Métodos de estudo em patologia

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PATOLOGIA 
 
Métodos de estudo em patologia 
Estudo morfológico 
 Exames citológicos 
 Anatomopatológicos 
 Biopsias 
 Peças cirúrgicas 
 Autopsias 
Exames citológicos 
 Detecção de lesões neoplásicas, agentes infecciosos e parasitários 
 Vantagens → simplicidade na coleta da amostra (não invasiva) e no preparo do material para análise, de 
baixo custo, resultado rápido (permite conduta imediata) 
 Desvantagens → ausência de arquitetura tecidual, menor quantidade de material para análise e 
necessidade de treinamento diagnóstico 
 Evita uma reconvocação para consulta de retorno 
 Material pode ser obtido por meio de → raspados da pele ou mucosa, secreções, líquidos, punção 
aspirativa por agulha fina 
 Amostra deve ser fixada adequadamente 
 Principal fixador é o álcool etílico 
 Exames cervicovaginais → fixado imediatamente ainda úmido em álcool etílico a 95%, porque se ressecar 
a amostra se torna inviável para o Papanicolau 
 Esfregaços secos são usados em coloração hematológica 
 Secreções ricas em muco ou proteínas, podem ser guardadas até 1 dia na geladeira antes de irem por 
laboratório, porque o muco protege as células e as proteínas fornecem nutrientes 
 Quando o material não tem como ir para o laboratório, deve ser fixado em igual volume de etanol a 50% 
 Coloração universal de esfregaços é o Papanicolau 
 Citologia em monocamada → a fixação e o processamento difere do convencional, a mostra depois de 
coletada é transferida para um frasco com fixador e mantida em suspensão, fixadores são diferentes e 
fixam homogeneamente, lisam as hemácias e quebram o muco, esse frasco então vai para uma maquina 
que aspira o líquido por uma membrana de tamanho inferior ao das células, deixando uma monocamada 
de células na membrana retidas 
 Vantagens → fixação mais homogênea, concentração da amostra em uma lâmina só, automação da 
leitura e preservação da amostra residual 
 Desvantagens → perda do material extracelular e do componente inflamatório da lesão, maior 
complexidade e maior custo 
Exames anatomopatológicos 
 Biopsias 
 Peças cirúrgicas 
 Autopsia 
Biopsias 
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PATOLOGIA 
 Feitas para diagnóstico ou tratamento 
 Dois tipos → ablativas (tira toda lesão) e incisionais (tira parte da lesão) 
 Biopsias diagnósticas → curetagem, biopsias endoscópicas, por agulha, por trenepação, dirigidas por 
aparelhos especiais e cerebral estereotáxica 
 Material colhido deve ser representativo 
 Biopsia de lesão ulcerada tem que ter a margem de transição entre a úlcera e os tecidos adjacentes 
 Biopsias superficial as vezes contém só o material inflama e não pega a lesão subjacente 
Peças cirúrgicas 
 Provenientes de tratamento cirúrgico 
 Pode ser simples (retirada de vesícula por ex.) ou composta (retirada de mama, com os linfonodos 
adjacentes por ex.) 
 Material deve ser colocado em fixador o mais rápido possível 
 Biopsias pequenas ressecam rapidamente 
 Fixador universal é o formaldeído a 4% tamponado 
 Amostras para imunofluorescência devem ser colocadas em solução salina tamponada em frasco imerso 
em gelo triturado ou álcool 70% resfriado 
 Degradação das moléculas se inicia após 5-10 min da retirada, mas esse tempo não afeta a morfologia 
 Peças achatadas podem ser fixadas em cortiça ou papel para evitar dobras 
 Recipiente deve estar fechado para que o fixador não evapore 
 Coloração universal é a hematoxilina-eosina 
 Em caso de urgência pode usar o método de congelação rápida 
 Usa-se principalmente o microscópio de luz 
 Microscópio de luz polarizada → detecta material polarizante como cristais 
 Microscópio de campo escuro → espiroquetas 
 Microscópio de contraste de fase → análise de células vivas não coradas 
 Microscópio invertido → células em cultura 
 Microscópio de fluorescência → elementos fluorescentes nativos ou reações de imunofluorescência 
 Microscópio digital → amostras podem ser analisadas no computador, com ampla analise morfométrica, 
acesso remoto, mas é muito caro, demora para se escanear a imagem e o arquivo da imagem é pesado 
 Microscópio confocal → análise em vários planos 
 Microscópio eletrônico → tem muito zoom, pode mostrar pequenos detalhes 
Autópsia 
 Exame post-mortem para identificar a causa de morte e lesão e doenças existentes no falecido 
 É completa quando todos os órgãos são dissecados, chamada também de autópsia médico-científica 
 É parcial quando tem mínima invasão e apenas alguns órgãos são retirados 
 Autópsia médico-legal → obrigatória em caso de morte violenta, faz a retirada de órgãos, coleta de 
sangue e secreções 
Imuno-histoquímica 
 Usa anticorpos como reagentes específicos para detectar antígenos presentes nos tecidos 
 Identifica elementos estranhos, como vírus, bactérias, fungos 
 Tem boa sensibilidade e especificidade 
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PATOLOGIA 
 Técnica qualitativa 
 Objetivo é encontrar e localizar 
