Eletroforese em Biologia Molecular

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Eletroforese 1
3/4/2013 Prof. Dr. Paulo Roberto Rodrigues 
Ramos
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Eletroforese
•Introdução:
• Migração de moléculas ionizadas.
•Cargas elétricas, forma e pesos moleculares.
•Campo elétrico.
•Proteínas solúveis, enzimas, ácidos 
nucléicos.
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ESTUDOS
• TAXONOMIA, 
• FISIOLOGIA, 
• BIOQUÍMICA, 
• GENÉTICA.
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FUNDAMENTOS DA 
TÉCNICA
• Macromoléculas:
(DNA, RNA, Proteínas...) possuem carga 
elétrica.
• São capazes de movimentar-se, quando 
submetidas à um campo elétrico.
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Migração
• As moléculas com carga 
negativa migrarão para o pólo 
positivo (ânodo) e aquelas com 
carga positiva para o pólo 
negativo (cátodo).
Eletroforese 2
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Proteínas 
• Moléculas anfóteras: adquirem 
carga em função do pH meio.
• PI: Ponto isoelétrico.
• pH>PI = ânodo
• pH<PI = cátodo
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MEIO SUPORTE
• Química e fisicamente inerte para não interferir na 
mobilidade das moléculas
• Papel, acetato de celulose ou cellogel, agar, 
agarose, amido, agar-amido, poliacrilamida, ...
• Pesquisador e objetivos do estudo
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Força exercida sobre as 
moléculas
F = V. q / d
• F= Força que atua sobre uma molécula. 
• V= Voltagem - Diferença de Potencial 
entre os dois eletrodos = campo elétrico
• q= Carga líquida da molécula
• d= Distância entre 2 eletrodos
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Equação de Stokes
f = 6 . pipipipi r n v
f= força de oposição à migração da 
molécula 
r= raio da molécula 
n= viscosidade do meio 
v= velocidade de migração da molécula
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E se f=F ????
• V. q / d = 6 pipipipi r n v 
• v = V . q /6 pipipipi r n d 
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Gel de Poliacrilamida
• Acrilamida+Bis-acrilamida 
• Riboflavina + TEMED
• Persulfato de Amônio +
TEMED
Eletroforese 3
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Montagem da Placa
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Montagem da Placa
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Montagem da Placa
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Montagem da Placa
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Montagem da Placa
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Montagem da Placa
Eletroforese 4
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Preparo da Amostra
• Extração,
• Solubilização,
• Dosagem,
• Aplicação.
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Preparo da Corrida
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Preparo da Corrida
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Preparo da Corrida
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Preparo da Corrida
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Aplicação da Amostra
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Corrida
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Corrida
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Revelação 
• Coloração 
com 
Coomasie.
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Resultado
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Vamos fazer um Intervalo?
•
Eletroforese 6
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Eletroforese em Gel de 
Agarose
• Amplamente usado em Biologia 
Molecular.
• Separa em função do tamanho do 
fragmento de DNA.
• Empregado para separação de classes 
de proteínas.
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Eletroforese em Gel de 
Agarose
• Preparando o 
meio suporte:
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Eletroforese em Gel de 
Agarose
• Preparando a 
bandeja:
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Eletroforese em Gel de 
Agarose
• Preparando os 
poços
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Eletroforese em Gel de 
Agarose
• Aplicando as 
amostras
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Eletroforese em Gel de 
Agarose
• Corrida
Eletroforese 7
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Eletroforese em Gel de 
Agarose
• Resultado:
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Análise - VDS
• Determinação 
dos rfs,
• Peso 
Molecular,
• PI;
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Bom apetite e bom final de 
semana!!!!!!!!