Marcadores moleculares

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MARCADORES MOLECULARESMARCADORES MOLECULARES
MARCADORES MOLECULARESMARCADORES MOLECULARES
• Marcadores de DNA são derivados de
pequenas regiões do DNA que apresentampequenas regiões do DNA que apresentam
polimorfismo entre indivíduos dentro de uma
espécie.
Categorias de marcadores
Andersen e Lubberstedt, (2003)
• Marcadores aleatórios (RDM- Randon DNA markers): 
são gerados aleatoriamente, de sítios polimórficos do 
genoma 
• Marcadores gene-alvo ( GTM- gene targeted marker): • Marcadores gene-alvo ( GTM- gene targeted marker): 
são derivados de polimorfismos dentro de genes 
• PCR-específicos ou PCR de seqüência específica
• Marcadores funcionais (FM- Functional markers): são 
derivados de sítios polimórficos dentro de genes 
envolvidos em determinada variação fenotípica . 
AVALIAÇÃO DO POLIMORFISMO AVALIAÇÃO DO POLIMORFISMO 
DIRETAMENTE DO DNADIRETAMENTE DO DNA
�RFLP (1980)- fragmentos de DNA de comprimento 
polimórfico
�PCR (1985)- reação de polimerase em cadeia
�Mini e Microsatélites (1985)- seqüências adjacentes �Mini e Microsatélites (1985)- seqüências adjacentes 
que se repetem em número variado
� RAPD (1990)- polimorfismo de DNA amplificado ao 
acaso
� AFLP (1994) - polimorfismo no comprimento de 
fragmentos amplificados
►SNP ( 1998) - Polimorfismos de Nucleotídeos Únicos
MARCADORES DE DNA
RFLP Hibridização
Hibridização Minisatélites ou locos VNTR
RAPD
SCAR
• Amplificação D STS• Amplificação D STS
do DNA (PCR) Microssatélite ou SSR 
AFLP
SNP 
Seqüências ESTP
Expressas ASP
SNP
RFLP RFLP (Botstein et al., 1980)
(Identificação por hibridização do DNA)
1- Extração do DNA
2- Digestão por enzimas de restrição
3- Separação dos fragmentos (eletroforese)
4- Transferência do DNA para membrana de nylon 4- Transferência do DNA para membrana de nylon 
5- Hibridação (fragmentos x sondas marcadas)
6- Autoradiografia(exposição da memb. a filme de raio X 
ou compostos luminescentes
7- Análise da segregação
RFLP (polimorfismo no comprimento de fragmentos de
restrição).
HIBRIDIZAÇÃO
Seqüência de DNA
A T G C T C G A C G T T C G A C T T A G C 
C T G C A A G C T C T G C A A G C T 
Seqüência da Sonda:
(1000 pb tratadas com P32)
Marcadores RFLP
1
1 2 1 2
2
Usos marcadores RFLP
• Diversidade genética e identificação de 
cultivares( café , arroz , soja , milho , cana), 
sorgo. 
• Construção de mapas de ligação e • Construção de mapas de ligação e 
mapeamento de QTLs ( sorgo ,café ,milho cana 
,arroz ).
• Seleção assistida por marcadores (SAM) 
(milho).
RFLPRFLP
VANTAGENS
Cobre potencialmente todo o genoma(detecta 
variações em seqüências de DNA de 4 a 8 pb)
Expressão co-dominante
Alta repetibilidade e consistência
LIMITAÇÕES
Passos intensivos em mão de obra
Inexistência de biblioteca de sondas disponível
Instalações
Marcadores baseados na amplificação do DNA
(PCR)
Aleatórios: RAPD
Microssatelites ou SSR e variaçoes
AFLP
SNP SNP 
PCR-especificos (baseado na conversão):
STS
Scars
CAPS
Técnica de PCR
Reação em Cadeia de Polimerase
� Técnica que replica milhões de vezes um fragmento de 
DNA, possibilitando a sua detecção e análiseDNA, possibilitando a sua detecção e análise
� Extração do DNA
Vários protocolos
Kits prontos
RAPD-”Fragmentos de DNA amplificados ao 
acaso” ( Williams et al, 1990)
�Marcadores moleculares anônimos distribuídos pelo
genoma;
� Utiliza “primers” curtos e de seqüências arbitrárias, com
seqüências alvo desconhecida;
� Utiliza um “primer” único;
� Detecta polimorfismo em apenas um par de bases;
� Baseia-se na amplificação de DNA;
� Não Permite distinguir heterozigotos.
