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1 LGN 0313 Melhoramento Genético MELHORAMENTO GENÉTICO DE FUMO (Nicotiana tabacum L.) Guilherme José Farias Engenheiro Agrônomo (ESALQ – 2006) Mestre em Genética e Melhoramento de Plantas (2009) Doutorando Sumário Importância da cultura e panorama atual Botânica, grupos varietais e manejo Melhoramento Genético Objetivos Técnicas Etapas Fotos Melhoramento de FUMO . . . POR QUÊ ??? Maiores Produtores e Exportadores (mil toneladas de fumo) 399 598 928 2410 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 EUA Índia Brasil China Total mundial: 6.496,4 mil t Fonte: Atlas do Tabaco, 2006 121 135 157 184 466 0 100 200 300 400 500 Índia Zimbábue EUA China Brasil Produção Exportação 399 598 928 2410 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 EUA Índia Brasil China Total mundial: 6.496,4 mil t Fonte: Atlas do Tabaco, 2006 121 135 157 184 466 0 100 200 300 400 500 Índia Zimbábue EUA China Brasil Produção Exportação 173 312 362 402 1800 0 500 1000 1500 2000 Indonésia Japão Rússia EUA China Consumo (bilhões de cigarros) Consumo 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 Soja grão Açúcar Carne Avícola Farelo de Soja Café Carne Bovina Fum o Óleo de Soja Suco de Frutas Carne Suína 7° Lugar Exportações Agropecuárias Brasileiras (valor em milhões de dólares) Fonte: MAPA, 2006 2 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 Soja grão Açúcar Carne Avícola Farelo de Soja Café Carne Bovina Fum o Óleo de Soja Suco de Frutas Carne Suína 7° Lugar Exportações Agropecuárias Brasileiras (valor em milhões de dólares) Fonte: MAPA, 2006 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000 Soja Cana Café Fumo Algodão 4° Lugar Introdução Consumo mundial de cigarros: 5 trilhões / ano BRASIL: Maior exportador e 2º maior produtor Indústria: US$ 5 bilhões Impostos: US$ 4 bilhões 2,4 milhões de empregos diretos e indiretos 200 mil famílias de produtores 360 mil hectares cultivados Realidade do Produtor Preço médio recebido = R$ 4,30 / kg de folhas Produtividade média = 1.844 kg / ha Rendimento médio = R$ 8.000 / ha plantado Tamanho médio das propriedades : 16,4 ha Área média com fumo : 2,7 ha Fonte: Afubra, 2006 Market Share Mundial GLH 3,1% JTC 6,4% ITL3,6% Altadis 2,0% BAT Souza Cruz 15,1% Altria Phillip Morris 17,6% CNTC 33,7% Outros 18,5% Fonte: Atlas do Tabaco, 2006 Souza Cruz Unidade Rio Negro - PR 3 Sistema Integrado de Produção EMPRESA • Assistência técnica • Assistência financeira • Sementes • Seguro • Insumos agrícolas PRODUTOR • Produção das mudas • Plantio • Colheita • Cura / Secagem • Separação • Enfardamento Venda integral da produçãoCompra integral da produção Contrato anual Planta Modelo Transformação genética Facilmente transformável Cultivo in vitro Fisiologia de solanáceas Testes iniciais em N. tabacum Expressão de proteínas recombinantes Fábricas de moléculas Genética Quantitativa Pesquisas com delineamentos básicos Luciferase de vaga-lume Science (1986) 234: 856-859 Botânica Família Solanaceae Gênero Nicotiana (67 espécies) Espécie � Nicotiana tabacum L. 1560: Jean Nicot � fumo na Europa 2n = 4x = 48 (anfidiplóide) Autógama Cleistogamia Monóica Flores completas Detalhes da Flor Macho Estéril Normal Origem e Adaptação Região dos Andes e Noroeste da Argentina 38ºS 60ºN (Akehurst, 1981) Frutos e Sementes 10 mil sementes por grama ! PELETIZAÇÃO 4 Grupos Varietais Oriental TibagiAmarelinho Burley Comum Virginia Maryland Fumo Aromático Dark Principais Regionais Nordeste Outros Capação e Desbrotas Eliminação do meristema apical da planta quando começa a emitir