Relatório Extração do DNA da cebola FINAL

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ
CENTRO DE ciências 
DEPARTAMENTO de biologia 
	curso: agronomia
disciplina: biologia geral e molecular
professora: denise hissa
antonio marcio fernandes almeida
extração de dna da cebola (Allium cepa)
fortaleza/ce
2014
introdução
O DNA, o ácido desoxirribonucleico é um dos ácidos nucleicos que constituem o material genético da maioria dos seres vivos. O DNA é formado por nucleotídeos, e cada nucleotídeo é formado por uma molécula de desoxirribose, uma molécula de fosfato e uma base nitrogenada que pode ser púrica ou pirimídica.
As bases púricas encontradas no DNA são adenina e guanina; e as bases pirimídicas são citosina e timina, sendo que a adenina liga-se à timina e a guanina liga-se à citosina através de pontes de hidrogênio.
A molécula de DNA consiste em duas cadeias de nucleotídeos dispostas em hélice em torno de um eixo. As bases púricas e pirimídicas de cada cadeia polinucleotídica situam-se dentro da hélice dupla, em planos paralelos entre si e perpendiculares ao eixo da hélice (JUNQUEIRA & CARNEIRO, 2005).
As substâncias químicas presentes no interior das células interferem em toda a organização e funcionamento do organismo dos seres vivos. A substância central nesse processo é o ácido desoxirribonucléico, ou simplesmente DNA. 
   O processo de extração de DNA é o começo do estudo molecular dos genes. A partir do isolamento (extração) da substância química DNA, é possível, por meio de diferentes métodos químicos, identificar genes, fazer o seqüenciamento de nucleotídeos que compõem esse DNA e localizar seqüências homólogas (iguais ou similares) a seqüências encontradas em outros seres vivos.
OBJETIVO: Demostrar experimentalmente a extração de ácidos nucléicos.
MATERIAL: 
- Uma cebola grande (+ - 200g)
- Faca de cozinha
- Proveta de 100 ml
- Banho-maria (+ - 60 C°)
- Água destilada
- NaCl (sal de cozinha)
- Bastão de vidro ou madeira
- Papel de filtro ou peneira
- Gelo Picado
- Detergente neutro transparente
 - Álcool etílico 95% (gelado a cerca de -10 Cº)
A extração de DNA de células eucariontes conta fundamentalmente de três etapas:
Ruptura das células para liberação dos núcleos.
Desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos, DNA e proteínas.
Separação do DNA dos demais componentes celulares
PROCEDIMENTO
1 – Pique a cebola em pedaços pequenos
	
	Fonte: Blog Cienciando
 
2 - Coloque 10 ml de detergente e 2g de NaCl (sal de cozinha) em 100 ml de água, mexendo bem até dissolver completamente.
	
	
	
	Fonte: Blog Cienciando
3 – Coloque a cebola picada no Becker com a solução de detergente e NaCl, leve ao banho-maria por cerca de 15 minutos. 
	
	
	
	Fonte: Blog Cienciando
4 – Retire a mistura do banho-maria e resfrie-a rapidamente, colocando o Becker no gelo durante 15 minutos.
	
	Fonte: Blog Cienciando
5 – Filtre a mistura na peneira ou papel de filtro, recolhendo o filtrador em um Becker limpo.
	
	
	
	Fonte: Blog Cienciando
6 – Adicione no filtrado cerca de 100 ml de álcool gelado, deixando-o escorrer vagarosamente pela a borda. Formam-se duas fases a superior, alcoólica, e a inferior, aquosa. 
	
	Fonte: Blog Cienciando
7 – Mergulhe o bastão no copo e, com movimentos circulares, misture as fases, forma-se os fios embranquecidos, que são aglomerado de moléculas de DNA. Adicione o corante azul de metileno para corar as moléculas.
	
	
	
	
	Fonte: Rodrigues et at. 2008
	Fonte: Paolla Michelle (UFC)
	Fonte: Paolla Michelle (UFC)
	Fonte: Paolla Michelle (UFC)
Técnica modificada de J. Scholar e D. Madder – Centro de Educação Biotecnológica da Universidade de Reading - Inglaterra
RESULTADOS E DIRCURSÕES
O uso da cebola para a prática se justifica devido a grandeza de suas células, que quando picadas, rompem-se facilmente.
 As moléculas do detergente são capazes de desestruturar a organização das moléculas de lipídios presentes nas membranas celulares promovendo o rompimento celular (lise). A solução de lise é assim denominada devido a sua função de rompimento da membrana plasmática e outras membranas. 
O NaCl proporciona o ambiente favorável para a extração de DNA, neutralizando a carga negativa dos grupos fosfatos dessa molécula, estabilizando as fitas simples de DNA.
O aquecimento em banho-maria favorece a desnaturação das moléculas de DNA (abertura das fitas duplas), devido a desintegração pelo detergente dos núcleos e cromossomos da célula. E promove agitação das moléculas, facilitando a ação do detergente em desestabilizar as membranas lipídicas. A alta temperatura também ajuda a inativar enzimas que podem degradar o DNA. O processo de desnaturação se dá devido à presença de um componente do detergente, o dodecil (ou laurel) sulfato de sódio.
A constante agitação tem como função a separação das organelas membranosas de acordo com sua concentração na célula.
O resfriamento do filtrado no gelo permitirá a precipitação do DNA. O álcool gelado diminui a solubilidade do DNA com a ajuda do sal adicionado inicialmente. O DNA, menos solúvel em álcool, formará um aglomerado que precipitará junto com outras moléculas. Adicionar o álcool gelado em velocidade lenta auxilia na eficiência de precipitação do DNA. O álcool também desidrata as moléculas de DNA, fazendo com que elas se aglutinem formando um aglomerado visível.
Houve a formação de duas fases, um inferior aquoso e a superior alcoólica, ao adicionar o corante básico azul de metileno, a fase superior foi corada devido à presença de moléculas ácidas, como os cromossomos e cloroplastos. O DNA submerso não foi corado, devido a sua desnaturalização. 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO J. Biologia Celular e Molecular. Rio de Janeiro: 8ª ed. Guanabara. 2005.
RODRIGUES, C.D.N., ALMEIDA, A.C., FURLAN, C.M., TANIGUSHI, D.G., SANTOS, D.Y.A.C., CHOW, F. & MOTTA.,L.B. DNA vegetal na sala de aula. São Paulo: Departamento de Botânica – IBUSP. São Paulo, 2008. 8 p.: il. – (Ensino de Botânica).
SANTOS, Alexandre soares. Extração do DNA da cebola (Alliun cepa). Minas Gerais: Departamento de Ciências Básicas - DCB/UFVJM. Minas Gerais, 2007.
Disponível em: < http://blogcienciando.blogspot.com.br/2013/02/diferentes-tecnicas-e-materiais-na.html>. Acesso em 20 de outubro de 2014.