Aulão Teórico-Prática MBI 100

Prévia do material em texto

Aulão Teórico-Prática MBI 100
Demonstração da Presença de Microrganismos no Ambiente
- Microrganismos são encontrados em qualquer ambiente.
- Meio aquático foi provavelmente o ambiente original dos microrganismos, a partir do qual se especializaram e colonizaram o ambiente terrestre.
- A maioria dos microrganismos não inócuos (não causam danos) ou benéficos, havendo relativamente poucos que causam prejuízos (causam doenças ou deterioram os alimentos e o meio ambiente).
- Inoculação: Introdução ou adição do microrganismo ou de estruturas (esporos, micélio) em um meio de cultura ou hospedeiro.
- Bico de Bunsen: esteriliza a região circundante, evitando eventuais contaminações do material em estudo.
- Controle: tratamento para comprar (sem inoculação)
- Os micro inoculados crescem em placas estéreis formando colônias em meio líquido (meio fica turvo) ou crescem em meio estéreis.
- Porque utiliza-se meio estéreis- Porque são meios que inicialmente não tem nenhuma presença de microrganismos, livre de contaminações.
Sobre a presença dos microrganismos no ambiente é incorreto afirmar que:
a- (	) Meio aquático foi provavelmente o ambiente original dos microrganismos, a partir do qual se especializaram e colonizaram o ambiente terrestre
b- (	) Existe no ambiente microrganismos benéficos e os que causam doenças em plantas e animais
c- (	) os microrganismos são encontrados em todos os tipos ambiente, exceto em regiões vulcânicas ou nos oceanos mais profundos
d- (	) São: Causadores de doenças, produtores de antibióticos, simbioses, nutrição animal, reciclagem de nutrientes na biosfera, controle biológico, produção de Alimentos, fermentação alcoólica, ciclos biogeoquímicos, biorremediação. 
Sobre o processo artificial de inoculação de microrganismos é correto afirmar que:
I- Inoculação: Introdução ou adição do microrganismo ou de estruturas (esporos, micélio) em um meio de cultura ou hospedeiro.
II- Bico de Bunsen: esteriliza a região circundante, evitando eventuais contaminações do material em estudo.
III- Controle: tratamento sem inoculação
IV- Os micro inoculados em meio líquido crescem em colônias, formando estrias
V- Utiliza-se meio estéril porque são meios que inicialmente não tem nenhuma presença de microrganismos, livre de contaminações.
a- (	) I, II, III, IV estão corretas
b- (	) Todas estão corretas
c- (	) II, III, IV e V estão corretas
d- (	) I, II, III, V estão corretas
Preparações Microscópicas a fresco
- Coloca-se uma gota de corante, e depois uma gota de suspensão de micro para evitar a contaminação do corante com o micro.
- Vantagens: Possibilidade de observar a motilidade de certos grupos de microrganismos, movimento de cílios e flagelos
- Desvantagens: estruturas celulares não se manterão integras por maior período de tempo, estando metabolicamente ativas e sujeitas a morte celular.
-Azul de Metileno- Corante vital- entra em contato com a célula viva, o corante é reduzido e se torna incolor. As células que permanecem coradas de azul são células mortas. Celulas incolores: células vivas. Células Azuis: Mortas
Em um laboratório de microbiologia, um estudante utilizou-se de uma preparação microscópica a fresco para observação de um determinado tipo de micro.
Sobre esse tipo de procedimento, é correto afirmar que:
I- Ao observar leveduras colocar antes sobre a lâmina, uma gota de corante e depois uma gota de suspensão de leveduras.
II- Coloca-se uma lamínula sobre a lâmina com cuidado para evitar a formação de bolhas de ar.
III- Para corrigir a focalização com o microscópio travado, utiliza-se o Micrométrico e macrométrico.
 IV- É necessário a utilização de óleo de imersão para as objetivas maiores de 10X.
