aula 1 microbiologia clinica

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AULA 1: MICOLOGIA - FUNGOS
Características gerais e Diagnóstico Laboratorial: Micológico 
direto e cultura para fungos em amostra de pele 
Profª Drª Andrea Gobetti C. Bombonatte
UNIP/Santos – Rangel 
2018/1
PLANO DE ENSINO 2018
Complementar: MICOLOGIA e MEIO DE CULTURA
1. Considerações gerais sobre a microbiologia no laboratório de análises
clínicas, biossegurança e CIH.
2. Cultivo e crescimento de microrganismos: a) Meios de cultura; b)
Controle de crescimento c)princípios de provas bioquímicas. d) automação.
3. Diagnóstico microbiológico das infecções: tegumentares; do trato
urinário; intestinais; respiratórias; genitais e meningites.
4. Diagnóstico diferencial de cocos Gram positivos: a) Staphylococcus spp;
b) Streptococcus spp; c) Enterococcus spp. Abordar Cepas como MRSA e
Enterococcus resistentes à vancomicina.
5. Diagnóstico diferencial de: a) Neisseria spp; b) Micobactérias.
6. Diagnóstico diferencial de: a) Bacilos Gram-negativos não fermentadores;
b) Haemophilus spp; c) Bordetella spp.
7. Diagnóstico diferencial de enterobactérias: a) Salmonella spp., b) Shigella
spp; c) Yersinia spp; d) Escherichia coli.
8. Diagnóstico diferencial de: a) Corynebacterium spp, b) Bacillus spp; c)
Listeria spp; d) Pseudomonas spp(cepas multirresistentes). Abordar Antrax.
9. Diagnóstico diferencial de: a) Campylobacter spp; b) Vibrio spp.
10. Características gerais dos fungos: metabolismo, crescimento e cultivo;
Micoses superficiais: Ptiríase versicolor;
Micoses cutâneas: Onicomicose, Dermatomicoses cutâneas
Micoses subcutâneas: Esporotricose
CRITÉRIO AVALIAÇÃO:
 Desempenho individual
 Frequência, participação, interesse, 
iniciativa, espírito de grupo, 
cumprimento das tarefas propostas
 Avaliações escritas
Observação:
A frequência é uma
responsabilidade do aluno. Ele é
quem decide se comparece ou
não às aulas, e ele assume
integralmente as Consequências
de suas opções.
Características: 
• Reprodução sexuada ou assexuada
• Podem ser decompositores, parasitas, mutualistas e até mesmo predadores.
Definição Biológica!
É um grupo de organismos eucariotos imóveis, que apresentam 
paredes celulares definidas, são desprovidos de clorofila e se 
reproduzem por meio de esporos sexuadamente, assexuadamente, 
ou de ambas as formas.
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PAPEL DOS FUNGOS
FUNGOS
ANTIBIÓTICOS
HORMÔNIOS
QUEIJOS
ENZIMAS
PÃO
ETANOL
FERMENTAÇÃO
CONTROLE 
BIOLÓGICO
MICOSES
DOENÇAS EM
PLANTAS ALERGIAS
DETERIORAÇÃO
MICOTOXINAS
MICORRIZASVITAMINAS SCP
Queratina – subs. encontrada na
superfície cutânea, unhas e
cabelo - nutriente
Unicelulares: leveduras, são fungos anaeróbicos facultativos
(fermentadores) muito utilizados na fabricação de alimentos.
Pluricelulares: hifas e micélios. As hifas são tubos microscópicos que
se originam da germinação de um esporo por mitoses. As hifas
podem ser septadas ou cenocíticas. Os micélios são conjuntos de
hifas que formam o fungo, ele pode ser vegetativo (nutrição) ou
reprodutivo (reprodução).
Leveduras
As leveduras são unicelulares, podem se tornar multicelular
através da formação de cadeias de gemulação ligados
conhecidos como pseudo ou falso hifas, como pode ser
visto na maior parte dos moldes.
Saccharomyces: fungos
unicelulares. Note que os
pequenos brotos são
novos indivíduos que
estão sendo formados
por reprodução
assexuada.
Não Patógeno: fabricação 
de pão, cachaça, cerveja 
etc., graças à fermentação 
que ele realiza 
Fungos Filamentosos
Histoplasmose: O homem adquire a
infecção através da inalação de
conídeos presentes na natureza (fezes
morcegos, galinheiros, etc). O quadro
clínico pode variar, desde infecções
assintomáticas até quadros graves
disseminados, que acometem
pacientes com Aids, transplantados ou
com neoplasias hematológicas.