topograficamente os antígenos 
 O produto da reação imuno-histoquímica deve 
ser analisado junto com os achados morfológicos 
 Podem ser empregados anticorpos mono ou 
policlonais 
 Um antígeno pode ser reconhecido pela ligação 
com o anticorpo, depois é aplicado um sistema 
de detecção para identificar a Ig usada como 
anticorpo, ela é o anticorpo primário 
 Os anticorpos devem ser marcados para que depois saiba quais são eles, e usa duas formas de marcação: 
substâncias fluorescentes e enzimas, que depois serão vistas pelos microscópios de luz 
Imunofluorescência 
 Direta → anticorpo primário é ligado a uma composto fluorescente (isotiocianato de fluoresceína) 
 Indireta → anticorpo primário se liga a um antígeno de interesse, a substância fluorescente é conjugada a 
um anticorpo secundário que reconhece a porção Fc do anticorpo primário e formam uma reação (é mais 
específica) 
Técnicas imunoenzimáticas 
 Imunoglobulinas marcadas com enzimas 
 Sinal resulta da formação de um composto colorido 
no sítio de reação 
 Enzima mais usada é a peroxidase e seu substrato é 
H2O2, que na presença de uma substância doadora 
de elétrons (mais usada é a tetrahidrocloreto de 
3,3’-diaminobenzidina – DAB), a reação gera a 
partir desta um produto cromógeno que se precipita 
 Por causa do DAB essas substâncias podem ser guardadas por tempo indeterminado 
 A técnica indireta é mais eficaz 
 3 estratégias usadas → peroxidase-antiperoxidase (PAP), avidina-biotina-peroxidase (ABC) e cadeias 
poliméricas 
 PAP → reação em cadeia de 3 anticorpos, anticorpo primário produzido na espécie A reage com o 
antígeno-alvo, o anticorpo secundário produzido em 
espécie B reconhece os Fc das Igs do animal A, o anticorpo 
terciário vai sem um complexo antígeno-anticorpo 
formado por 2 Igs do animal A e 3 peroxidases, é um 
método de maior sensibilidade 
 ABC → anticorpo primário é igual no PAP, anticorpo 
secundário da espécie B fica ligado à moléculas de biotina, 
que tem afinidade pela adivinha, formando complexos 
estáveis, mais biotina acoplada com peroxidase é 
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PATOLOGIA 
adicionada, formando um complexo maior, é mais sensível que o primeiro método 
 Cadeias poliméricas → método mais sensível hoje e de menor custo, é o mesmo método ABC, mas a 
reação é amplificada por cadeias de dextran 
 Fixadores paralisam a autólise e imobilizam componentes teciduais, mantendo a morfologia da célula 
 Quando processados para inclusão em parafina, deve evitar temperaturas acima de 60°C 
 A fixação as vezes pode destruir determinantes antigênicos, produzindo um falso negativo 
 Formol tamponado e o fixador de Bouin são os mais usados 
 Método de recuperação antigênica → para detectar melhor alguns antígenos, aquece a amostra em 
micro-ondas, é usado paraamostras que não foram fixadas direito e que são antigas 
 Epítopos de antígenos podem ser alterados pelos fixadores líquidos, nesse caso se faz o congelamento da 
amostra, que preserva a amostra e permite estoque por tempo indefinido 
Cultura celular 
 Manutenção e multiplicação de células in vitro 
 As células são mantidas em recipientes, em suspensão ou aderidas a uma superfície sólida e banhadas por 
um meio de cultura 
 Meio mínimo → aminoácidos essenciais, vitaminas e sais 
 Meio completo → quando tem outros metabólitos complementando 
 Esses meios são suplementados com soro, porque ele é fonte de varias substâncias importantes para a 
vida e multiplicação das células 
 Meio deve ser trocado em intervalo regular para remover os produtos do metabolismo celular e manter a 
concentração ideal de todos os metabólitos 
 As culturas são divididas de acordo com a taxa de multiplicação celular 
 Cultura primária → células cultivadas pela primeira vez 
 Células estabelecidas → células mantidas indefinidamente em cultura 
 Analisa o metabolismo e comportamento celular 
 Diagnóstico de patologias 
 Análise citogenética → diagnóstico pré-natal de patologias 
Citometria 
 Medida de um componente físico ou químico de uma célula 
 Se baseia na ligação especifica de uma substância a um componente celular 
 Citofotometria → componente celular é corado por reação histoquímica, se só esse elemento for corado, 
quando for colocado no caminho de uma luz vai ter interferência na passagem da luz, um sensor é 
colocado e ele capta e quantifica a intensidade da luz que chega a ele e então se compara com uma 
substância não corada 
 Citometria de fluxo → realizada em células em suspensão e as medidas são feitas enquanto as células 
passam uma de cada vez em um aparelho em frente a um laser, esse aparelho detecta como a molécula 
interage com a luz (espalhamento da luz e emissão de fluorescência), isso permite comparar as células 
quanto ao seu tamanho e complexidade interna, pode ser usado o fluorocromo (capaz de absorver a luz e 
emitir um novo feixe de luz) 
Morfometria 
 Dados numéricos a partir de quantidade, dimensões e cores de estruturas celulares