RAPD –Polimorfismo de DNA Amplificado ao 
acaso( Williams et al, 1990)
Oligonucleotídeo (primer) + DNA genômico
� Mistura: condições cíclicas de temperatura
taq polimerase
� Mistura: condições cíclicas de temperatura
� 94o - desnaturação do DNA
� 36o - anelamento
� 72o - extensão (DNA polimerase)
� Geração de fragmentos DNA polimórficos em grande 
quantidade
Esquema representando resultados imaginários de RAPD para 10 isolados de Leishmania 
chagasi. É possível agrupar os isolados de cão e de homem num único grupo (colunas a - c, 
i,j), que difere do grupo de isolados de raposa (faltam as bandas 1 e 3 e há uma nova banda 
2 e do grupo de isolados de marsupiais (f-h), que tem menos duas bandas no padrão RAPD. 
As cores são apenas ilustrativas.
OP-B04
OP-B07 OP-B08
1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 61 2 3 4 5 6
OP-B11 OP-C14
1 2 3 4 5 6
1 2 3 4 5 6
1 2 3 4 5 6
Produtos de amplificação de DNA obtidos com os iniciadores OP-B04, OP-B07, OP-B08, OP-
B11 e OP- C14. As colunas de 1 a 6 correspondem aos produtos de amplificação das cultivares
de feijão Carioca, Carioca MG, Aporé, Pérola, IAPAR 57 e IAPAR 81. As setas indicam as bandas
consideradas robustas.
RAPD
Mossoró, Quitéria,Chonan,Caçador,Amarante,Amarante L,Chonan L
Identificação de cultivares
RAPD MELÃO
(Diversidade genética)
MELÃO
RAPD MELÃO 
Açúcares
Berinjela (Fitoplasma)RAPD
Diagnóstico
RAPDRAPD
VANTAGENS
Simplicidade, rapidez e baixo custo
Não requer biblioteca de sondas
LIMITAÇÕESLIMITAÇÕES
Expressão dominante
Baixo conteúdo de informação por bloco
Padronização de condições de amplificação 
Competição entre sítios de amplificação 
Freqüência de ocorrência
• 1 microssatelite a cada 6-7 Kb (EST) Cardle et al, 
1 a 6 nucleotídeos repetidos n vezes
MICROSSATÉLITES MICROSSATÉLITES ((LittLitt & & LutyLuty, 1989), 1989)
2000
• Variação quanto a classe (di,tri tetra)
Freqüência em plantas . (AT)n, (A)n e (AG)n(ATA)n, (AAC)n, (AGC)n, (AAG)n, (AATT)n, 
(AAAT)n e (ACTC)n
MÉTODOMÉTODO
�as sequencias que flanqueiam Regiões repetidas são
amplificadas por um par de primers específicos (20 a 30
bases) - complementares as seqüências microssatélites.
�Cada microssatélite –é um loco genético altamente�Cada microssatélite –é um loco genético altamente
variável, multialélico
�Separação por eletroforese (cada banda representa um
alelo diferente do mesmo loco)
são multi-alélicosAT
AT
AT
AT
AT
CA CA CA CA
Marcadores baseados em PCR -Microssatélites
CCG CCG
CCG
CCG
CA CA
CA CA
CA
CA CA CA CA CA
CA CA CA CA CA CA
CAAlelo 3
Alelo 5
Alelo 7
Alelo 1
Alelo 2
Alelo 3
Amplificação de microssatélites (PCR)
 alelo A
alelo B
alelo C
AA AB AC BB BC CC
Detecção de locos SSR (PCR)
CACACACACACACACACACACACA
GTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGT
CACACACACACACACACACACACA
GTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGT
(CA)3
(CA)3
Amostra 1 Amostra 3Amostra 2
C
A
1
0
/
C
A
1
0
C
A
1
2
/
C
A
1
2
C
A
1
5
/
C
A
1
5
C
A
1
7
/
C
A
1
7
C
A
1
8
/
C
A
1
8
C
A
1
2
/
C
A
1
5
C
A
1
0
/
C
A
1
5
C
A
1
2
/
C
A
1
5
C
A
1
2
/
C
A
1
8
C
A
1
0
/
C
A
1
2
Diversidade de Acessos de Pupunha e Banana através de 
Microsatélites
Fenótipo eletroforético representando o polimorfismo de microssatélites
com genótipos homozigotos (banda única) e heterozigotos (duas bandas),
em indivíduos diplóides de Phaseolus vulgaris L.(1 a 16) e do padrão de
peso molecular (M).