Paracoccidioidomicose: Adquirida
adquirida através da inalação de
propágulos do fungo, descrita por
Adolfo Lutz em 1908, autóctone da
América Latina (Brasil, Argentina,
Colômbia e Venezuela). No Brasil, a
maioria dos casos tem sido relatada
nas regiões sul, sudeste e centro-oeste.
A paracoccidioidomicose tem caráter
endêmico entre as populações da zona
rural, acometendo os indivíduos do
sexo masculino, na faixa etária
produtiva da vida (30-60 anos) e está
relacionada às atividades agrícolas.
 Micélio = conjunto de hifas emaranhadas de um fungo.
 Micélio vegetativo = correspondente a sustentação e absorção de
nutrientes, se desenvolvendo no interior do substrato.
 Micélio reprodutivo = micélio que se projeta na superfície e
cresce acima do meio de cultivo
• Hifas exteriorizadas forma corpo vegetativo
- Bolor, mofo, orelha-de-pau
- Distúrbios intestinais
- Liquens
(algas e fungos) : 
A alga produz alimento para 
o fungo que em troca 
protege a alga
- Micorrizas
(raízes e fungos)
Planta fornece energia e carbono,
enquanto os fungos absorvem
minerais e água do solo,
transferindo-os para a planta
REPRODUÇÃO GENERALIZADA
REPRODUÇÃO ASSEXUADA
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REVISÃO:
Importância Biológica
Interesse Biotecnológico
 São de dois tipos morfológicos: leveduras, que são unicelulares e 
bolores ou fungos filamentosos, que são multicelulares
Interesse Médico
Desenvolvimento dos Fungos: 
 Leveduras são fungos capazes de colonizar o homem e
animais e, frente à perda do equilíbrio parasita-
hospedeiro, podem causar diversos quadros infecciosos
com formas clínicas localizadas ou disseminadas.
De modo contrário, fungos filamentosos, ou bolores,
normalmente, não fazem parte da microbiota animal e
portanto o homem não é um reservatório importante para
esse grupo de fungos.
As portas de entrada no hospedeiro são as vias aéreas 
superiores ou quebra na barreira epidérmica após 
traumatismos com objetos perfuro-cortantes. 
CLASSIFICAÇÃO DAS MICOSES
Critérios:
 Local da lesão
 Vias de penetração
 Vias de disseminação
 Resposta do hospedeiro
1. Micoses Superficiais
São infecções Fungicas limitadas às camadas superficiais queratinizadas
da pele, pelos e unhas, popularmente, conhecida como “epinge” ou
“frieira”, dependendo da localização das lesões que são extremamente
pruriginosas.
 Localização da lesão: superficial
 Penetração: contato direto
 Normalmente não se dissemina por via sanguínea e/ou linfática
 Não induz resposta inflamatória
 Exemplos: 
Pitiríase versicolor
Tinha nigra
Piedra branca
Dermatofitoses
Pitiríase versicolor
 Fungo vivem normalmente sobre a pele do
homem, na forma de levedura;
 Usualmente podem filamentar e invadir as
células queratinizadas das camadas
superficiais da pele, determinando a
micose;
 A doença se manifesta como manchas
descamativas distribuídas pelo tórax,
abdome e membros superiores;
 Não cresce nos meios de cultura habituais
usados na rotina porque necessita de
suplemento lipídico (azeite de oliva) para
seu crescimento.
Fatores de risco 
Uma série de fatores podem desencadear o crescimento acelerado do 
fungo, incluindo: 
 Tempo quente e úmido
 Transpiração excessiva
 Ter pele oleosa
 Alterações hormonais
 Sistema imunológico enfraquecido
Tratamento
Os medicamentos mais usados para o tratamento de pitiríase versicolor são: 
Canesten
Clotren
Icaden
Itraconazol
Nitrato de Miconazol (emulsão)
Exame micológico direto é positiva para pseudo-hifas, mas a cultura para 
fungos em meio enriquecido com óleo de oliva não é feita como rotina
Diagnóstico
Tinea Negra
 Infecção assintomática;
Hortaea werneckii, antigamente
conhecido como Phaeoannelomyces
werneckii.
Localizaçãopreferencial nas palmas
das mãos ou planta dos pés;
ocorrência mundial, sendo mais
prevalente nas áreas tropicais e
subtropicais.
Fungo produz melanina, dando ao
microorganismo uma cor preta.