os botões florais. Objetivo: direcionar produção de fotoassimilados para as folhas Fumo Oriental Virginia x Burley Comparação Características Fumo Virgínia Fumo Burley Produção no Brasil 81% 17% Formato da folha Estreitas (lanceoladas) Arredondadas Coloração da folha Verde intenso Verde clara a amarelada Coloração do fumo curado Alaranjado Castanho-escuro Aroma Adocicado Forte (típico) Nº de folhas Menor Maior Sistema de cura Estufa (aquecimento de ar) Galpões (temperatura ambiente) Textura do solo Arenosos Argilosos Fertilidade Média Alta Altitude Baixa Alta Secagem das Folhas : Cura ESTUFA GALPÃO 5 Secagem das Folhas - Cura Secagem em ESTUFA Fumo Virginia e Amarelinho Amadurecimento desuniforme Colheita em etapas Tipos: Estufa convencional Estufa de ar-forçado – Estufa L.L. = Loose Leaf = Folha Solta Secagem das Folhas - Cura Secagem em GALPÃO Fumos Burley, Maryland, Comum, Oriental Amadurecimento uniforme Colheita = planta inteira Tipos: Galpão convencional GB1 GB2 Chapecó Classificação das Folhas → T: Ponteiras → B: Meeiras → C: Semi-meeiras → X: Baixeiras } } } } Classes: Classificação das Folhas Subclasses (Virginia) O (alaranjadas) L (verde limão) R (castanhas) Tipo 1 : Primeira 2 : Segunda 3 : Terceira Ideal (Virginia): BO1 Cotação (2006) = R$5,81 / kg Alcalóides do Fumo Nicotina (90 a 95%) Substância alcalóide básica Princípio ativo do tabaco Proteção contra herbivoria Outros alcalóides (5 a 10%) Nornicotina Anabasina Anatabina Nitrosaminas (TSNA’s): cancerígenas Genetic Engineering on Nicotiana tabacum for Reduced Nornicotine Content Conversão: Nicotina - Nornicotina Nornicotina: precursora de TSNA Gene da N-Demetilase: CYP82E4 Silenciamento com RNAi A estratégia se mostrou eficaz J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 9071-9078 Lily B. Gavilano, Nicholas P. Coleman, Leigh-Emma Burnley, Melissa L. Bowman, Newton E. Kalengamaliro, Alec Hayes, Lowell Bush, and Balazs Siminszky 6 Formação de TSNA NICOTINA NORNICOTINA NNN (TSNA) N - Demetilase Nitrosação GENE CYP82E4 Senescência e Cura Cura e Processamento GAVILANO et al., 2006 RNAi PROGRAMAS DE MELHORAMENTO Principais Empresas Objetivos do Melhoramento Principais linhas de pesquisa: Melhora da qualidade; Aumento da produtividade; Resistência às principais viroses (TMV, PVY, TSWV); Resistência à murcha bacteriana; Resistência aos nematóides de galhas; Tolerância a amarelão; Cultivares com baixos níveis de alcalóides. Impacto dos Cultivares 1,12,1 26,8 6,6 0 5 10 15 20 25 30 1980 1991 1998 2005 (i.a. kg/ha) Sistema Float + Cultivares Resistentes Fonte: Souza Cruz, 2006 T Geração de Variabilidade Métodos Convencionais Cruzamentos Biparentais, multiparentais, retrocruzamentos, dialélicos Método da População (Bulk) e Genealógico (Pedigree), Seleção Recorrente Biotecnologia Obtenção de somaclones Cultura de tecidos Cultura de células Hibridação somática (fusão de protoplastos) Produção de haplóides e duplo-haplóides Indução de mutação Não há cultivares comerciais transgênicos 7 Suporte ao Melhoramento M E L H O R A M E N T O D O F U M O Casas de Vegetação Banco de Germoplasma Análises Químicas Cultura de Tecidos Marcadores Germoplasma Fontes de resistências N. repanda: nematóides, TMV, fogo selvagem, mancha angular; N. lagsdorfii: fogo selvagem, mofo azul, antracnose, PVY, TMV; N. suaveolens: mofo azul, PVY, TMV, fogo selvagem, mancha angular N. repanda Técnicas Auxiliares Seleção assistida por marcadores Fusão de Protoplastos: Superação de incompatibilidade Cultura de Tecidos e de CélulasTécnicas Auxiliares Caracteres Avaliados Resistência a nematóides