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1 Diversidade Microbiana:Diversidade Microbiana: UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSAUNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA Departamento de MicrobiologiaDepartamento de Microbiologia MBI 101 MBI 101 –– Microbiologia GeralMicrobiologia Geral Diversidade Microbiana:Diversidade Microbiana: Domínio Domínio BacteriaBacteria Domínio Domínio ArchaeaArchaea Diversidade microbianaDiversidade microbiana • Função da evolução dos micro-organismos • ~ 4 bilhões de experimentação evolutiva• ~ 4 bilhões de experimentação evolutiva • Diversidade microbiana foi dirigida, em grande parte, pela exploração de todas as formas possíveis de sobrevivência realizada pelos micro-organismos • Dependente da diversidade metabólica • Diversidade fisiológica refere-se à capacidade de b d õ bsobreviver em condições ambientais extremas: – Temperatura – pH – Salinidade 2 A eA evolução volução biológicabiológica Anaeróbio Aeróbio Oxigenação da atmosfera e a “eOxigenação da atmosfera e a “evolução volução biológica”biológica” CO2 O2 Gases redutores m po si çã o (% ) 20 2 Cianobactérias Anaeróbio Aeróbio Al Plantas Archaea NH3 CH4 CN 4000 3000 2000 1000 0 C om 0.2 Cianobactérias AlgasArchaea Milhões de anos até o presenteMilhões de anos até o presente 3 O Sistema de Três Domínios Carl Woese (1977) A árvore da vida representa uma hipótese evolucionária que encontra-se em processo de refinamento. “ORGANISMOS PRIMITIVOS E ORGANISMOS MODERNOS???” ORGANISMOS MENOS DERIVADOS ORGANISMOS MENOS DERIVADOS DOS DOMÍNIOS ARCHAEA E BACTERIA: - TERMOFÍLICOS E HIPERTERMOFÍLICOS 4 Características que diferenciam os três domínios UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSAUNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA Departamento de MicrobiologiaDepartamento de Microbiologia MBI 101 MBI 101 –– Microbiologia GeralMicrobiologia Geral Diversidade Microbiana:Diversidade Microbiana: Domínio Domínio EukaryaEukarya 5 Complexo de Golgi Vacúolo Estrutura de células eucarióticas Mitocôndria glicocálice Retículo endoplasmático liso Centríolos Membrana plasmática Lisossomo secundário Lisossomo primárioNúcleo Retículo endoplasmático rugoso nucléolo Mitocôndria e Cloroplastos: Ribossomo 70S TeoriaTeoria EndossimbióticaEndossimbiótica Ribossomo 70S Pequeno DNA circular Sequência de rRNA similar às bacterias Dividem independentemente, como as bactérias S í i tibi ti d Sensíveis aos antibioticos de procariotos Possuem bicamada de fosfolipídeos 6 PROCARIOTOSPROCARIOTOS B t iB t i A hA h BacteriaBacteria x x ArchaeaArchaea •• Diferem quanto às propriedades Diferem quanto às propriedades químicas da membrana e parede químicas da membrana e parede celularcelular •• BacteriaBacteria são sensíveis a são sensíveis a tibiótitibióti A hA h ãã •• Ausência de núcleoAusência de núcleo •• Ausência de organelas Ausência de organelas membranosasmembranosas BacteriaBacteria ArchaeaArchaea antibióticos; antibióticos; ArchaeaArchaea são são insensíveis a muitos antibióticosinsensíveis a muitos antibióticos •• As enzimas de síntese de ácidos As enzimas de síntese de ácidos nucléicos e proteínas de nucléicos e proteínas de Archaea Archaea têm semelhança com as de têm semelhança com as de eucariotoseucariotos •• BacteriaBacteria podem ser patogênicas depodem ser patogênicas demembranosasmembranosas •• Grupos evolutivos Grupos evolutivos distintosdistintos •• “Ancestrais” das outras “Ancestrais” das outras formas de vidaformas de vida BacteriaBacteria podem ser patogênicas de podem ser patogênicas de plantas e animaisplantas e animais •• Bactérias típicas são Bactérias típicas são