Microbiologia - Resumo I - Observando microrganismos através do microscópio

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Observando microrganismos através do microscópio
Resumo I – Microbiologia
Tortora
 
A unidade-padrão de comprimento é o metro (m).
Os microrganismos são medidos em micrômetros (10 elevado a -6) e nanômetros (10 elevado a -9).
Um microscópio simples tem uma lente; um microscópio composto tem múltiplas lentes.
Microscópio óptico
 Microscópio óptico composto
O microscópio mais comum usado em microbiologia é o microscópio óptico composto.
A ampliação total de um objeto é calculada multiplicando a ampliação da lente objetiva pela da lente ocular.
O microscópio óptico composto utiliza luz visível.
A resolução máxima, ou potência de resolução ( a capacidade de diferenciar dois pontos) de um microscópio óptico composto é de 0,2 micrômetros; a ampliação máxima é de 2mil vezes.
As amostras são coradas para aumentar a diferença entre os índices de refração da amostra e do meio.
O óleo de imersão é usado com uma lente de imersão, para reduzir a perda de luz entre a lâmina e a lente.
A iluminação brilhante é usada para esfregaços corados.
As células sem coloração são observadas de modo mais produtivo com microscopia de campo escuro, contraste de fase ou CID.
 Microscopia de campo escuro
O microscópio de campo escuro mostra uma silhueta de luz de um organismo contra um fundo escuro.
Ele é mais útil para detectar a presença de organismos extremamente pequenos.
 Microscopia de contraste de fase
Um microscópio de contraste de fase une os raios de luz direta e refletida ou difratada (em fase) para formar uma imagem da amostra na lente ocular.
Ele permite a observação detalhada de organismos vivos.
 Microscopia de Contraste com interferência diferencial (CID).
O microscópio CID fornece uma imagem colorida tri-dimensional do objeto a ser observado.
Ele permite observações detalhadas das células vivas.
 Microscopia de Fluorescência
Na microscopia com fluorescência, as amostras são primeiramente coradas com fluorocromos e então observadas através de um microscópio composto, utilizando uma fonte de luz ultra-violeta.
Os microrganismos aparecem como objetos brilhantes contra um fundo escuro.
A microscopia com fluorescência é usada principalmente em um procedimento diagnóstico denominado técnica do anticorpo fluorescente (FA) ou imuno-fluorescência.
 Microscopia confocal
Na microscopia confocal, a amostra é corada com um corante fluorescente, e um plano de cada vez é iluminado.
Utilizando um computador, imagens bi-dimensionais e tri-dimensionais das células podem ser produzidas.
Microscopia eletrônica
Um feixe de elétrons, ao invés de luz, é usado em um microscópio eletrônico.
Eletromagnetos, ao invés de lentes de vidro, controlam o foco, a iluminação e a ampliação.
Cortes delgados de organismos podem ser observados em uma micrografia eletrônica feita com um microscópio eletrônico de transmissão. Ampliação: de 10.000 a 100.000 vezes. Potência de resolução: 2,5 nanômetros.
Imagens tri-dimensionais das superfícies de microrganismos integrais podem ser obtidas com um microscópio eletrônico de varredura. Ampliação: de 1.000 a 10.000 vezes. Potência de resolução: 20 nanômetros.
Microscopia de varredura por sonda
A microscopia de tunelamento (MT) e a de força atômica (MFA) produzem imagens tri-dimensionais da superfície de uma molécula.
Preparação de amostras para microscopia óptica
 Preparando esfregaços para coloração
Realizar uma coloração significa colorir um microrganismo com um corante, para tornar algumas estruturas mais visíveis.
A fixação utiliza calor ou álcool para matar e fixar os organismos em uma lâmina.
Um esfregaço é um filme delgado de material usado para o exame microscópico.
As bactérias são carregadas negativamente, e o íon positivo colorido de um corante básico irá corar as células bacterianas.
O íon negativo colorido de um corante ácido irá corar o fundo de um esfregaço bacteriano; uma coloração negativa é produzida.
 Colorações simples
Uma coloração simples é uma solução aquosa ou alcoólica de um único corante básico.
Ela é usada para tornar visíveis as formas e os arranjos celulares.
Um mordente pode ser usado para melhorar a ligação entre a coloração e a amostra.
 Colorações diferenciais
Os corantes diferenciais, como a coloração de Gram e a coloração álcool-ácido resistente, diferenciam as bactérias de acordo com suas reações aos corantes.
A coloração de Gram utiliza um corante púrpura (violeta de genciana), iodo como mordente, um álcool descolorante e um contra-corante vermelho.
As bactérias gram-positivas retêm a cor púrpura após a descoloração; as bactérias gram-negativas não retêm, e, assim, ficam rosadas com o contra-corante.
Os micróbios álcool-ácido resistentes, como os membros do gênero Mycobacterium e Nocardia, retêm a carbol-fucsina após a descoloração com álcool-ácido e ficam vermelhos; os micróbios não-resistentes captam o contra-corante azul de metileno e ficam azuis.
 Colorações especiais
As colorações para endosporos e flagelos são colorações especiais que coram somente certas partes das bactérias.
A coloração negativa é usada para tornar visíveis as cápsulas microbianas.