Aparecimento de mancha escura,
marrom ou negra de aspecto
fuliginoso;
 Micológico Direto: - Raspando-se a lesão, observa-se hifas acastanhadas 
septadas e ramificadas irregulares e também elementos em brotamento.
 Cultura: - em temperatura ambiente; - colônia cremosa, leveduriforme, que 
com tempo torna-se filamentosa. 
 Isolamento do fungo: Meio Sabouraud
Diagnóstico Laboratorial: - Hifas septadas; - Blastoconídios; - Hifas hialinas;
 Exame direto com KOH
 Presença de hifas escuras curtas, ramificadas e septadas
Diagnóstico
Piedra Negra
Causada pela Piedraia hortae.
Regiões tropicais e subtropicais.
Endêmica na Amazônia – Denominada Tirana.
Esta micose consiste em nódulos duros, de cor escura, localizados 
na haste dos pelos e bastante aderentes a eles – região dos cabelo.
Exame microscópico do cabelo parasitado
Cresce lentamente em meio de cultura: colônias escuras de centro 
elevado aderente ao meio
Piedra Branca
 Causada por leveduras do gênero Trichosporon beigelli;
 Nesta infeção o fungo cresce sobre a haste dos pelos, formando 
nódulos claros de hifas hialinas septadas e ramificadas, pouco 
aderentes ao pelo;
 Localização: pelos escrotais e pubianos;
 Exame microscópico: micélio formado por hifas claras, septadas e 
ramificadas
 Colônias de cor creme, aspecto cremoso.
Dermatofitose
Pitiríase versicolor
2. MICOSES SUBCUTÂNEAS
 Localização da lesão: Derme
 Penetração : Microtraumatismos
 Disseminação: via linfática
 Resposta do hospedeiro : inflamatória
 Exemplos: Esporotricose Lobomicose
Cromoblastomicose Eumicetomas
Esporotricose
Cromoblastomicose
3. MICOSES SISTÊMICAS
 Localização da lesão:acomete órgãos internos
 Via de penetração: inalatória
 Vias de disseminação: sanguínea e linfática
 Resposta do hospedeiro: inflamatória granulomatosa
 Exemplos: Paracoccidioidomicose
Histoplasmose
Coccidioidomicose
Paracoccidioidomicose: Paracoccidiodes brasiliensis (levedura infectante)
Histoplasmose: Histoplasma capsulatum
Infecção pulmonar. Zoonose, transmitida por fezes de aves e morcegos.
Infecção restrita à América Latina. Micose crônica com granulomas ulcerativos da
mucosa da boca e do nariz geral acometendo os pulmões, a partir dos quais se
espalha para a pele, baço e outros órgãos
4. MICOSES OPORTUNÍSTICAS
Definição: causadas por fungos que normalmente são sapróbios e
que em decorrências de fatores adversos passam a produzir lesões.
Indivíduos com ↓ resposta imune
Antibioticoterapia prolongada
Rompimento de barreira de defesa da pele e/ou de mucosas
Exemplos: Criptococose
Candidíase
Aspergilose
Cryptococcus sp
Candida sp
Micológico direto e cultura para fungos em 
amostra de pele
Conceitos fundamentais representam a base para a identificação de um 
fungo
Classificação é feita pelas características morfológicas:
macroscópicas (cor, aspecto, textura da colônia)
microscópicas (forma e cor da hifa, presença ou não de septos, tipo e 
arranjo de esporos)
 velocidade de crescimento (lenta, moderada ou rápida).
Leveduras - colônias se apresentam esféricas ou ovais e de consistência
pastosa ou cremosa, apresentando crescimento limitado.
Fungos Filamentosos - maior variedade de formas de colônias, por exemplo,
quanto à textura podem ser aveludadas, cremosas, butirosas ou mucóides;
cotonosas, serosas, camurças, granulosas, membranosas ou coriáceas,
verrucosas ou pulverulentas, e apresentarem crescimento invasor
Coleta e transporte de amostras de pele, unhas e pelos
O tipo e a qualidade da amostra biológica são fatores importantes no
sucesso do isolamento e identificação do verdadeiro agente etiológico
de infecções Fungicas.
A amostra deve ser submetida ao exame microscópico direto e cultura
em meios para isolamento e identificação acurada do agente etiológico.
Cultura: método mais específico e em muitos casos, mais sensível.
Processamento da amostra
 Pelos, cabelos, escamas de unha e pele devem ser aliquotadas para 
exame microscópico e cultura
 Para cultura a amostra não pode sofrer nenhum tratamento 
prévio, sendo por isso, inoculadas diretamente na superfície do 
meio de cultura.
