MBI RESUMEN P1

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DEMOSTRAÇÃO DE PRESENÇA DE MICRORGANISMOS NO AMBIENTE
Tecnicas:
Isolament, conservação e identificação; observações microscopicas, cultivo em meios artificiais, esterilização e practica de assepsia, isolamento, enumeração, identificação de bacterias e fungos, fisiologia e genetica microbiana.
Utilizadas em:
Pesquisa, industria de alimentos, bioquimica, agricultura, medicina e biotecnologia.
Microrganismos encontrados em qualquer ambiente, em suspensão ou assentados em poeira.
Meio aquatico foi provavelmenteo ambiente original
Maioria inocuo ou beneficos.
Controle: tratamento para comprar (sem inoculação)
Inoculação: Introdução ou adição de microrganismos em meio de cultura ou hospedeiros.
PREPARAÇÃO MICROSCOPICA AO FRESCO
Espécimes microbianos colocados em lâmina;
Tecnicas:
Preparação ao fresco ou fixada.
Preparação ao fresco:
Utiliza os microrganismos suspeitos em meio liquido, com auxilio ou não de corantes vitais.
DESVANTAGEM: Não é difícil de visualizar, pelo reduzido tamanho e o indice de refração que é proximo da água.
VANTAGEM: observação de viabilidade e atividade celular como mobilidade e fissão binaria, e tamnaho e forma natural.
AZUL METELINO: corante vital, entra em contacto com a celula viva , o corante é reduzido e torna incolor pela presença de enzimas ativas. Também pode inibir a respiração da levedura enquanto desloca os ions de hidrogenio produzido durante o processo, então a celula da leevedura não pode utilizar aqueles ions para liberar energia.
Preparação fixada:
As etapas de preparo do esfregaço e fixação antecedem a coloração das celulas microbianas.
PREPARAÇÃO MICROSCOPICA FIXADA: COLORAÇÃO SIMPLES
Corante utilizado para aumentar o contraste.
Corante: é um sal na qual um dos ions é o cromoforo.
Cromoforo é responsavel pela cor da celula.
Carga (+)= Basico ex: azul de metelino, cristal violeta, fuscina, safranina. São ideais para corar bacterias porque os acidos nucleicos e as paredes da celula apresentam carga liquida negativa na qual se atrae os cromoforos cautionicos.
Carga (-)= Acido ex: acido pícrico.
Tecnicas de coloração simples:
Espalhada com uma camada fina sobre a lamina, formando um esfregaço, deixa secar, o esfregaço é aderida a lamina por uma breve exposição ao calor e depois corada com um único corante
VANTAGEM: visualizar a forma, arranjo e tamnaho da celula. Também algumas estructuras da celula como grânulos metacromatico e glicgênio. 
FINALIDADE DE FIXAR O ESFREGAÇO PELO CALOR: manter a estructura ellar integra, mata as celulas e inativa as enzimas.
	ESTREPTOCOCOS
	DIPLOCOCOS
	TETRADES
	SARCINA
	ESTAFILOCOCOS
	VIBRÃO
	ESPIRILOS
	ESPIROQUETAS
PREPARAÇÃO MICROSCOPICA FIXADA: COLORAÇÃO DE GRAM
Hans Christian Gram na tentativa de diferenciar o patogeno Strptoccocos pneumoniae das celulas do tecido pulmonar humano;
Tecnica: é uma coloração diferencial, permite distinguir os grupos bacterianos na abilidade do mesmo reter certos corantes.
1) Cristial Violeta= roxo escuro (1min)
2) Aplicar Lugol (Iodo)= funciona como um mordente aumentando a interação da celula bacteriana e o primer corante formando complexo insoluvel CV-I. (1min)
3) Aplicar alcool= gram (-) perdem o complexo CV-I pela diferença de natureza quimica e estructura da parede celular, na gram (+) possue uma camada de peptideoglicano mas espessa.
4) Safranina ou fuscina.(30seg)
Outra tecnica é da Ziehl Neelson alcool acido, para identificação de microbacteria e diagnostico de tuberculose e lepra.
Outra tecnica é a coloração especial, na qual visualizar estructuras celulares como flagelo, capsula, endosporo, nucleo etc...
Utilizado: estudo de bacteriologia
Grupos:
GRAM (+) = doenças patogenicas; resultado final rosa avermelhado.
GRAM (-) = resultado final roxo
PREPARO E ESTERILIZAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA
Os meios de cultura devem ter os mesmos elementos que compõem a celula (C, N, S, P...)
Meios complexos: composição quimica não é completamente conhecida.
Meios Sintetico: componentes quimicos puros, orgânicos ou inorgânicos em quantidades definida.
Meio minimo: fornece os nutrientes essenciais para o desenvolvimento do microrganismo.
Meio diferencia: diferencia as especies microbianas em base sua caracteristic fenotipica, morfologica.
Meio de enriquezimento: favorece o crescimento de uma determinada especie microbiana enrelação a outra.
Meio de seletivo: Inibe o crescimento de uma determinada especie microbiana permitiendo o crecimiento da população;
Meio liquido (caldo): crescimento, processo de fermentação, fissão binaria.