Microsatélites
R R R R R R R R R R R R - S S S S S S S S S S S S S S S S - S S PR PS - - MR R R R R R R R R RR R - S S S S S S S S S S S S S S S S - S S PR PS - - M
Análise dos produtos de amplificação do DNA de feijão-caupi com o “primer” SSR VM70. PR- CNC
0434 (genitor resistente); PS- IPA 206 (genitor suscetível); R- indivíduos resistentes; S- indivíduos
suscetíveis; M – Marcador de peso molecular 100 pb.
SSR Melão virus CYSDV
Diagnóstico
CHICORIA (SSR)
Similaridade Genética (Chicória)
Bnlg2291 Bnlg238
__________________ ___________________
M 8 3 8/3 7 4 7/4 8 3 8/3 7 4 7/4
Identificação de cultivares
Microssatélites de Linhagens e hibrido de milho
PIMENTÃO 
Híbridos
DESENVOLVIMENTO DE MARCADORES DE 
MICROSATÉLITES
DNA genômico total clivado com enzima de corte 
freqüente
↓
Construção de biblioteca genômica de fragmentos 
pequenospequenos
↓
Triagem de colônias com sonda complementar 
sonda oligo (GT)n para SSR (CA)
↓
Colônias positivas seqüenciadas apenas para C e 
A para verificar extensão do microssatélite
Seleção de clones com microsatélites de pelo menos 
(CA)8 com seqüências flanqueadoras adequadas
↓
Seqüenciamento completo de clones selecionados
↓
Desenho e síntese de pares de primers usando 
softwares específicos
↓
PCR com primers construídos para verificar nível de 
polimorfismo
DESENVOLVIMENTO DE MARCADORES DE 
MICROSATÉLITES
•A partir de Bancos de Dados
• Recursos Computacionais
•“Tandem Repeats Finder” versão 3.01 (BENSON,
1999)
• EST-SSR• EST-SSR
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
Padrão de amplificação em gel de poliacrilamida 6% do SSR 18, com quatro alelos, 
embulks de plantas resistentes (1 a 11) e de plantas suscetíveis (12 a 21) ao bicho-
mineiro
Pinto, 2006
Vantagens
• Herança codominante; 
• alta abundância nos genomas eucariotos; 
• multi-alelismo; 
• baixo custo e potencial para amplificação de • baixo custo e potencial para amplificação de 
sistemas multiplex;
• Fácil execução ;
• automatizável 
• Transferibilidade
DESVANTAGENS
• Desenvolvimento dos pares de “primers” 
específicos-construção de bibliotecas genômicas 
enriquecidas com os microssatélites
• clonagem e seqüenciamento desses e o desenho 
dos “primers” complementares às regiões 
conservadas que flanqueiam os microssatélites 
AFLPAFLP-- PolimorfismoPolimorfismo dede comprimentocomprimento dede fragmentosfragmentos
amplificadosamplificados ((VosVos etet alal..,, 19951995))..
Técnica:
• Clivagem do DNA genômico com duas enzimas de restrição
• Ligação de adaptadores específicos aos terminais dos fragmentos 
clivados
• Pré-amplificação dos fragmentos,utiliza primers especificos para • Pré-amplificação dos fragmentos,utiliza primers especificos para 
cada adaptador mais uma base seletiva (Eco + A, M+C)
• Amplificação seletiva utiliza primers específicos para o adaptador, 
sitio de restrição mais três bases seletivas
• Eletroforese em gel de alta resolução
DNA Genômico +
Enzimas 
de
Restricâo
Eco RI (sitio de restrição: 6 a 8 pb)
Mse I} (4pb) Fragmentos de DNA
de variados tamanhos
Ligação de adaptadores
TTAA AAT
TAATTC
G
5’TA
MseI adaptadorTTAA5’
EcoRI adaptador
AATG
MseI adaptador
PCR Amplificação Pre-seletiva
TTAA
AATTC
G
TA
AAT
T
A5’ C 5’
PCR Amplificação seletiva
AAC5’
AATTC
GTTAA AAT
TTAMarcação de primers
AAC 5’Primers
AFLP
AFLP
Polimorfismo
AFLP
REDENÇÃO
 COLOR
 IAC-22
 PRECOCE
MARCADOR AFLP
Tamcot SP-37 
0.49 0.58 0.68 0.77 0.87
REDENÇÃO
 ITA-96
 REDENÇÃO
 ITA-90 Deltapine Acala 90
GH-11-9-75
AFLP
AFLP Brássica diversidade
Tomate
SacaroseSacarose-- AFLPAFLP
AFLP nabo 
•••• A grande quantidade de fragmentos que são gerados e resolvidos em 
um único gel, é o mais alto entre todas as tecnologias de marcadores.