V- O aumento final é dado pelo aumento conferido pela objetiva utilizada multiplicando pelo aumento conferido pela ocular
a- (	) Apenas I e II estão corretas
b- (	) Todas estão corretas
c- (	) II, III, IV e V estão corretas
d- (	) I, II, V estão corretas
Sobre a preparação microscópica a fresco é incorreto afirmar que:
a- (	) Uma desvantagem é que não pode observar a motilidade de certos grupos de microrganismos, movimento de cílios e flagelos
b- (	) Numa suspensão de células coradas com azul de metileno todas as células vivas ficam incolores
c- (	) Todas as células mortas permanecem azuis
d- (	) Nesse tipo de preparação as células não ficam aptas a observações por um longo período
Preparações Microscópicas fixadas: coloração simples
- Os corantes (sais) são utilizados para aumentar o contraste das células em relação ao meio em que se encontram.
- Cromóforo- uns dos íons responsável pela cor do composto
Corantes básicos (cromóforo com carga positiva) : corar bactérias pq os ácidos nucleicos e componentes de parede celular apresentam carga liquida negativa. Azul de metileno, cristal violeta, fucsina e safranina.
-Coloração simples: células microbianas espalhadas como uma camada fina sobre a lâmina formando o esfregaço; o esfregaço é fixado a lamina por meio de uma exposição breve ao calor; em seguido corado com um único corante.
-Técnica útil para visualizar a forma, arranjo e tamanho das células bact.
Finalidade de fixar o esfregaço pelo calor: manter as estruturas celulares integras, matam as células e inativam as enzimas. 
Preparações a fresco: observa a motilidade dos micro, células não são fixadas nem coradas.
Preparações fiadas: estruturas das células são mantidas intactas. Não pode observar células vivas.
Práticas assépticas: Técnicas utilizadas para evitar contaminações por outros micro e dos operadores.
Os corantes são utilizados para aumentar o contraste das células em relação ao meio em que se encontram. Assinale a alternativa incorreta
a- (	) A maioria dos corantes são sais
b- (	) Cromóforo é responsavel pela cor do corante
c- (	) Corantes básicosAzul de metileno, cristal violeta, fucsina e safranina.
d- (	) Corantes básicos coram bactérias pq os ácidos nucleicos e componentes de parede celular apresentam carga liquida positiva
Coloração simples: células microbianas espalhadas como uma camada fina sobre a lâmina formando o esfregaço. Assinale a alternativa correta a respeito desse método de coloração. 
a- (	) o esfregaço é fixado a lamina por meio de uma exposição longa ao calor
b- (	) Pode-se utilizar mais de um corante nessa tecnica
c- (	) Técnica útil para visualizar a forma, arranjo, mas não o tamanho das células bactérias.
d- (	) Finalidade de fixar o esfregaço pelo calor: manter as estruturas celulares integras, matam as células e inativam as enzimas. 
Preparações Microscópicas fixadas: coloração de gram
Coloração de gram: coloração diferencial- distinção em certos grupos bacterianos reter certos corantes.
Core o esfregaço com cristal violeta pó 1 min; lave com água deslilada; cubra com lugol (funciona como mordente, aumentando a interação entre a célula e o cristal violeta formando um complexo insolúvel cristal violeta-iodo) por 1 min; lave o excesso; lave rapidamente a preparação com etanol (atua como descolorante) 95%; lave o excesso; Cubra o esfregaço com Fucsina ou safranina (corante de contraste) 30 s; lave excesso; deixe secar
Gram negativas- quando lavadas com álcool perdem rapidamente o complexo cristal violeta-iodo ficando incolores
Gram positivas- resistem a descoloração (maior camada de peptideoglicano, ac teicoico e lipoteicoico) permanecendo roxas.
Gram positiva- roxo(cristal de violeta) acido teicoico e lipoteicoico 
 
Gram negativa- vermelho (safranina) exopolissacarideos 
Assinale a alternativa incorreta
a- (	) bactérias gram negativas são células que se descoloram com o álcool e se coram com o corante fucsina ou safranina
b- (	) Gram positicas retem o cristal violeta não se descorando como alcool
c- (	) Fucsina e Safranina são corantes diferenciais
d- (	) cristal Violeta e o lugol são corantes primários
Maria utilizou a coloração deGram e identificou uma bactéria sendo uma espécie de Bacillus, um grupo gram positivo. Assinale a alternativa correta sobre esse método 
a- (	) Com essa técnica Maria observou a forma, mas não o arranjo predominante da espécie
b- (	) no final da coloração Maria observou células roxas, cor característica do corante cristal violeta
c- (	) O complexo insolúvel é removido pelo alcool 
d- (	) células gram positivas não absorvem o corante safranina 
Preparo e Esterilização de meios de cultura
Meios de cultura devem proporcionar todos os elementos que compõe a célula (C N S P...). 
