Apresentação PCR NESTED

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Nested PCR
Acadêmicas: Andrieli Castro
 Karine dos Santos
 Salete Steffenon
O que é o Nested PCR?
É uma PCR em duas etapas.
E é útil quando impurezas que inibem a amplificação do DNA estão presentes nas amostras ou quando a quantidade de DNA do agente que se deseja detectar é muito pequena.
Nested PCR
Em seqüência explicamos
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Nested PCR
O primeiro par de iniciadores de PCR (com setas azuis) ligam-se ao par exterior dos locais de ligação dos iniciadores e amplificar todo o DNA entre estes dois locais.
Nested PCR
Produto da PCR após a primeira rodada de amplificação
Nested PCR
Segundo par de iniciadores aninhados (vermelho com setas) ligam-se o primeiro produto de PCR. Os sítios de ligação para o segundo par de iniciadores são algumas bases "interno" para os locais de ligação de primers primeiro.
Nested PCR
Produto de PCR final após a segunda rodada.
Vantagens e Desvantagens.
VANTAGENS:
Aumentar a sensibilidade e a especificidade da primeira etapa a apartir da segunda.
A técnica.
DESVANTAGENS:
Mais tempo;
Mais reagentes;
Maior risco de contaminação.
Diagnósticos com Nested PCR
Diagnóstico com Nested PCR
Diagnóstico com Nested PCR
Referências
LIMA, G.F.M.C. Análise Comparativa em tempo real, Nested PCR e teste imunocromatografica em amostras de sangue processadas em pool, como plataforma de diagnóstico molecular e sorológico de malária em larga escala. Dissertação, FMUS, São Paulo, 2011. Acesso em: 20 Out. 2014.
VIEIRA, D.P. Técnicas de PCR: Aplicações e Padronização de Reações. Acesso em: 22 Out. 2014 Disponível em: <www.feas.br>
FUNGARO, M.H.P. PCR na Micologia. Rev Biotecnologia Ciência e Desenvolvimento. Acesso em: 21 Out. 2014. Disponível em: <www.biotecnologia.com.br>