Exame microscópico direto
 ƒA observação de um fungo na amostra biológica tem grande valor
diagnóstico - demonstra a invasão do fungo.
Se a quantidade da amostra biológica for insuficiente para o exame
microscópico e cultura do material, a cultura, na maioria das
amostras, tem prioridade sobre o exame microscópico
O exame microscópico da amostra é realizado por várias técnicas,
dependendo do tipo da amostra e suspeita clínica.
* Auxiliares primários no diagnóstico
Tipos:
a) Montagem com hidróxido de potássio (KOH)
b) Montagem com tinta da China ou nigrosina
c) Montagem com Gram
d) Montagem com Giemsa
HIDRÓXIDO DE POTÁSSIO (KOH) A 20% 
 É usado para exame de pelos, pele, unha, tecido obtido por biópsia, 
exsudatos espessos e outros materiais densos. 
 Colocar uma gota de KOH (aquoso a 20%) em uma lâmina de 
microscopia e sobre esta, uma porção da amostra a ser examinada. 
 Cobrir a preparação com uma lamínula e, para intensificar a 
clarificação, aquecer ligeiramente, sobre a chama de um bico de 
Bunsen, sem deixar ferver a mistura. 
 Examinar a preparação após 20 minutos, em microscópio óptico 
comum, inicialmente, com objetiva de 10x, seguida de 40x.
Método de Gram 
 Gram- positivos, 
 Coloração não visa a diferenciação dos microrganismos
 Possibilita discriminar elementos fúngicos de artefatos 
existentes em urina, secreções e fezes. 
 Utilizados para pesquisas de leveduras em
 secreções
Coloração Panótica (Giemsa, Leishman ou Wright) 
Usadas para pesquisa de Histoplasma capsulatum em diversas
amostras biológicas: medula óssea, sangue, aspirados e secreção
cutânea.
Tinta Nanquim (tinta da china) 
Utilizada em amostras de líquor, urina, secreções ou exsudatos, para
visualização de leveduras capsuladas do gênero Cryptococcus, que se
tornam mais evidentes contra o fundo negro proporcionado pela tinta.
Técnica da fita adesiva 
 Fungo está cultivado em placa de Petri
Procedimento: 
• Cortar um pedaço de fita adesiva um pouco menor do que a lâmina e 
colocá-la sobre a colônia, com a cola para baixo. 
• Comprimir para que o fungo cole na fita. 
• Colar a fita sobre o corante na lâmina. 
• Observar ao microscópio ótico com objetivas de 10X, 40X e 100X
Cultura para isolamento e identificação de fungos
 Para isolamento de fungos a partir de qualquer tipo de amostra:
 utilizar meios não seletivos, que permitam crescimento de fungos 
patogênicos e bolores de crescimento rápido (< de 7dias).
 Estes fungos, apesar de serem contaminantes de meio ambiente,
podem ser agentes de micoses em pacientes suscetíveis -
oportunistas.
 O meio básico: Ágar Sabouraud Dextrose (ASD)
 Utiliza-se um antibiótico para impedir o crescimento de bactérias que 
poderiam prejudicar o isolamento de fungos.
 O cloranfenicol é o mais indicado 
 Pode ser colocado tanto no ASD como em outros meios de cultura 
para fungos. 
 O ASD é o meio mais utilizado, por ser relativamente barato e permitir 
o crescimento de todos os fungos, com raríssimas exceções. 
Procedimento
Semear de três a cinco escamas de pele, unha ou pelos no centro da 
superfície do meio.
Partículas maiores devem ser ligeiramente prensadas
Incubar a temperatura ambiente
Observar o crescimento por até 3 semana
Meios utilizados
 Ágar Sabouraud (com antibiótico e/ou cicloheximida) Ágar Sabouraud c/ infusão de cérebro e coração (SABHI)
 Ágar infusão de cérebro e coração (BHI)
 CHROMagar: leveduras
Identificação
 Características morfológicas - estabelece Gênero.
 Bioquímicas (Teste de redução do nitrato e hidrolise da ureia,
fermentação de açúcar) – diferenciação de espécie
Tarefa – Pesquisa:
• Realizar sobre os agravos causados por fungos aqui 
apresentados um levantamento sobre:
• A) História/Origem
• B) Epidemiologia
• C) Agente Etiológico + Classificação
• D) Vetor/Reservatório + Formas de Transmissão
• E) Patogenia