Avaliação Prática Micro

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS 
Instituto de Ciências Biológicas; Departamento de Microbiologia. 
Curso Superior de Biomedicina 
AVALIAÇÃO PRÁTICA 
Mirela Cristina Soares Gasparini 
Fábio Antônio Gonçalves Da Silva 


Belo Horizonte 
2014 
Quando um profissional da área da saúde suspeita que uma doença 
seja causada por um agente infeccioso, analises de fluidos ou tecidos 
infectados são coletados e submetidas a analises microbiológicas. A amostra 
clinica deve apresentar o material do sitio real de infecção, sendo realizada 
sobre condições assépticas com método de coleta especifico, meio de 
transporte compatíveis com a suspeita do agente etiológico e tendo quantidade 
de material colhido suficiente para a execução das técnicas laboratoriais. 
Após a chegada da amostra ao laboratório ela deve ser cultivada em 
meios de cultura adequados para o crescimento bacteriano e deve ser 
purificada. Feito isso, começa-se a identificação do patógeno. 
A analise microscópica inicial começa com a coloração de Gram. As 
infecções urinárias são normalmente causadas por bactérias gram-negativas, 
mas também podem ser derivadas de Staphylococcus saprophyticus, uma 
bactéria gram-positiva. As bactérias gram-negativas possuem parede celular 
constituída por uma fina camada de peptídeoglicano e uma membrana externa 
de lipopolissacarideos (LPS). Em função dessa membrana externa esse tipo de 
microorganismo é descorado pelo álcool da coloração de Gram e em seguida 
se coram pela safranina, ficando rosadas ou avermelhadas. As bactérias gram 
positivas possuem uma camada grossa de peptideoglicano e ausência de 
membrana externa, sendo capazes de reter o corante inicial, o cristal violeta, 
durante todo o processo, e se apresentam roxas ao final da coloração. 
Apos a analise do grupo de microorganismo começa-se a identificação 
da espécie presente. Para Gram-positivos como o caso Staphylococcus 
saprophyticus a identificação começa com a prova da catalase, que separa o 
gênero Staphylococcus, catalase positivo, dos gêneros Streptococcus e 
Enterococcus, ambos catalase negativo. A prova é feita pingando uma gota de 
peroxido de hidrogênio em lamina contendo o isolado, e havendo formação de 
bolhas, a prova é positiva. Uma vez comprovada presença de catalase, e 
consequentemente, o gênero Staphylococcus, a diferenciação entre as 
espécies é feita. 
Para diferenciar as espécies de Staphylococcus são feitas três técnicas 
iniciais: A semeadura em placas de Ágar hipertônico Manitol, inoculação em 
plasma de coelho, e semeadura em placas de Ágar DNase. A reação positiva 
para todas as três técnicas – meio amarelo no ágar manitol, coagulação do 
plasma e formação de halo claro no ágar DNase – indicam a espécie S. 
aureus, não causadora de infecções urinarias. A reação negativa para as três 
técnicas leva ao teste da Novobiocina, um antibiótico. Se na placa em ágar 
Müeller-Hinton com o disco do antibiótico houver a formação do halo, o teste 
identifica S.saprophyticus, que é normalmente resistente a novobiocina. A 
ausência do halo indica outros tipos de Staphylococcus. 
A identificação de enterobactérias Gram-negativas começa com a 
semeadura em meio TSI, um meio de triagem utilizado para distinguir grupos 
de bacilos da família Enterobacteriaceae. O meio TSI baseia-se nas 
propriedades fisiológicas de fermentação da lactose, produção de gás e sulfeto 
de hidrogênio (H2S) de diferentes bactérias, e é feito por semeadura em 
superfície e semeadura em picada. A leitura dos resultados desse meio já nos 
dá um diagnostico presuntivo dos possíveis patógenos. 
A identificação definitiva das enterobacterias se da por uma serie de 
provas bioquímicas, que buscam primariamente detectar a presença ou 
ausência de diferentes enzimas presentes na bactéria, sua habilidade de 
fermentar diferentes carboidratos, entre outras características bacterianas. 
Uma vez identificado o microorganismo patogênico, o próximo passo é a 
escolha do antimicrobiano através do antibiograma. Como grande parte das 
bactérias patogênicas é capaz de expressar resistência a antimicrobianos, o 
objetivo primário do antibiograma é exatamente investigar a capacidade de 
resistência da bactéria a determinada droga, para a escolha do agente 
terapêutico mais adequado. O método utilizado é o de Kirby-Bauer, ou Difusão 
em Disco. A leitura do antibiograma é feita observando o diâmetro dos halos 
em volta dos discos de antimicrobianos, e baseando em tabelas já existentes é 
possível ver se o microorganismo em questão é sensível, resistente ou 
apresenta sensibilidade intermediaria. O antimicrobiano ideal para o tratamento 
será aquele ao qual a bactéria é mais sensível. 
REFERÊNCIAS 
Madigan, Michael T.  ; Martinko, John M.; Dunlap, Paul V.; Clark, D. P. (2010). 
Microbiologia de Brock (12a ed.). Artmed. 
Apostila de Aulas Práticas Biomedicina, versão 2012, UFMG. 
http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/atm_racional/
modulo2/microbiologia2.htm 
http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/boas_praticas/
modulo4/id_stre2.htm