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1 Prof. Dr. Marcos Sousa 1 Transcrição e Processamento de RNA Prof. Dr. Marcos Sousa 2 SÍNTESE PROTÉICA: Dogma central Transcriptase reversa Prof. Dr. Marcos Sousa 3 Região Gênica É a porção que codifica para um produto final, que pode ser uma cadeia polipeptídica ou um RNA O DNA é formado por 2 regiões: Gênicas Intergênicas Região Intergênica É a porção regulatória, que sinaliza o início ou o final de um gene, que influencia a transcrição gênica, ou que é o ponto de início para a replicação do DNA Intergênicas Gênicas Regiões Codificadoras e Não-Codificadoras do DNA Prof. Dr. Marcos Sousa 4 Organização do Gene Prof. Dr. Marcos Sousa 5 O RNA transcrito a partir de um DNA contém informação de um único gene ou de vários genes? Prof. Dr. Marcos Sousa 6 Genes em eucariontes 2 Prof. Dr. Marcos Sousa 7 Procariotos x Eucariotos Procariotos: RNA policistrônico => Unidade de transcrição, com vários cístrons => vários genes Eucariotos: RNA Monocistrônico => unidade de transcrição => um cístron => um gene Prof. Dr. Marcos Sousa 8 Molécula de RNA Prof. Dr. Marcos Sousa 9 Molécula de RNA Não existe equivalência entre as quantidades de A-U e G-C. Fita simples, mas em solução adquire arquitetura tridimensional definida e complexa. Dobramento forma dupla-hélice em regiões complementares. Prof. Dr. Marcos Sousa 10 Todo o DNA da célula é transcrito em proteína? e em RNA? Prof. Dr. Marcos Sousa 11 Tipos de RNAs RNA informacional RNAm RNA funcional RNAt RNAr snRNA Prof. Dr. Marcos Sousa 12 RNA RIBOSSÔMICO Juntamente com proteínas formará os ribossomos que são as organelas celulares responsáveis pela síntese proteica. Procariotos: rRNA 23S, 16S e 5S 3 Prof. Dr. Marcos Sousa 13 Eucariotos: rRNA 28S, 18S, 5,8S e 5S O rRNA também sofre processamento para formar as moléculas funcionais que formarão os ribossomos. Prof. Dr. Marcos Sousa 14 RNA TRANSPORTADOR Molécula relativamente pequena com de 75 a 90 nucleotídeos. Possuem bases não usuais. Geralmente assumem uma configuração na forma de trevo devido às pontes de hidrogênio que se formam entre os nucleotídeos. Na extremidade 3’ ocorrerá a ligação com o aminoácido que será incorporado na cadeia polipeptídica que está sendo sintetizada pelos ribossomos. Existe uma outra região do tRNA, que é chamada de anticódon, que corresponde à região que será pareada ao mRNA durante a síntese proteica. Prof. Dr. Marcos Sousa 15 RNA transportador: estrutura Prof. Dr. Marcos Sousa 16 Prof. Dr. Marcos Sousa 17 SMALL NUCLEAR RNA Prof. Dr. Marcos Sousa 18 Assim como no processo de replicação do DNA, o RNA formado durante o processo de transcrição será complementar a fita molde do DNA (C-G, G-C, T-A e A-U). 4 Prof. Dr. Marcos Sousa 19 TRANSCRIÇÃO Processo pelo qual o DNA servirá como molde para a síntese de RNA que posteriormente será traduzido em proteínas. Prof. Dr. Marcos Sousa 20 No processo de transcrição, ocorre um desenrolamento da dupla hélice do DNA, sendo então apenas uma das fitas desse DNA transcritas no sentido 5’ – 3’. Prof. Dr. Marcos Sousa 21 Após a ligação da RNA polimerase na região promotora, o gene propriamente dito será transcrito a partir do DNA molde, sempre obedecendo a complementaridade das bases. Prof. Dr. Marcos Sousa 22 São reconhecidas 3 fases na transcrição: Iniciação: ligação da RNA polimerase na região promotora e adição dos primeiros 9 nucleotídeos. Alongamento: dissociação da subunidade sigma e síntese do RNA propriamente dita, sempre no sentido 5’- 3’ com o auxílio de diversos fatores de alongação. Terminação: a RNA polimerase reconhece sinais para o término da transcrição. Prof. Dr. Marcos Sousa 23 Prof. Dr. Marcos Sousa 24 O que indica para a RNA polimerase o local de início de transcrição? Região Promotora e fator sigma => (responsável pelo reconhecimento do local de início da transcrição). TATA box 5 Prof. Dr. Marcos Sousa 25 Existem duas regiões promotoras que estão presentes em todos os organismos. São constituídos pelas seguintes sequências de bases: TATAATG e TATAAAT, que são também conhecidas como TATA box. Prof. Dr. Marcos Sousa 26 Tanto em procariotos como em eucariotos são produzidos 3 tipos principais de RNA: •RNA mensageiro (mRNA) – seqüência que será efetivamente traduzida em proteínas •RNA transportador (tRNA) – responsável pelo transporte dos aminoácidos que formaram a cadeia polipeptídica •RNA ribossômico (rRNA) - formará os ribossomos juntamente proteínas, que são os responsáveis pela síntese das proteínas. A principal enzima envolvida no processo de transcrição é a RNA polimerase. Prof. Dr. Marcos Sousa 27 SÍNTESE PROTÉICA EM PROCARIOTOS Em organismos procariotos, como não existe um núcleo limitado por uma membrana, os processos de transcrição e de tradução ocorrem quase que simultaneamente no citoplasma da célula. Prof. Dr. Marcos Sousa 28 Em procariotos só existe um tipo de RNA polimerase que será responsável pela síntese dos diferentes tipos de RNA: (mRNA, tRNA e rRNA). Prof. Dr. Marcos Sousa 29 Transcrição Prof. Dr. Marcos Sousa 30 Tipos de RNA polimerase Os procariontes só possuem um tipo de RNA polimerase e ou eucariontes três tipos. Em E. coli são 4 subunidades: alfa, beta, beta´e sigma. Formadas por múltip las cadeias polipeptídicas => massa de 500 mil d. As polimerases dos Eucariontes são mais complexas com pelo menos 10 subunidades. Mamíferos => 20 mil a 40 mil de cada uma das polimerases. 