• Grande poder de detecção de variabilidade genética.
Da mesma forma que o ensaio de RAPD, o ensaio AFLP não requer 
conhecimento prévio de seqüência de DNA.
Vantagens dos marcadores AFLP:
• Depois de preparados os fragmentos amplificáveis, um grande número 
de bandas polimórficas pode ser rapidamente obtido simplesmente com a 
variação das bases arbitrárias dos primers.
• O ensaio de AFLP é bem mais eficaz quando comparado ao ensaio de 
RAPD, pois na etapa de PCR, são utilizados primers bem mais longos, o que 
aumenta a especificidade da amplificação, evitando com isso a competição 
que ocorre durante a PCR no ensaio de RAPD.
Desvantagens dos marcadores AFLP:
•••• Baixo conteúdo de informação genética por loco .
• Marcadores AFLP são dominantes, genótipos 
heterozigotos não podem ser diretamente discriminados dos 
homozigotos.
• A análise de marcadores AFLP envolve um número 
maior de passos do que a análise de RAPD, uma maior 
quantidade de reagentes ( enzimas de restrição, adaptadores quantidade de reagentes ( enzimas de restrição, adaptadores 
e primers específicos ).
• Um DNA de alto nível de pureza é necessário para 
garantir a digestão completa pelas enzimas de restrição em 
todas as amostras, a digestão parcial ou a má qualidade do 
DNA pode facilmente levar a interpretações errôneas do 
polimorfismo.
MARCADORES MOLECULARES
• Construção de mapas genéticos
• Análise da diversidade genética
• Mapeamento de características de interesse 
agronômicoagronômico
AVALIAÇÃO DE POLIMORFISMOS DE SEQÜÊNCIAS DE DNA
MARCADORES MOLECULARES
• Acesso de regiões intergênicas
• Regiões que não codificam seqüências gênicas
INTERESSE
Marcadores para identificação de alelos específicos
PCR- específicos
Automatização do seqüenciamento de DNA
• Uso de primers específicos seqüências já mapeadas ou 
caracterizadas obtidos da conversão de marcadores 
RAPD(SCAR), RFLP(STS), AFLP, SSR
• Conversão:
Marcadores PCR-específicos (Conversão de marcadores)
• Obtidos a partir de marcadores já existentes ou 
Sequências expressas de banco de dados
• Conversão:
• Clonagem do DNA amplificado pelo marcador
• Sequenciamento
• Desenho de primers específicos (superior a 20pares de bases)
• Útil na seleção assistida: resistência a doenças, cor de flor
• Se os primers estiverem disponíveis, as técnicas apresentam 
custo baixo. 
SNP- Polimorfismo de um nucleotídeo
•Single Nucleotide Polymorphism ou Polimorfismos de Nucleotídeos 
Únicos 
• Polimorfismo baseados na alteração de uma única base no genoma
•Exemplo: AAGGTTA muda para ATGGTTA
MARCADORES DERIVADOS DE SEQÜENCIAS 
EXPRESSAS
.
Tipos mais comuns de SNPs:
•Transição: base purica é substituída por 
outra púrica A-T, G-C
• Transversão: púrica substituída por 
pirimídica ou vice-versa : A-C, G-T, A-C e C-T
•Podem ocorrer em regiões expressas e não expressas
• São estáveis do ponto de vista evolutivo
•SNP se ocorrer em pelo menos 1% da população
• Alta freqüência e distribuição no genoma:
Genoma humano: 90% polimorfismo – SNPs 1,42 milhão
Milho: 1SNP – 48pb (Regiões não-codificadoras) 
Total – 21.502 SNPs
São encontrados no genoma em :
•Haplogrupos: mutações que ocorrem próximas e são herdadas juntas
Indivíduo Seqüência encontrada Haplogrupo
1 GATATTCGTACGGATGTATC AG
2 GATGTTCGTACTGATGTATC GT
•Individuais:
Total – 21.502 SNPs
1SNP – 131 pb (Regiões codificadoras) Barker, 2002
Métodos para detectar SNPs
SNPs� não necessitam da separação de fragmentos de DNA por 
tamanho
• Sequenciamento de segmentos amplificados via PCR de indivíduos 
diferentes
•Descoberta de SNPs em bibliotecas genômicas (SNP Finder)
•Descoberta de eSNP em bibliotecas de EST
São encontrados em:
1. Em regiões codificadoras: podem geraralelos
2. Em regiões não codificadoras: servem como marcadores 
moleculares.
