Contagem de Bactérias Heterotróficas

Prévia do material em texto

Contagem de Bactérias Heterotróficas
1- Regras para contagem de colônias
As colônias devem ser contadas com o auxílio de conta-colônias equipado com placa de vidro, dividido em quadrados com 1 centímetro de área e iluminação artificial uniforme. Examinar as placas cuidadosamente para não contar como colônias, fragmentos de produto ou outros materiais precipitados no meio. Efetuar a contagem logo após o período de incubação adequado. Na impossibilidade de fazê-la, as placas de Petri devem ser mantidas em refrigerador por no máximo 24 horas. Isto não deve tornar-se uma prática rotineira. 
A contagem obtida deverá estar entre 25 e 250 colônias. Entretanto, quando o nº de colônias encontrado for menor que 25, considerar o resultado encontrado
Para calcular a contagem total, multiplicar o número de colônias ou o número médio (Placas em duplicatas da mesma diluição), pela da diluição utilizada. Anotar a diluição e o número de colônias contadas ou estimadas em cada placa. Computar a contagem bacteriana por mL de acordo com a seguinte fórmula:
UFC/mL = nº de colônias contadas x Diluição
 volume de amostra usado (mL)
O resultado final será expresso considerando-se os dois primeiros algarismos representativos, separados por vírgula. Os algarismos subseqüentes, quando existirem, deverão ser arredondados e transformados em potência de 10.
. 
EXEMPLOS
	Número de colônias 
	Diluição 
	Resultado 
	Expressão de resultados de contagem UFC/mL
	25
	10 0
	25
	2,5 x 101
	44
	101
	440
	4,4 x 102
	136
	102
	13600
	1,4 x 104
	6
	103
	6000
	6,0 x 103
Número Mais Provável (NMP) de coliformes totais
1 Teste presuntivo: Utiliza Caldo Lactosado ou caldo Lauril Triptose.
Exemplo:
a) nos 5 tubos da diluição 1:1, obtiveram-se 3 tubos positivos;
b) nos 5 tubos da diluição 1:10, obtiveram-se 2 tubos positivos;
c) nos 5 tubos da diluição 1:100, obteve-se 1 tubo positivo;
d) formou-se, portanto, a combinação 3-2-1;
e) determina-se o NMP consultando a Tabela 1.
2. Teste confirmativo
Confirmar o teste presuntivo: Utiliza caldo Verde brilhante Bile a 2 % (meio de cultura inibe outros fermentadores de lactose) = Apresentar a formação de gás confirma que na amostra de água tem coliforme totais.
Coliformes termotolerantes: Utiliza caldo E.C = Apresentar a formação de gás confirma que na amostra de água tem coliforme termotolerante. 
Ágar EMB- Pesquisa de E.coli