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ImunofluorescênciaImunofluorescência
Trabalho final realizado por Yuli Maia e Natalia Romeiro como 
forma de avaliação para conclusão da disciplina sob coordenação 
de Rachel Colacique. Atualizado em Outubro de 2012. 
Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro
Instituto de Biociências
Disciplina: Didática
Imunofluorescência é uma técnica que 
permite a detecção ou localização de 
antígenos em tecidos ou células a partir de 
uma marcação com anticorpos conjugados 
a uma molécula fluorescente. 
Antígeno – É qualquer molécula que 
induza uma resposta imunológica.
Anticorpo – É a resposta gerada pelo 
sistema imunológico para combater ou 
neutralizar os antígenos.
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Os anticorpos se ligam especificamente ao 
antígeno como em um sistema de chave e 
fechadura, ou seja, jamais um anticorpo se 
ligará erroneamente a um antígeno.
Entretanto os anticorpos não são visíveis, por 
isso é necessário marca-los de alguma forma, 
nessa técnica marcaremos os anticorpos com 
moléculas fluorescentes que são 
denominadas de fluorocromos.
Fluorocromos – São moléculas que 
possuem a capacidade de absorver a energia 
proveniente de uma luz ultravioleta e emitir 
parte dessa energia em forma de luz em um 
comprimento de onda visível aos olhos. Esse 
fenômeno é denominado de fluorescência.
A visualização dessa reação é feita em um 
microscópio de fluorescência.
Microscópio de 
fluorescência – É um tipo 
de microscópio capaz de 
energizar a amostra, que está 
marcada com anticorpos 
conjugados a moléculas 
fluorescentes, e de captar a luz 
emitida pela a amostra, 
tornando assim o resultado 
visível aos olhos.
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Existem dois tipos de imunofluorescência.
Imunofluorescência direta e Imunofluorescência indireta
Imunofluorescência DiretaImunofluorescência Direta
É colocado apenas um anticorpo e esse 
é conjugado ao fluorocromo, ou seja, o 
antígeno é detectado diretamente pelo 
anticorpo primário.
Fluorocromo
 Anticorpo primário
Antígeno
Lâmina
Imunofluorescência IndiretaImunofluorescência Indireta
Nessa modalidade de imunofluorescência, 
além do anticorpo primário é colocado um 
anticorpo secundário, e esse secundário 
anticorpo está conjugado a um fluorocromo, 
ou seja, o antígeno é detectado indiretamente.
Anticorpo primário
Antígeno
Lâmina
Anticorpo secundário
Fluorocromo
Aplicabilidade da técnica
Tem relevância no diagnostico de doenças humanas e 
veterinárias, e no campo da pesquisa para a detecção de 
microorganismos e moléculas em diversos materiais. 
Também pode ser usada na fenotipagem de células 
tumorais.
Vantagens da técnica
 Especificidade
 Sensibilidade
 Reprodutibilidade
 Simples padronização
 Detecção e localização de 
antígenos intra e extracelulares
Desvantagens da técnica
• Alto custo do microscópio de 
fluorescência
• Técnica realizada manualmente, 
aumentando a chance de erro
• Subjetividade na leitura do 
resultado
Imagem de células marcadas por Imunofluorescencia Google imagens
Obrigada!Obrigada!
Imagem de imunofluorescência de células-tronco Google imagens
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