E.coliE.coli, , S. S. aureusaureus, , BacillusBacillus, etc., etc. •• ArchaeaArchaea típicas são termofílicos típicas são termofílicos extremos e metanogênicasextremos e metanogênicas UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSAUNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA Departamento de MicrobiologiaDepartamento de Microbiologia MBI 101 MBI 101 –– Microbiologia GeralMicrobiologia Geral Diversidade Microbiana:Diversidade Microbiana: Domínio Domínio BacteriaBacteria 7 Parede celular de bactérias Gram-positivas Magnetossomo (magnetita, Fe3O4 ) Poli-β-hidroxibutirato 8 O Sistema de Três Domínios Carl Woese (1977) A árvore da vida representa uma hipótese evolucionária que encontra-se em processo de refinamento. Bactérias Espiroquetas Flavobactérias Defferibacter Citophaga Árvore Filogenética do Domínio Bacteria Thermotoga Bactérias verdes não sulfurosas Bactérias verdes sulfurosas Deinococos Planctomyces/Pirella Verrucomicróbios Chlamydia Cianobactérias Bactérias Aquifex Thermodesulfobacterium gram-positivas Nitrospira Proteobactérias 9 Visão geral da filogenia de Bacteria • Pelo menos 17 filos • 4 filos de menor derivação filogenética que4 filos de menor derivação filogenética que contêm espécies termofílicas • 3 filos principais com maior volume de informação fenotípica: – proteobacterias: 5 grupos: alfa, beta, gama, delta e epsilonp – bactérias gram-positivas: Baixo conteúdo G+C Alto conteúdo G+C – cianobactérias ProteobacteriaProteobacteria • Bacteria púrpuras fototróficas: – Bacteria púrpuras sulfurosas e – Bacteria púrpuras não sulfurosas; • Bacteria nitrificantes; • Bacteria oxidantes de enxofre e ferro; B i id d hid ê i• Bacteria oxidantes de hidrogênio; • Metanotróficas e metilotróficas; • Pseudomonas e pseudomonadas; • Bactérias acéticas; • Bactérias fixadoras de nitrogênio; • Neisseria, Chromobacterium e relacionadas; • Bacterias entéricas; • Vibrio e Photobacterium;Vibrio e Photobacterium; • Riquétsias; • Espirilos; • Proteobactérias com bainha; • Bacteria com brotamento e prosteca/pedúnculo; • Myxobactérias deslizantes; • Proteobactérias redutoras de sulfato e enxofre. 10 Bactérias púrpuras 11 Enterobactérias • Grupo filogeneticamente homogêneo M i d 40 ê 150 Bactérias entéricas • Mais de 40 gêneros e 150 espécies e subespécies • Bastonetes Gram negativos não esporulados, imóveis ou móveis por flagelos peritríquios, anaeróbios facultativos, reduzem nitrato, são catalase positivos e oxidase negativos, com requerimentos nutricionais relativamente simples, fermentadores de açúcares com formação de uma variedade de produtos finais Enterobactérias • São ubiqüitários, encontrados no solo, água e vegetais • Inclui espécies saprófitas colonizadoras do TGI de Perfil Fermentativo: • Característica taxonômica chave Bactérias entéricas colonizadoras do TGI de humanos e animais • Linhagens de importância industrial • Linhagens patogênicas para humanos, animais ou plantas 30% d 70% d ITU • Tipo e proporção de produtos de fermentação • Duas vias de utilização da glicose: –– Fermentação ÁcidoFermentação Ácido-- • 30% das sepses, 70% de ITUs e infecções intestinais çç MistaMista –– Fermentação de Fermentação de 2,32,3--butanediolbutanediol 12 Fermentação Ácido-Mista (por ex. Escherichia coli) Glicose Glicólise Piruvato Lactato Bactérias entéricas + Acetil-CoA Acetato Etanol Succinato CO2 Produtos típicos (quantidades molares) Ácidos : Neutros 4 : 1 CO2 : H2 1 : 1 + H2 CO2 Formato 1 : 1 + Fermentação 2,3-butanediol (por ex. Enterobacter aerogenes) Etanol 2,3-butanediol + CO2 Bactérias entéricas Produtos típicos (quantidades molares) Ácidos: Neutros Glicose Glicólise Piruvato Lactato Succinato Ácidos: Neutros 1 : 6 