Meios complexos- composição química não é completamente conhecida. Ex: estrato de carne
Meios sintéticos- componentes químicos puros em quantidades e composições definidas
Meio mínimo: fornece somente os nutrientes essenciais ao desenvolvimento do micro. Ex: BDA
Meios diferenciais: permite diferenciar espécies bacterianas com base em somente características morfológicas
Meio de enriquecimento: favorece o crescimento de uma determinada espécie microbiana em relação a outras espécies que possam estar presentes
Meio seletivo: inibe o crescimento de determinadas espécies, permitindo somente o crescimento da população desejada.
Consistencia dos meios de cultura: Líquidos (estudos de crescimento, processos de fermentação e produção de biomassa); sólidos (contagem, isolamento e manutenção de culturas); rsemi-sólidos (placas de lise). Agente solidificante: Agar
Diferenciar os microrganismos autotróficos e heterotróficos 
Fatores que interferem no crescimento nutricional: temperatura, ph, presença de O2 e salinidade
Esterilização por calor seco- Atua sobre os microorganismos provocando a oxidação dos constituintes celulares orgânicos e a desnaturação e coagulação das proteínas. Penetra nas substâncias de uma forma mais lenta que o calor úmido e por isso exige temperaturas mais elevadas e tempos mais longos, para que haja uma eficaz esterilização.
São utilizadas as estufas. Conforme o calor gerado recomenda-se um certo tempo: a 170 Graus Celsius, são necessários 60 minutos. A 120 Graus são necessários 12 horas.
Vantagens: não forma ferrugem, não danifica materiais de corte. É o ideal para vidros, metais, algumas gorduras e substâncias em pó.
Desvantagens: O material deve ser resistente a variação da temperatura. Não esteriliza líquidos.
Calor úmido: Atua também desnaturando e coagulando as proteínas das células microbianas, mas a água vai influenciar a destruição das membranas e enzimas pois pode induzir a destruição das ligações de hidrogénio, o que vai tornar estes processos mais eficazes e diminuir o tempo de exposição.
Substancias termolábeis- aumento da temperatura inativa a molécula. Não pode utilizar esterilização desses meios de cultura em autoclave. Utiliza filtração.
Esterilização: processo pelo qual se eliminam todas as formas de vivas presentes em um material ou ambiente
Sobre o processo Ágar é incorreto afirmar que:
a- (	) É o principal agente solidificante utilizado em Microbiologia
b- (	) É um polissacarídeo derivado de algas 
c- (	) Apresenta capacidade de fundir a 96 ºC e solificar a 45ºC
d- (	) Um meio liquido sem ágar suporta temperaturas mais elevadas que um meio sólido
Sobre a composição ou função dos meios de cultura é certo afirmar que:
a- (	) No meio mínimo o microrganismo vai ter que sintetizar a maioria dos aminoácidos necessários para o seu crescimento
b- (	) Meios diferenciais permitem diferenciar espécies bacterianas com base em somente características morfológicas e Meio seletivo favorece o crescimento de uma determinada espécie microbiana em relação a outras espécies que possam estar presentes
c- (	) Meio de enriquecimento: inibe o crescimento de determinadas espécies, permitindo somente o crescimento da população desejada.
d- (	) Todas as alternativas acima estão corretas
Antônio seguiu os seguintes passos resumidamente para preparo de meio de cultura:
Pesou os componentes, misturou, completou com água e ajustou o pH
Adicionou quantidade específica de Agar
 Utilizou a autoclave para esterilizar seguindo binômio tempo x temperatura necessário.
Verteu o meio contendo Agar em placas de petri estéreis
É incorreto afirmar que Antônio:
a- ( 	) Obteve um meio de cultura muito utilizado para estudos de crescimento, processos de fermentação e produção de biomassa.
b- (	) Obteve no final do processo um meio estéril
c- (	) Utilizou calor umido para esterilização
d- (	) Obteve um meio sólido
Isolamento e enumeração de micro em cultura pura
O estudo de características definidas de uma dada espécie só pode ser realizado com pop. Puras
Cultura pura- é uma cultura de células genética e morfologicamente idênticas. Meio sólido. Quando uma colônia isolada é transferida para um novo meio.