VANTAGENS
• Abundância no genoma
•Elevado grau de polimorfismo
• Detecção de diferentes alelos para genes de interesse 
DESVANTAGEMDESVANTAGEM
� Seqüenciamento de DNA em grande escala 
Aplicações
• Construção de mapas genéticos
• Mapeamento de características de interesse
• Análise de populações
• Identificação de cultivares• Identificação de cultivares
ESTP – Expressed Sequence Tag Polymorphisms
Polimorfismo de seqüência Expressa Marcada
Seqüência de DNA para genes expressos
•Desenvolvimento de marcadores baseados na seqüência de genes
• Teste em diferentes genótipos 
Podem ser identificadas ainda: 
Microarray
SAGE (Serial Analysis of Gene Expression)
Diferential display 
Trabalha-se com a seqüência do gene 
Identificação de plantas � variantes alélicos de um gene
ASP – Allele Specific Polymorphism
Polimorfismo Alelo Específico
Eventos de Inserção / Deleção / Substituição de base na região 
transcrita de um gene
Desenvolvimento
•Identificação e seqüenciamento dos variantes alélicos do gene 
de interesse
•Desenho de um par de primers
Anelamento – local de inserção / deleção / substituição Anelamento – local de inserção / deleção / substituição 
Uso de técnica PCR para a 
detecção de OGM.detecção de OGM.
Sistema PCR screening
Detecta Segmento comum às 
Técnica de PCR
PCR Qualitativo detectar (screening)
identificar (específico)
Detecta Segmento comum às 
construções gênicas
CaMV 35S
Promoter
Petunia CTP NOS Terminator
Soja RR:
CP4 EPSPS
Ex.:
Método de Rotina
Problemas Falso positivo
Sistema PCR screening
Presença natural da sequência alvo
Família Cruciferae
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
Sistema PCR específico
� Detectar e identificar OGMs
� Amplifica região específica do evento
Ex.:
CaMV 35S
Promoter
Petunia CTP NOS Terminator
Soja RR:
CP4 EPSPS
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
� Necessário conhecer a seqüência alvo
Problemas Obtenção de seqüências
Banco de dados
PCR Multiplex
Sistema PCR específico
PCR Multiplex
� Amplifica múltiplas seqüências alvo
� Utiliza combinação de primers
� Identificados simultaneamente quatro eventos 
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
PCR Quantitativo
PCR Semi quantitativo
� Amplificação DNA alvo
� Comparação visual com DNA padrão� Comparação visual com DNA padrão
� Resultado em faixas
� Detecta a partir de 1% de OGM
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
PCR Quantitativo
PCR competitivo
- Padrão interno de DNA DNA competitivo
- Visa a padronização do teste de PCR
- Geram bandas distintas
- Amplifica DNA alvo e competitivo
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
35S-Promotor NOS
DNA fragment of transgenic soy
Primer 1 Primer 2
Amostra:
Princípio DNA competitivo
Padrão Interno: Artificially produced, shortened DNA fragment
Primer 1 Primer 2
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
PCR real timePCR real time
- Amplificação e quantificação simultânea
- Utiliza dois primers e uma sonda
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
2. Extensão do primer e hidrólise da sonda1. Anelamento específico - sonda e primer
PCR real time
2. Extensão do primer e hidrólise da sonda
3. Liberação da sonda 4. Sinal aumenta em proporção ao número de ciclos
1. Anelamento específico - sonda e primer
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
PCR real time
PCR-Cycles
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
F
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
e
 
I
n
t
e
n
s
i
t
y
15,0 %
GMO DNA
Detection
PCR real time
35302520
F
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
e
 
I
n
t
e
n
s
i
t
y
Cycle Number
0,1 %
0,5 %
2,0 %
15,0 %
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS
Considerações sobre PCR
Vantagens
� sensibilidade
� detectar, identificar e quantificar
� estáveis
Desvantagens
� custo ($75-300)
� equipamentos sofisticados
�mão obra especializada
DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE DETECÇÃO DE COMPONENTES GENETICAMENTE 
MODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOSMODIFICADOS EM PLANTAS E DERIVADOS