CO2 : H2 5 : 1 Acetato CO2 + H2 13 Escherichia coli • Organismo facultativo predominante nas fezes • Produz vitamina K S(j t t lif Kl b i ll Bactérias entéricas • Sua presença (junto com outros coliformes Klebsiella, Enterobacter e Citrobacter) é usada como evidência da contaminação fecal de águas (indicador) • Estirpes uropatogênicas (UPEC) responsáveis por 90% das infecções urinárias - UTIs (cistite e pielonefrite) • Importante agente de bacteremias (sepse)Importante agente de bacteremias (sepse) • Causa mais freqüente de meningite bacteriana neonatal • Estirpes causadoras de infecções intestinais (DEC) divididas em 5 patotipos principais Doenças:Doenças: – Colonização assintomática - S Typhi e S Salmonella Bactérias entéricas – Colonização assintomática - S. Typhi e S. Paratyphi – Febre entérica ou tifóide - Estima-se 21 milhões de casos e 200.000 mortes/ano no mundo – Salmoneloses não tifóides - Gastroenterites - CDC estima 1,4 milhão casos e 600 mortes/ano nos EUAEUA – Bacteremia - S. Typhi, S. Paratyphi, S. Choleraesuis e S. Enteritidis 14 Bactérias Espiroquetas Flavobactérias Defferibacter Citophaga Árvore Filogenética do Domínio Bacteria Thermotoga Bactérias verdes não sulfurosas Bactérias verdes sulfurosas Deinococos Planctomyces/Pirella Verrucomicróbios Chlamydia Cianobactérias Bactérias Aquifex Thermodesulfobacterium gram-positivas Nitrospira Proteobactérias Bacterias Gram-positivas não esporulantes (Bactérias Lácticas) 15 BactBactériasérias do ácido lácticodo ácido láctico Grupo de bactérias correspondentes a bacilos e cocos gram-positivos, de baixo conteúdo G+C (30-50 %) não-esporulantes que produzem ácido láctico como principal produto da fermentação de açúcares. Bactérias Gram positivas não esporulantes Principais Gêneros:Principais Gêneros: StreptococcusStreptococcus, , LactobacillusLactobacillus Bactérias Gram positivas não esporulantes Lactobacillus spp 16 Estreptococos de importância médica e oralEstreptococos de importância médica e oral Produzem ExotoxinasProduzem Exotoxinas Doenças:Doenças: Infecções do trato respiratório e septicemia, pneumonia, otite, Infecções do trato respiratório e septicemia, pneumonia, otite, meningite faringite febre reumática endocardite cárie dentáriameningite faringite febre reumática endocardite cárie dentária Bactérias Gram positivas não esporulantes meningite, faringite, febre reumática, endocardite, cárie dentária, meningite, faringite, febre reumática, endocardite, cárie dentária, mastite bovinamastite bovina Transmissão:Transmissão: Por inalação ou ingestão, sexualmente, congenitamente ou Por inalação ou ingestão, sexualmente, congenitamente ou indiretamente por intermédio das mãosindiretamente por intermédio das mãos Estreptococos oraisEstreptococos orais Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus Estreptococos de importância médica ou veterináriaEstreptococos de importância médica ou veterinária Streptococcus pyogenes, S. pneumoniae, S. bovis Bactérias GramBactérias Gram--Positivas Positivas Formadoras de Formadoras de EndosporosEndosporos:: BacillusBacillus e e ClostridiumClostridium 17 Esporulação em Bacillus subtilis C i t Síntese da capa Bactérias Gram positivas esporulantes Ciclo vegetativo Esporulação Crescimento Di i ão pol Cortex Parede celular Membrana Capa do esporo Maturação, lise celular Germinação (esporo livre) Esporulação Divisão celular Divisão polar Pré-esporo Septo Célula mãe Divisão celular assimétrica Engolfamento Síntese do cortex CARACTERÍSTICAS FENOTÍPICAS SIMILARES NEM SEMPRE INDICAM UM GRUPOINDICAM UM GRUPO FILOGENETICAMENTE VÁLIDO. Exemplo: Microrganismos fototróficos 18 Bactérias Espiroquetas Flavobactérias Defferibacter