Colonia- Agregado de células idênticas
Estria simples e composta: Obtenção de cultura pura pelo método de esgotamento de inoculo em meio solido. No final das estrias é possível visualizar colônias puras isoladas e transferir para um meio estéril.
Medida da densidade populacional em uma amostra de cultura pura- Contagem de colônias em placa pelo métodos da placa derramada ou Pour Plate- Diluição do inoculo inicial para obtenção de um número que permite fazer a contagem entre 25-300 UFC (nesse intervalo permite a contagem do numero de colônia e com o fator de diluição obtem a quantidade da densidade inicial.
Finalidade das diluições seriadas: diminuição do numero de colônias até um valor onde é possivel fazer a contagem.
UFC- Unidade formadora de colonia
Meio solido: preferencial para isolamento de micro, pq possibilita selecionar uma colonia isolada, imobilizam as celulas
Sobre as tecnica de isolamento apresentadas em aula é incorreto afimar que:
a- (	) Tecnica de estria simples e composta são tecnicas do esgotamento do inoculo
b- (	) O espectrofotômetro é utilizado para determinação indireta da massa celular por densidade otica
c- (	) A técnica de filtração é importante para concentrar a amostra 
d- (	) Spread plate é um método de semeadura em profundidade e Pour plate é um método de semeadura por espalhamento
Sérgio calculou a densidade populacional de uma amostra inicial, e para isso obteve a contagem de 190 colonias na diluição 10-4. Qual é a quantidade aproximada da amostra inicial
a- (	) 1.900
b- (	) 190.000
c- (	) 19.000
d- (	) 1.900.000
Assinale a alternativa correta
a- (	) Cultura pura- é uma cultura de células genética e morfologicamente idênticas. 
b- (	) Colonia- Agregado de células idênticas
c- (	) Finalidade das diluições seriadas: aumentar do numero de colônias até um valor onde é possivel fazer a contagem.
d- (	) UFC- Unidade formadora de colonial
Identificação de Bacterias
Identificação de Bacterias- características morfológicas (forma, arranjo das células), culturais (aparência macroscópica em diferentes meio de cultura, ex: pseudomonas); fisiológicas (metabolitos, enzimas); genéticas (filogenia)
Enzimas intra e extracelulares (ligadas a parede exercem sua atividade catalítica fora da célula
Manual de Bergey- identificar bacterias
Provas bioquímicas
Testes IMViC ( Indol:hidrólise do triptofano com formação de uma coloração vermelha no meio, Vermelho de Metila, Voges Proskauer e Citrato)- importantes para diferenciar as bactérias entéricas (intestinais) de natureza patogênica ou não, que podem estar presentes como contaminantes da água e dos alimentos
Fermentação de açucares- produção de CO2
Teste da catalase- Peroxido de hidrogenio é adicionado a uma cultura catalase positiva, bolhas do gás O2 formam.
Hidrólise do amido- iodo reage com amido formando complexo azul. Amilases degradam formando zonas claras ao redor das colônias.
Assinale a alternativa correta:
a- (	) Existe Kits miniaturizados de identificação de microrganismos
b- (	) Os testes I M Vi C correspondem a (Indol, Vermelho de metila, Voges Proskauer, Catalasec- (	) No teste de hidrólise de amido a formação do halo de hidrólise corresponde ao resultado negativo 
d- (	) Todas as respostas acima estão corretas
Porque os testes bioquímicos são importantes na identificação de bactérias?
a- (	) Porque o metabolismo microbiano gera produtos que são excretados pelas bacterias no meio de cultura
b- (	) A avaliação da presença de um conjunto de enzimas pode ser característica de um único grupo.
