Libro de Abstarcts GENETICS

de exoma de 3-4 DNAs 
por familia en el CNAG; (2) panel de genes de diseño propio basados en tecnología de Agilent 
Technologies para Illumina, en muestras independientes de pacientes. Los ficheros FASTQ se procesaron 
con distintos pipelines según la aproximación empleada:(1) propios del CNAG y/o del BIER-CIBERER; (2) 
según estándares del GATK. 
3 Resultados 
(1) La secuenciación de exoma nos ha permitido identificar mutaciones no descritas en genes conocidos, 
nuevos genes candidatos, y nuevos fenotipos clínicos asociados a genes previamente caracterizados, en 
un 70% de casos analizados. (2) El panel de genes nos ha permitido detectar mutaciones patológicas 
descritas y mutaciones noveles probablemente patológicas en aproximadamente el 40% de casos 
estudiados. El análisis estadístico de nuestro panel de genes, muestra que todos las dianas de interés 
correspondientes a los genes estudiados se han secuenciado, y que el 99,99% de bases nucleotídicas 
presenta una cobertura >20X. 
4 Conclusiones 
La secuenciación de exoma es una herramienta potente, ya que permite identificar las mutaciones 
responsables aun cuando se trate de un gen previamente no descrito. Nuestro panel de genes presenta 
una cobertura muy alta y homogénea de los targets, y es coste-efectivo. Ambas estrategias nos han 
ayudado a reclasificar genéticamente algunos fenotipos clínicos, un desafío imposible con las técnicas de 
secuenciación convencional. Finalmente, la comparación entre estas dos estrategias nos sugiere que el 
panel de genes podría considerarse como primera herramienta diagnóstica para las NPHs cuyo 
diagnóstico diferencial, dado el solapamiento clínico existente entre las diferentes entidades, es difícil de 
abordar. 
Financiación: ISCIII (PI12/00453, PI15/00187); Fundació per Amor a l’Art 
 
 
C0377 DETECCIÓN DE MOSAICISMO PARENTAL EN FAMILIAS DE PACIENTES CON 
SÍNDROME DE DRAVET Y MUTACIONES EN SCN1A 
Alba Rubio Lozano1, Gema Gordo Trujillo1, Pablo Lapunzina Badía1, Eva Barroso2 
 
1INGEMM (Madrid) España 
2Hospital Universitario La Paz, INGEMM Madrid (MADRID) España 
1 Objetivos 
El síndrome de Dravet (SD, MIM607208) es una epilepsia infantil severa que se debe mayoritariamente a 
mutaciones en heterocigosis del gen SCN1A. Los objetivos son: identificar el ratio de mosaicismo parental 
para mutaciones “de novo” en SCN1A en familias de pacientes SD de nuestra cohorte, estimado en un 
10%; verificar que el mosaicismo está más frecuentemente presente y en mayor porcentaje en padres con 
síntomas neurológicos; establecer un protocolo de actuación mediante pirosecuenciación para reducir el 
infra-diagnóstico del mosaicismo parental. 
2 Material y Método 
Se seleccionaron 20 familias de pacientes SD con mutaciones “de novo” en SCN1A, pertenecientes a una 
cohorte de 508 pacientes SD, pareadas en historia familiar de síntomas neurológicos o no. El ADN 
genómico estudiado proviene de linfocitos de sangre periférica. Se realizó un análisis mutacional 
mediante pirosecuenciación. 
3 Resultados 
La pirosecuenciación realizada en las primeras 9 familias (5 con y 4 sin historia familiar asociada) ha 
permitido la identificación de un padre asintomático mosaico (7,8%) para la mutación p.Arg377*. 
Asimismo, se ha evidenciado una posible situación de mosaicismo germinal en una familia con dos 
hermanos afectos (SD y GEFS+) portadores de p.Gly1371Val, con padres asintomáticos no mosaicos en 
sangre periférica. Quedan 11 familias por evaluar. 
4 Conclusiones 
Un 11,1% de las familias estudiadas (1/9, sin síntomas neurológicos asociados) ha mostrado mosaicismo 
somático en un porcentaje detectable de un 7,8%, en linfocitos de sangre periférica. Los hallazgos se 
corresponden con el porcentaje estimado de casos de mosaicismo parental enmascarado como 
mutaciones “de novo“ en SCN1A, un 10% aproximadamente, y con el porcentaje estimado de mosaicismo 
en linfocitos de sangre periférica para familias sin historia familiar de síntomas neurológicos asociados, 
<15%. La aplicación de la pirosecuenciación en diagnóstico molecular se presenta como una alternativa a 
la secuenciación Sanger para la identificación de mosaicismo parental, clave en el consejo genético 
familiar. 
 