e viroses Dias do plantio ao florescimento Número de folhas emitidas até florescimento Altura da planta no florescimento Data para capação Valor agronômico Produtividade de fumo curado Desenvolvimento do Germoplasma DOENÇAS AGRONÔMICAS QUÍMICA FUMAÇA Tipos de seleções: 8 Desenvolvimento do Germoplasma DOENÇAS AGRONÔMICAS QUÍMICA FUMAÇA Tipos de seleções: Nematóides Murcha bacteriana Viroses Amarelão Qualidade Produtividade Florescimento Maturação Alcalóides totais / individuais Nitrato Açúcar Éster de sacarose Cloretos Química da fumaça Flavour Degustação Características de Interesse VIRGINIA M. incognita M. javanica TMV, PVY, TSWV Murcha bacteriana Nitrato no talo BURLEY M. incognita TMV, PVY, TSWV Murcha bacteriana Amarelão Nitrato na lâmina Linhagem A Linhagem Bx F1 15 plantas x 5 frutos (bulk) F2 100 plantas no campo Sementes colhidas em bulk Geração de Variabilidade por Cruzamentos 3000 plantas Método da População (Bulk) Auto-Fecundação F3 F2 Geração de Variabilidade por Cruzamentos F4 3000 plantas (bulk) 3000 plantas (bulk) 3000 plantas (bulk) Auto-Fecundação Auto-Fecundação Geração de Variabilidade por Cruzamentos F4 SELEÇÕES Testes de Progênies Esterilização de linhagens Retrocruzamentos Avaliação do Germoplasma Avaliações Preliminares Avaliações Intermediárias Avaliação Final Testes de Progênies Competição de Cultivares CULTIVAR COMERCIAL 9 Difusão e Transferência de Tecnologia Lavoura Teste Lavoura Demonstrativa Dias de Campo Macroparcelas PRODUTOR Produção de cigarros Análise de fumaça Orientadores de Produtores Produção de Sementes Sementes Genéticas Sementes Básicas Sementes Experimentais Sementes Semi Comerciais Sementes Comerciais Industrialização de Sementes Sementes Nuas Registro Proteção Certificação Semi Comerciais Comerciais U I S Controle de Qualidade: Laboratório de Análise de Sementes Sementes envelopadas Sementes peletizadas Unidades de faturamento Produtor Exportação Beneficiamento Peletização Envase / Envelopamento Armazenamento U P S FOTOS: Etapas do Melhoramento UPS – Unidade de Produção de Sementes UPS – Unidade de Produção de Sementes 10 Estufa Bandejas no Float Etapas realizadas com produtores Casas de Vegetação Planejamento Semeação Repicagem Podas InoculaçõesSeleções Transplante. Replante Polinizações / Colheita de Folhas Colheita de Frutos ANO AGRÍCOLA Escolha e Preparo das áreas Croquis Estaqueamento Adubação Tratos Culturais Coleta de Dados MAIO AGOSTO a SETEMBRO DEZEMBRO a MARÇO ANO AGRÍCOLA CICLO 120 a 240 dias (4 a 8 meses) Envelopes com Sementes 11 Semeação Caixas com Tratamentos Caixas com tratamentos Tamanho ideal para Repicagem Repicagem Plântulas recém repicadas Após 1 semana 12 Estufa Desenvolvimento das Mudas Desenvolvimento das Mudas Desenvolvimento das Mudas Desenvolvimento das Mudas Irrigação e Float 13 Geadas Inoculação de Nematóides Avaliação de Nematóides Avaliação de Nematóides Inoculação de Viroses Avaliação de Viroses 14 Muda de Fumo Distribuição das Bandejas Transplante Planta em Desenvolvimento Seleção Fenotípica Campo em Florescimento 15 Flores Encapadas Colheita de Flores Colheita de Anteras Secagem e Armazenamento do Pólen Cruzamentos Cruzamentos Etiquetados 16 Frutos Maduros Lavoura Demonstrativa CSC 416 Dias de Campo Polinização em Grande Escala (Produção de Sementes) OBRIGADO ! Guilherme José Farias Contato: gjfarias@esalq.usp.br Doutorando ESTÁGIOS Contatos no CMF Souza Cruz: Dr. Carlos Eduardo Pulcinelli (Gerente) cmeduardo@souzacruz.com.br Angenilson Delfrate (Coordenador Agrícola) angenilson@brturbo.com.br
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