6 Prof. Dr. Marcos Sousa 31 Mecanismos de término em bactérias Dois mecanismos em E. coli. Término direto: Encontro com a sequencia de término (segmento rico em CG e 6 ou mais T). Proteína (Fator rho). Esta proteína liga-se ao RNA nascente em algum ponto antes da seq. de término. Na ausência da Polimerase, pode interagir com o dna-rna, terminando a transcrição. Prof. Dr. Marcos Sousa 32 SÍNTESE PROTÉICA EM EUCARIOTOS Nos eucariotos, o processo de transcrição ocorre no interior do núcleo, enquanto que o processo de tradução ocorre no citoplasma. Prof. Dr. Marcos Sousa 33 Prof. Dr. Marcos Sousa 34 Procariotos x Eucariotos Procariotos: transcrição e tradução são simultâneas, logo o RNA não sofre processamento. Eucariotos: transcrição ocorre no núcleo e a tradução no citoplasma. O transcrito inicial (pré-mRNA) sofre processamento o transcrito primário de mRNA dos eucariontes, ao contrário dos procariontes, é amplamente processado. O RNA nascente sofre uma série de alterações: aquisição de revestimento (Cap) na sua extremidade 5’, (cauda poli – A) na extremidade 3’ e remoção exata de introns (splicing) para a formação de mRNAs maduros com mensagens contínuas. Prof. Dr. Marcos Sousa 35 •Existem 3 tipos distintos de RNA polimerase em eucariotos que serão responsáveis pela síntese dos 3 tipos de RNA: •RNA polimerase I – síntese do rRNA. •RNA polimerase II - síntese do RNA pré-mensageiro. •RNA polimerase III – síntese do tRNA. Os RNAs formados após o processo de transcrição sofrem processamento antes de saírem do núcleo e chegarem no citoplasma onde ocorrerá o processo de tradução. Transcrição em Eucariontes Prof. Dr. Marcos Sousa 36 Processamento De uma única cadeia nascente de RNA contendo regiões espaçadoras podem ser produzidas, por exemplo: três tipos de moléculas de rRNA e uma de tRNA, vários tipos de tRNA ou, até mesmo, várias cópias de um mesmo tRNA - sendo isso determinado pela sequência do transcrito. 7 Prof. Dr. Marcos Sousa 37 Splicing Prof. Dr. Marcos Sousa 38 Como a célula determina quais partes do transcrito primário são retiradas? Diferentemente do éxon, a sequencia exata de um íntron parece não ser importante, cada um contém uma curta sequencia que atua como marca para remoção. Os íntrons são removidos por enzimas de RNA e proteínas => snRNPs (snurps) Spliceossomo Prof. Dr. Marcos Sousa 39 Regiões comuns entre os íntrons (motivos) dinucleotídeos entre o 5´ doador de splicing e 3´receptor de splicing e uma adenosina. Prof. Dr. Marcos Sousa 40 RNAmensageiro Moléculas de tamanho variável Em eucariotos, é formada uma molécula de RNA pré-mensageiro que será processado para formar o mRNAfuncional. O processamento do mRNA pode ser dividido em 3 etapas principais: -Adição de um cap, que consiste na ligação de uma 7- metilguanosina, na ponta 5’ do precursor do mRNA -Adição de uma seqüência de adenosinas na ponta 3’. Essa seqüência de adenosinas é também conhecida como cauda poli(A) e é constituída por 150 a 200 unidades. - Splicing ou recomposição, que consiste na remoção de porções intercalares do mRNA. Os genes são divididos em regiões codificantes, chamadas de éxons e intercalares, que não são codificantes, chamadas de íntrons. No processo de splicing, os íntrons são removidos e então é formado o mRNAfuncional. Prof. Dr. Marcos Sousa 41 Prof. Dr. Marcos Sousa 42 RNA transportador: processamento 8 Prof. Dr. Marcos Sousa 43 Processamento alternativo (splicing alternativo) Prof. Dr. Marcos Sousa 44 Exemplo de processamento alternativo: gene da calcitonina Prof. Dr. Marcos Sousa 45 Para onde vão os íntrons ao saírem do RNA??? Prof. Dr. Marcos Sousa 46 RNA autocatalítico O RNA autocatalítico foi descoberto no protozoário Tetrahymena e, nesse organismo, é capaz de se autoprocessar, retirando um íntron de forma perfeita, na ausência de qualquer outra proteína. A posterior descoberta de um rRNA que era responsável pela ligação peptídica entre dois aminoácidos reforçou a ideia de que um RNA poderia ter funções catalíticas. Talvez um RNA primordial poderia ser responsável pelo início da vida e teria a capacidade de se autoduplicar e produzir polipeptídeos a partir de moléculas precursoras.
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