “Cocobacilos” Brucella (B. abortus, B. melitensis, B. suis, B. canis, B. neotomae, B. maris) Campylobacter (C. fetus, C. jejuni, C. coli, etc) Vibrio (V. cholerae, V. parahaemolyticus, etc) Vibrios Espirilos e Espiroquetas Spirillum sp, Treponema pallidum, T. bryanti, Borrelia recurrentis (Doença de Lyme), Leptospira. Variações na Forma Formas de Involução Pleomorfismo Pleomorfismo (Bacteroides fragilis) Coloração de Gram (Hans Christian Gram - 1884) Divide bactérias em dois grupos Gram Positivas Gram Negativas Destaca aspectos tintoriais e morfológicos Importância Prática ???? Coloração de Gram Gram negativo Gram positivo COLORAÇÃO DE GRAM Fixar esfregaço Corar com cristal violeta Descorar com álcool Lugol Corar com fuccsina Corar com Fucsina (corante contraste) Algumas características comparativas das bactérias Gram positivas e Gram negativas Gram Positiva Gram Negativa (Staphylococcus aureus) Gram Positiva (Streptococcus pyogenes) (Streptococcus pneumoniae) Gram Positiva Ary Fernandes Junior (Bacillus anthracis) (Clostridium tetani) Gram Positiva (Corynebacterium diphtheriae) Gram Positiva (Escherichia coli) Gram Negativa (Neisseria gonorrhoeae) (Moraxella sp) Gram Negativa Coloração de Ziehl-Neelsen Mycobacterium, Nocardia (Bacilos Álcool Ácido Resistentes = BAAR) (Mycobacterium tuberculosis) Nocardia sp (Mycobacterium bovis (BCG) Coloração de Ziehl-Neelsen Mycobacterium avium subsp. intracellulare Amostras Clínicas Exame Direto para pesquisa de BAAR (BK) (Ziehl-Neelsen ou Kinyoun) Limite de detecção -104 bacilo/mL material Kinyoun (2 a 3 amostras) Frasco estéril boca larga Coloração de Ziehl-Neelsen Estrutura da célula bacteriana Relativamente mais simples que de células eucariotas Eucariotos Procariotos Célula Bacteriana Genérica Essenciais Não Essenciais Externas Internas Divisão entre as Estruturas Estruturas Externas O que são? 3 -12 μm 12 - 30 nm Pseudomonas putida Flagelo Composição Química Protéica Antígeno H Função Motilidade (Flagelina – 20 a 40 kD) Gancho Filamento = Haste Corpo Basal Parede Bacteriana Membrana externa Peptidoglicano Membrana Plasmática Anéis L P S M Genes - hag, mot, fla Gram positiva Gram negativa Partes e funcionamento do flagelo Partes e funcionamento do flagelo Movimento Disposição Monotríqua ( Pseudomonas aeruginosa) Lofotríqua (Helicobacter pylori) Anfitríqua (Spirillum sp) Peritríqua (Salmonella) Filamentos axiais Visualização Direta ou Indireta cultivo em meio semi-sólido Fímbria e Pili O que são e funções Fimbria Fimbrias Adesinas Especificidade para algumas células hospedeiras E.coli K88-Leitões, K99-Bezerros, CFAI e CFAII-Humanos) Antígenos de Colonização Mecanismos de adesão bacteriana a superfícies de células hospedeiras. (a) Pili ou fímbrias. Eles são constituídos por uma subunidade de repetição estrutural e uma proteína na sua ponta que medeia o reconhecimento de um motivo de glicano específico da célula hospedeira. (b) adesinas afimbrial são proteína integrais de parede de células bacterianas ou glicoproteínas que envolvem diretamente hospedeiro receptor de células para promover a colonização. Fímbrias (E.coli em intestino de rato) Fímbrias em bactérias celulolíticas do rúmen Prébiótico = O que é? Klebsiella, Enterobacter, Streptococcus, Leuconostoc, etc Método de Hiss Cápsula Klebsiella pneumoniae (Aspecto mucóide (molhado) de colônias) Bacillus anthracis Antígeno K Proteção contra Fagocitose Mecanismo: Incompatibilidade da Natureza hidrofílica da cápsula e natureza hidrofóbica da membrana do fagócito Composição Química (Polissacarídica) B. anthracis (Peptídica) Membrana Plasmática Diferenças Funções (Psicrófilas) Sem esteróis (hopanóides) Parede Bacteriana Mycoplasma, Ureaplasma, Formas L, Halófilas (sem parede) Funções Peptidoglicano Dois Aminoacúcares Um Tetrapeptídeo Etapas da síntese do peptidoglicano = Bactoprenol fosfato PBP=Protein Binding Penicilin Parede de Gram Positiva e Negativa Gram Positiva Adesinas Antígenos LPS Gram Negativa Bacilo Gram negativo Membrana externa com lipopolissacarídeo (LPS) (Endotoxina-Fator de Virulência das Gram negativas) Peptideoglicano Composição de uma unidade de LPS Lipídeo A (Parte tóxica) Polissacarídeo Responsável por muitas manifestações sistêmicas das infecções por bactérias Gram negativas, que ativa o complemento, causa liberação de citocinas, leucocitose, trombocitopenia, coagulação intravascular disseminada, febre, diminuição da circulação periférica, choque e morte. (Polissacarídeo O) (Core) Estruturas Internas DNA Bacteriano Características Estrutura e Replicação do DNA Plasmídios O que são? Tamanho Importância Tipos O que são? Mesossomo Funções Número Ribossomos Estrutura 30S 50S 70 S (unidades Svedberg) Composição química Polissomos As proteínas das duas subunidades diferem, assim como as moléculas de rRNA. O comprimento das moléculas de RNA, a quantidade de proteínas e, consequentemente, o tamanho das subunidades diferem entre procariotos e eucariotos. Os rRNAs formam estruturas dobradas, muito semelhantes em diferentes espécies, embora as seqüências de nucleotídeos possam diferir. Total: 33 proteínas 23S 2904 nucleotídeos 5S 120 nucleotídeos Total: 34 proteínas Total: 21 proteínas 16S 1541nucleotídeos 50 S 30 S 70 S 60 S 40 S 80 S Total: 50 proteínas 18S 1874 nucleotídeos 28S:5.8s 4718 + 160 nucleotídeos 5S 120 nucleotídeos S1 S2 S3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 S1 S2 S3 P ro c a ri o to rRNA Proteínas Subunidade Ribossomo E u c a ri o to Aspecto granular ao citoplasma Bacillus sp , Rodospirillum - Lipídeo Granulações Citoplasmáticas Maioria grânulos de reserva (C, S, P, etc) Thiomargarita namibiensis - Enxofre Corynebacterium diphtheriae - Fosfato (Grânulos Metacromáticos ou de Volutina) (Metodo de Albert) Rodospirillum sp Corynebacterium (Grânulos de volutina) (Método de Albert) Esporo (=Endosporo) Célula em repouso Forma de resistência Clostridium, Bacillus, Sporosarcina, Coxiella Desidratada Estrutura rígida (multi camadas) Esporulação Germinação Esporulação H2O Dipicolinato de cálcio Método de Wirtz Germinação Ativação Iniciação ou Germinação Propriamente Dita Brotamento ou Crescimento Resumo
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