Citophaga Árvore Filogenética do Domínio Bacteria Thermotoga Bactérias verdes não sulfurosas Bactérias verdes sulfurosas Deinococos Planctomyces/Pirella Verrucomicróbios Chlamydia Cianobactérias Bactérias Aquifex Thermodesulfobacterium gram-positivas Nitrospira Proteobactérias 19 A Fotossíntese em Cianobactérias: 20 Introdução CianobactériasCianobactérias Nostoc Oscillatoria StigonemaMerismopedia Endossimbiose primária 21 Universidade Federal de ViçosaUniversidade Federal de Viçosa Departamento de MicrobiologiaDepartamento de Microbiologia MBI 101MBI 101 Procariotos do Domínio Procariotos do Domínio ArchaeaArchaea Características Bioquímicas e EstruturaisCaracterísticas Bioquímicas e Estruturais Parede CelularParede Celular NAT – ácido N-acetil-talosaminurônico 22 Características Bioquímicas e EstruturaisCaracterísticas Bioquímicas e Estruturais Lipídeos de membranaLipídeos de membrana E. coli Halobacterium salinarum Sulfolobus acidocaldarius Características Características Bioquímicas e Bioquímicas e EstruturaisEstruturais RNA polimeraseRNA polimerase Saccharomyces cerevisiae 23 Características de Características de ArchaeaArchaea • Muitas Archaea são extremófilas, com espécies capazes de crescer nas maiores temperaturas e em extremos dede crescer nas maiores temperaturas e em extremos de pH comparado a todos os organismos conhecidos • Todas Archaea são quimiotróficas, algumas são quimiorganotróficas e muitas são quimiolitotróficas O ambiente O ambiente primitivoprimitivo 24 O domO domínio ínio Archaea Archaea abrange abrange 3 3 Filos Filos cultiváveiscultiváveis:: Crenarchaeota, EuryarchaeotaCrenarchaeota, Euryarchaeota e Nanoarchaeotae Nanoarchaeota Filogenia do Domínio Filogenia do Domínio ArchaeaArchaea FiloFilo EuryarchaeotaEuryarchaeota –– MaiorMaior divisãodivisão.. ArchaeaArchaea halofílicashalofílicas extremas,extremas, ArchaeaArchaea metanogênicasmetanogênicas ee ArchaeaArchaea termofílicastermofílicas queque metabolizammetabolizam compostoscompostos dede enxofreenxofre.. FiloFilo CrenarchaeotaCrenarchaeota –– ContémContém representantesrepresentantes queque vivemvivem emem ambosambos osos extremosextremos dede temperaturatemperatura.. AA maioriamaioria dasdas espéciesespécies cultivadascultivadas sãosão hipertermófilashipertermófilas.. FiloFilo “Korarchaeota”“Korarchaeota” –– NenhumNenhum representanterepresentante cultivadocultivado inin vitrovitro IdentificadoIdentificado porpor análiseanálise dede seqüênciasseqüências dede rDNArDNA obtidasobtidasvitrovitro.. IdentificadoIdentificado porpor análiseanálise dede seqüênciasseqüências dede rDNArDNA obtidasobtidas dede umauma fontefonte termaltermal dodo ParqueParque NacionalNacional dede YellowstoneYellowstone.. FiloFilo NanoarchaeotaNanoarchaeota –– SimbionteSimbionte hipertermofílicohipertermofílico dede “nano“nano-- tamanho”tamanho” (ex(ex:: NanoarchaeumNanoarchaeum equitansequitans ++ IgnicoccusIgnicoccus ((archaeaarchaea)) 400400 nmnm diâmetro,diâmetro, genomagenoma 500500 Mpb)Mpb).. 25 Euryarchaeota Euryarchaeota –– Principais gruposPrincipais grupos Halofílicas extremasTermoacidófilas Metanogênicas Euryarchaeota ArchaeaArchaea Halofílicas ExtremasHalofílicas Extremas •• HabitamHabitam ambientesambientes hipersalinoshipersalinos:: tanquestanques dede produproduçãoção dede salsal;; lagoslagos salinossalinos naturaisnaturais ee peixespeixes ee carnescarnes salgadassalgadas.. •• RequeremRequerem pelopelo menosmenos 11,,55 MM (~(~ 99 %%)) dede NaClNaCl parapara crescercrescer.. AA maioriamaioria requerrequer 22--44 MM dede NaClNaCl ((1212--2323 %%)) parapara crescimentocrescimento ótimoótimo.. •• AA maioriamaioria dasdas espéciesespécies crescecresce