c- (	) Os resultados podem ser comparados com o Manual de Bergey
d- (	) Todas as respostas acimas estão corretas
Análise Bacteriologica da Agua
Determina a presença de micro de origem fecal (dejetos humanos e animais)
Bacterias Coliformes: Bastonetes, Gram negativos, não formardores de esporos, aeróbios, ou anaeróbios facultativos, com capacidade de fermentar a lactose com a produção de acido e gás em 48 horas a 35ºC Ex: escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter
Coliformes Termotolerantes (fecais) intestinos de animais homeotérmicos. Fermentam lactose com a produção de gás a 44,5graus por 24 horas. E. coli
Teste presuntivo: pesquisa de coliformes fecais, termotolerantes e E. coli
Usar pagina 52 apostila
Qual a principal diferença entre as bactérias coliformes e as coliformes termotolerantes
a- (	) As coliformes são gram negativas e as termotolerantes gram positivas 
b- (	) Apenas as termotolerantes fermentam a lactose, exemplo da E. coli
c- (	) As termotolerantes possui habitat exclusivo de intestino de animais homeotermicos
d- (	) as coliformes fermentam a uma temperatura maior e com menor tempo do que as termotolerantes.
Sobre todo o processo de analise bacteriologia da água é correto afirmar que:
a- (	) Bacterias Coliformes são Bastonetes, Gram positivos, formardores de esporos, aeróbios, ou anaeróbios facultativos, com capacidade de fermentar. Ex: escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter
 b- (	) Coliformes Termotolerantes (fecais) habitam intestinos de animais heterotérmicos. Fermentam lactose com a produção de gás a 44,5graus por 24 horas
c- (	) Teste presuntivo pesquisa coliformes fecais, termotolerantes e E. coli
d- (	) Todas as respostas estão corretas
Sobre todo o processo de analise bacteriologia da água é incorreto afirmar que:
a- (	) Utiliza o caldo lactosado como meio de incubação durante o teste presuntivo 
b- (	) A técnica de NMP vai indicar o possível numero de bactérias do grupo coliforme e qual o numero mais provável na amostra
c- (	) A técnica NMP é uma técnica de análise lenta, porém muito sensível. Pode ser utilizada na analise de solos, alimentos, água.
d- (	) Todas as respostas estão incorretas
Alterações fenotípicas e genotípicas em Micro
Mutação e Recombinação gera variabilidade genética. Alteração na sequencia de bases do DNA.
Mutação Induzida: Agentes físicos – Luz UV. Rompe as ligações de hidrogênio que unem a fita dupla de DNA e liga no lugar 
Penicillium griseoroseum: luz UV causa mutação modificando a pigmentação dos conídios ou na organização dos conidióforos.
Os mutantes apresentam o genótipo diferente da linhagem parental.
As alterações genotípicas são alterações no DNA que podem ser transmitidas de uma geração para outra.
Modificações nas condições ambientais podem provocar alterações fenotípicas que são reversíveis.
As colônias não pigmentadas de Serratia marcescens não são consideradas mutantes pq essas colonias apresentam o mesmo genótipo que a linhagem parental, ou seja não houve mutação.
 O tratamento com a luz UV reduz o numero de colonias de Penicillium pq a mutação atinge genes que codificam para processos vitais.
Sobre as alterações fenotípicas e genotípicas nos microrganismo é incorreto afirmar que
a- (	) Os mutantes apresentam o genótipo diferente da linhagem parental.
b- (	) As modificações genotípicas são reversíveis e as fenotípicas são irreversíveis
c- (	) Modificações nas condições ambientais podem provocar alterações fenotípicas
d- (	) As alterações genotípicas são alterações no DNA que podem ser transmitidas de uma geração para outra.
Assinale a errada:
a- (	) Mutação espontânea ocorre naturalmente sem adição de um agente mutagênico
b- (	) A mutação induzida resulta da exposição do microrganismo a um agente mutagênico (Que pode ser físico , químico ou biológico
c- (	) Crescimento de Serratia marcescens em diferentes temperaturas é um exemplo de uma alteração genotípica resultante de uma mudança ambiental.
d- (	) a luz UV reduz o numero de colonias de Penicillium pq a mutação atinge genes que codificam para processos vitais
Alterações fenotípicas X Genotípicas, marque a opção correta
a- (	) fenotípica ocorre na maioria da população enquanto a genotípica é um evento raro
b- (	) Ambas alterações são irreversí
c- (	) Resistencia a antibióticos é um tipo de alteração fenotípica
d- (	) genes normais são herdados pelas gerações subsequentes enquanto genes alterados são expressos em resposta ao ambiente