Meio solido: contagem, isolamento, manutenção da celula.
Meio semi-solido: detecção de placa de lise.
Principal agente= ágar: composto de polissacarideos de algas. 96C-45C.
AUTOTROFICOS: utilizam CO como fonte de carbono.
HETEROTROFICOS: utilixam compostos organicos como fonte de carbono.
FATORES QUE INTERFEREM NO CRESCIMENTO MICROBIANO: temperatura, pH, atmosfera, e salinidade.
Esterilização: é um processo pela qual elimina todas as formas vivas no mterial ou ambiente,
Calor umido (autoclave)= atua desnaturando e coagulando as proteinas das celula microbiana, água influencia na distruição das membranas e enzimas induze a destruição das ligações de hidrogenio.
Calor seco ( estufa)= profoca a oxidação da celula constituintes e desnuturaçao e coagulação das proteinas. Penetra na celula de uma forma mais lenta, exige temperaturas elevadas, e tempo mais longos. Ex: 170Graus C necessario 60min ou 120Graus C necessario 12h.
Substancias temolabies (filtração)= aumento da temperatura inativa a celula.
IDENTIFICAÇÃO DE BACTERIAS
Manual de Bergey: identificar bacterias.
IMVic( indol, vermelho de metila, voges-poskauer, citrato): diferenciar bacteria enterica-intestinais que são patogenicas pode estar presentes na agua ou alimentos.
Produção de indol: produz triptofanase
(+)=vermelho
Vermelho de Metila: produz acidos formico, acetco lactico, succinico...
(+)= vermelho
(-)= amarela
Voges- Proskauer: produz acido acetico, se transforma em producto de acetoina.
(+)= rosa avermelhado
Citrato: presença de citrato permease, citrato produzido por piruvato e CO2
(+)= azul
(-)=verde
Fermentação de açucares: produção de acido com ou sem a formação de gas.
(+)= amarelo; presencia de gas.
Teste de catalase:passam electrons atravez da cadeia até o aceptor final. Energia perdida pela FO
(+)= Gas
Hidrolise do amido:amido como fonte de carbono produz amilase, capaz de hidrolizar o amido
(+)= laranja amarelo
(-)= preto
ANALISE BACTERIOLOGICA DA AGUA
Qualidade da agua determinando a presença de microrganismo origem fecalpresença indica poluição da agua por dejeitos humanos e animais.
Coliforme: bastones, gram (-), não formadores de esporos, aerobios ou não anaerobios facultativos com capacidade de fermentar a lactose com produção de gas em 48h a 35C; o gurpo é heterogenêo ex: escherichia, enterobacter, klebsiella, citrobacter. Formam colonias preto azuladas
Indicador de contaminação: coliformes termotolerantes(fecais) HABITAT o intestino de animais homeotermicos representate mais importante é E.coli. São termotolerante aqueles que fermentam a lactose com produção de gas 44,5 +- 0,2C por 24h
NMP: numero mais provavel de bacterias presumivemente coliforme em na amostra da agua.
Analise padrão: consiste em testes presuntivos, pesquisa de coliformes totais, e termotolerantes e E.coli. 
Membrana filtrante estão compostas de polimeros complexos de esteres de celulose, biologicamente inertes.
Agar eosi Methylene Blue (EMB): inibem a baterias gram (+). 
Ecoli= deviso a rapida fermentação de lactose cor verde metalizado
ALTERAÇÕES FENOTIPICAS E GENOTIPICAS EM MICRORGANISMOS
Mutações: gradora de variabilidade genetica, alteração hereditariana sequencia de bases do DNA de um organismo; APRESENTAM DIFERENTE genotipo(conj. de genes) da linagem pariental.
Fenotipo: associado ao meio ambiente, são reversiveis
Penicillum griseoroseum: luz UV causa mutaçôes modificando os pigmentos dos conidios
ou na organização dos conidioforos; reduz o numero de colonias de penicillum.
Serratia marcescens: não é mutante porque tem os mesmos genotipoque a linagem pariental.
UV: empregada para isolamento de diferentes mutantes 
CONJUGAÇÃO BACTERIANA
Tranferencia de material genetico, mediada por um plasmideo conjugação, da celula bacteriana doadora para uma receptora.
F: factor de fertilidade é o determinante genetico que permite e cotrola o processo de conjugação; possue varios genes responsavel pela sua replicação e transferencia para celula receptora. Pode replicard e maneira autonoma pode ser inserido no cromossoma bacteriano.
Pilus sexual: formada por proteinas codificadaspor genes presente no plasmideo denominada transconjugação. 
Celula doadora: passa a chamar Hfr (high frequency recombination) quando factor F se integra ao cromossoma da celula doadora, sem perder sua caracteristica, ao passar seus genes cromossomatico ao celula receptora, uma vez na celula receptora ocorrera recombinação envolvendo homologas presentes no DNA da celula receptora e no fragmento da celula doadora qu foi transferida junto ao factor.
Genes que conferem resistencia ao antibiotico no plasmidio F torna possivel o isolamentode transconugação, utilizando meio seletivo onde o antibiotico foi adicionado.