emem soluçõessoluções salinassalinas saturadassaturadas ((55,,55 M,M, ~~ 3322 %%)).. •• ParedeParede celularcelular éé compostacomposta porpor glicoproteínasglicoproteínas(ricas(ricas emem aspasp ee glu)glu) ee estabilizadaestabilizada porpor íonsíons sódiosódio.. •• AcumulamAcumulam K+K+ nono citoplasmacitoplasma (>(> 55,,00 M)M) íoníon estabilizaestabiliza proteínasproteínas ee ribossomosribossomos (homeostasia(homeostasia osmótica)osmótica) •• PossuemPossuem metabolismometabolismo quimiorganotróficoquimiorganotrófico UtilizamUtilizam aminoácidosaminoácidos ee ácidosácidos orgânicosorgânicos comocomo fontefonte dede energiaenergia 26 Habitats hipersalinos de Archaea halofílicas Lago Great Salt em Utah Tanques de produção de sal por evaporação Lago Hamara no Egito HaloarculaHaloarcula Halobacterium salinarumHalobacterium salinarum 27 ArchaeaArchaea MetanogênicasMetanogênicas Habitats PredominantesHabitats Predominantes 1.1. SedimentosSedimentos anóxicosanóxicos –– sedimentossedimentos dede pântanospântanos ee lagoslagos predominantepredominante emem áreasáreas alagadas,alagadas, rizosferarizosfera dede plantasplantas etcetc..predominantepredominante emem áreasáreas alagadas,alagadas, rizosferarizosfera dede plantasplantas etcetc.. 2.2. TratoTrato gastrintestinalgastrintestinal dede animaisanimais –– RúmenRúmen (bovinos,(bovinos, ovelhas,ovelhas, alces,alces, veadosveados ee camelos),camelos), cecoceco (cavalos(cavalos ee coelhos),coelhos), intestinointestino grossogrosso (humanos,(humanos, porcosporcos ee cães),cães), intestinointestino dede insetosinsetos celulolíticoscelulolíticos (c(cupinsupins)) 3.3. FontesFontes geotermaisgeotermais dede HH22 ee COCO22:: FendasFendas hidrotermaishidrotermais 4.4. AterrosAterros sanitáriossanitários ee sistemassistemas dede tratamentotratamento dede efluentesefluentes (digestores(digestores anaeróbios)anaeróbios) 5.5. DepósitosDepósitos dede óleoóleo ee gásgás 6.6. EndossimbiontesEndossimbiontes dede protozoáriosprotozoários anaeróbiosanaeróbios.. MethanosarcinaMethanosarcina MaiorMaior genomagenoma dede ArchaeaArchaea jájá sequenciadosequenciado ((55,,77 Mb)Mb).. EncontradoEncontrado nono tratotrato gastrintestinalgastrintestinal humanohumano ee dede ruminantesruminantes.. PodePode utilizarutilizar diversosdiversos substratossubstratos parapara metanogênesemetanogênese.. Methanosarcina acetivoransMethanosarcina acetivorans 28 Euryarchaeota Euryarchaeota –– Principais gruposPrincipais grupos Halofílicas extremasTermoacidófilos Metanogênicos Euryarchaeota TermofílicoTermofílico ee acidofílicoacidofílico ((5555ooCC ee pHpH 22 emem meiomeio complexo)complexo).. DesprovidoDesprovido dede paredeparede celularcelular MembranaMembrana contémcontém compostocomposto semelhantesemelhante aa umum lipolissacarídeolipolissacarídeo (lipoglicano,(lipoglicano, emem micoplasmas)micoplasmas) Euryarchaeota Extremamente AcidofílicasEuryarchaeota Extremamente Acidofílicas Ordem Thermoplasmatales:Ordem Thermoplasmatales: GêneroGênero ThermoplasmaThermoplasma queque confereconfere estabilidadeestabilidade àsàs condiçõescondições ácidasácidas ee altasaltas temperaturastemperaturas.. Quimiorganotrófico,Quimiorganotrófico, aeróbioaeróbio facultativofacultativo podempodem crescercrescer emem aerobioseaerobiose ouou anaerobioseanaerobiose aa partirpartir dada respiraçãorespiração dodo enxofreenxofre.. EncontradoEncontrado emem refugorefugo dede carvãocarvão autoauto--aquecidasaquecidas ee solfatarassolfataras DNADNA encontraencontra--sese associadoassociado aa proteínasproteínas homólogashomólogas aa histonashistonas.. lipolissacarídeolipolissacarídeo
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