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14/11/2013
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Microscopia Óptica
- Microscópio: micrós (pequeno) e skopein (ver, olhar)
- Microscopia óptica ou de luz: utiliza a luz visível e um
sistema de lentes para ampliar imagens e permitir a
visualização de estruturas que não podem ser
visualizadas com o olho desarmado
- É o mais simples, mais antigo e mais utilizado método
de microscopia
Histórico
- Primeira evidência do uso de lentes para ampliar imagens data 1021 no Book of 
Optics publicado por Ibn Al-Haytham
- No século XIII, Roger Bacon descreveu as propriedades das lentes de vidro 
para aumento na Inglaterra depois que os óculos foram inventados na Itália
- Anton van Leeuwenhoek (1632-1723) incorporou o uso do microscópio à 
biologia. Utilizava microscópios simples com uma única lente potente.
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1. Lentes oculares
2. Revólver das objetivas
3. Lentes objetivas
4. Parafuso macrométrico
5. Parafuso micrométrico
6. Platina
7. Fonte de luz
8. Condensador e o Diafragma
9. Charriot
Base, Braço e Canhão
Fonte de Luz
- Emite luz destinada a atravessar o 
espécime (material) a ser analisado
-Antigamente usava-se um espelho
Lente Condensadora ou condensador
-Projeta um cone de luz em direção ao 
material a ser analisado
Diafragma
- Regula a quantidade de luz que vai se 
projetar sobre a amostra e a área a ser 
iluminada
Objetivas
- 3 ou mais lentes presentes no revólver das 
objetivas
- Coletam a luz que atravessa a amostra
- Promovem aumento de 4x, 5x, 10x, 20x, 
40x, 50x, 100x
- Objetiva de Imersão (50x ou 100x). 
Necessita de uma gota de óleo para reduzir a 
refração dos raios luminosos
Oculares
- Uma ou duas lentes (5x, 10x, 16x)
- Ampliam a imagem captada pelas objetivas
- Ampliação oferecida por um microscópio: 
aumento pelas objetivas x aumento pelas 
oculares
Plataforma ou platina
- Sustenta a amostra analisada
- Apresenta um orifício por onde atravessa a 
luz que incide sobre o material a ser analisado
Charriot
- Apresenta dois braços metálicos que 
prendem a lâmina a ser analisada
- Permite deslocar a lâmina de um lado para o 
outro / de frente para trás
Parafusos Macrométrico e 
Micrométrico
- Deslocam a platina para baixo e para cima
- Permitem ajuste do foco (grosseiro e fino)
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Base
- Dá sustentação e estabilidade ao 
microscópio
Braço
-Suporta elementos ópticos (platina, o 
micrométrico e macrométrico, o revólver das 
objetivas)
O canhão das oculares
- Contém uma série de lentes que permitem a 
projeção dos raios luminosos para as oculares
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Limitações do Microscópio de Luz
- Em grandes aumentos com luz transmitida ocorre muita difração e os objetos podem 
aparecer borrados
- Poder de resolução: capacidade de perceber detalhes.
- Limite de resolução (capacidade de distinguir dois pontos distintos) é prejudicado pela 
difração da luz
LR= K.λ / AN
Uso de λ menores, melhora o limite de resolução. 
Microscópio Eletrônico
- Utiliza um feixe de elétrons para iluminar a 
amostra e criar uma imagem ampliada
- Tem melhor limite de resolução que o 
microscópio de luz e poder de gerar 
aumentos maiores
- Melhor resolução do ME se deve ao menor 
comprimento de onda do feixe de elétrons 
que o da luz visível
- Utiliza lentes eletromagnéticas para 
controlar o feixe de elétrons e focalizá-lo 
sobre o material a ser analisado
Histórico
- Primeiro protótipo foi criado em 1931 por 
Ernst Rusk e Max Knolt (Alemanha)
- Primeiro comercializado em 1939 pela 
Siemens. Construído no Canadá.
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Microscópio Eletrônico de 
Transmissão
- Forma original. Utiliza um feixe de 
elétrons de alta voltagem para criar as 
imagens
- Elétrons são emitidos pelo aquecimento 
de um filamento de tungstênio (catodo). 
Feixe de elétrons é acelerado pelo anodo 
devido a uma diferença de potencial (40 
a 400Kv).
- Feixe é focalizado por lentes 
eletromagnéticas (bobinas) e transmitidos 
através do espécime a ser analisado
- Estruturas do material a ser analisado. 
Eletrondensas (desviam os elétrons) 
Eletronlúcidas (não barram os elétrons)
- Imagem é obtida quando o feixe de 
elétrons que atravessou o espécime é 
projetado sobre uma chapa fotográfica ou 
material fluorescente (ZnS2)
Microscópio Eletrônico de Varredura
- Feixe de elétrons focalizado sobre uma área
- Elétrons incidentes são espalhados sobre a 
amostra (bobina de varredura).
- Elétrons incidentes perdem energia e promovem 
a liberação de elétrons secundários que são 
captados por um detector e transferidos para um 
monitor de vídeo onde a imagem é formada
- Capta bem aspectos da superfície e permitem 
representação em 3D
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Aspectos específicos do ME
Fixação: Estabilizar a estrutura macromolecular da amostra
- Glutaraldeído ou Formaldeído (estabiliza a estrutura proteíca)
- Tetróxido de òsmio (estabiliza a estrutura lipídica e serve como contraste porque tem 
elevado peso molecular (eletrondenso)
- Pode-se fazer a criofixação (congelamento em nitrogênio líquido)
Microtomia: em micrótomos especiais que possibilitam cortes ultrafinos (20 a 100nm) com 
navalha de vidro ou diamante. Tais cortes são permeáveis aos elétrons.
Coloração: metais pesados como o urânio, tungstênio, ósmio para dar contraste às 
estruturas 
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Desvantagens
-Técnica mais difícil e demorada
- Microscópio mais caro
- Necessitam de grande estabilidade e sistema a vácuo para evitar desvios do feixe de 
eletrons
- Imagens em preto e branco (tons de cinza)
Vantagens
- Imagens com muitos detalhes
- Melhor capacidade de resolução