 
C0385 IDENTIFICACIÓN DEL DEFECTO MOLECULAR EN PACIENTES CON 
ENCEFALOPATÍA EPILÉPTICA MEDIANTE LA APLICACIÓN DE UN PANEL DE 
SECUENCIACIÓN MASIVA PARA EPILEPSIAS GENÉTICAS 
Miguel de la Puente Iglesias1, Alba Rubio Lozano1, Pablo Lapunzina Badía1, Eva Barroso2 
 
1INGEMM (Madrid) España 
2Hospital Universitario La Paz, INGEMM Madrid (MADRID) España 
1 Objetivos 
Las encefalopatías epilépticas (EE) comprenden un grupo de síndromes epilépticos en los que las crisis 
epilépticas contribuyen al deterioro progresivo de las funciones cerebrales y cuya causa, en muchos 
casos, es genética. La aplicación de un panel de NGS específico para epilepsias de base genética puede 
mejorar la tasa diagnóstica en pacientes con epilepsia y permitir la identificación de nuevos genes y rutas 
implicadas en la misma, mejorando asimismo las opciones de tratamiento antiepiléptico. 
2 Material y Método 
Se estudió una serie de 75 pacientes con diagnóstico presuntivo de EE de tipo variable, excluyendo a los 
pacientes con síndrome de Dravet (SD). Se aplicó un panel de NGS diseño propio, Epilepsy v5.0 (425 
genes), mediante captura de Roche Nimblegen SeqCap EZ y secuenciación MiSeq o NextSeq de 
Illumina. Se utilizó una herramienta bioinformática desarrollada por nuestro instituto para el alineamiento y 
anotación de variantes. El filtrado de variantes siguió un protocolo propio y, posteriormente, se estableció 
la correlación genotipo-fenotipo, la caracterización de variantes según ACMG y la validación por 
secuenciación Sanger. 
3 Resultados 
El análisis de NGS con el panel Epilepsy v5.0 en los pacientes EE permitió el diagnóstico molecular de 26 
pacientes EE portadores de variantes patogénicas (12), posiblemente patogénicas (2) o variantes de 
significado incierto (VOUS) (12) en 20 genes diferentes que podrían explicar su defecto molecular. 
4 Conclusiones 
La detección de la causa molecular de EE con sospecha de base genética no ha sido posible en nuestro 
laboratorio hasta la incorporación de la NGS. La aplicación del panel NGS Epilepsy v5.0 ha permitido la 
detección de variantes con potencial efecto patogénico en un 34,6% (26/75) de los pacientes EE 
analizados, para los que en ocasiones la identificación del gen afectado ha permitido establecer una 
correcta identificación del tipo de EE, mejorando presumiblemente el control de la evolución clínica de la 
enfermedad y su tratamiento específico. 
 
 
C0479 ESTUDIO GENÉTICO DE 141 GENES ASOCIADOS A EPILEPSIA EN UNA 
COHORTE DE 122 PACIENTES. 
M Martinez-Garcia1, C Rodriguez1, M Carcajona1, I Diez1, R Sanchez-Alcudia2, MM Peña-Vilabelda1, P Maietta1, J 
Botet1, A Santana-RodrIguez3, A Rodriguez-Valle4, A Patiño5, A Gil-Nagel6, L Martorell7, M Galvez8, S Alvarez1 
 
1Unidad de secuenciación, NIMGenetics S.L., Madrid. (Madrid) España 
2NIMGENETICS MADRID (MADRID) ESPAÑA 
3Hospital Universitario Materno Infantil de Canarias. (Las Palmas) España 
4Departamento Genética Clínica. Hospital Universitario Miguel Servet. (Zaragoza) España 
5Clínica Universidad de Navarra. CIMA. (Pamplona) España 
6Hospital Ruber Internacional. (Madrid) España 
7Hospital Sant Joan de Déu. (Barcelona) España 
8Laboratorio de Genética. Gencell Pharma. (Bogota) España 
1 Objetivos 
Establecer el diagnóstico genético en 122 pacientes con manifestaciones clínicas de epilepsia, mediante 
el análisis de 141 genes seleccionados por su asociación previa a formas sindrómicas y no sindrómicas 
de epilepsia. 
2 Material y Método 
A partir de DNA obtenido de muestras de sangre periférica se prepararon las librerías genómicas 
empleando el kit Ion AmpliSeqTM Exome RDY y el kit AmpliSeq panel