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Ótica do microscópio e qualidade da observação Citologia– aula 2 Thaís Furtado Nani Universidade Federal de Lavras 2012 I. RESOLUÇÃO Nitidez da imagem - riqueza de detalhes: 1. Limite de Resolução (LR): pode ser determinada numericamente. Corresponde à distância entre os dois pontos, situados em um dado objeto observado para que eles apareçam individualizados em uma imagem formada; Limite de Resolução – LR = K . AN – K é uma constante 0,612 – é o comprimento de onda luz, luz branca (verde-amarelo) 550nm= 0,55 m – AN é a abertura numérica da lente objetiva – Cada objetiva possui um limite de resolução? Limite de Resolução • Ex: – Objetiva 100x: LR = K . = 0,612. 0,55 = 0,27µm AN 1,25 – Objetiva 40x LR = K . = 0,612. 0,55 = 0,52µm AN 0,65 1mm= 1000µm; 1µm= 1000nm; 1nm= 10°A (angstron) Limite de Resolução • Ex: O grão de pólen tem 50 µm Olho humano LR: 0,1mm ou 100 µm Microscópio de luz LR:0,2 µm Obj 100x Microscópio eletrônico LR:1-3 nm Olho humano LR: 0,1mm ou 100 µm Microscópio de luz LR:0,2 µm Obj 100x Microscópio eletrônico LR:1-3 nm RELAÇÃO ENTRE PODER DE RESOLUÇÃO E LIMITE DE RESOLUÇÃO LR PR I. RESOLUÇÃO Nitidez da imagem - riqueza de detalhes: 1. Limite de Resolução (LR): pode ser determinada numericamente. Corresponde à distância entre os dois pontos, situados em um dado objeto observado para que eles apareçam individualizados em uma imagem formada; 2. Poder de Resolução (PR): capacidade de distinguir o que existe entre dois pontos muito pequenos e muito próximos no objeto observado. Exercício Tamanho do pólen: 0,40 µm Condições: Objetiva 40x Ocular de 10x Luz branca LR: 0,52 0,52 Exercício Tamanho do pólen: 0,40 µm Condições: Objetiva 100x Ocular de 10x Luz branca LR: 0,27 0,52 0,27 Ultra violeta LR = K . AN LR = 0,61 x 0,55 nm = 0,51 m 0,65 LR = 0,61 x 0,20 nm = 0,19 m 0,65 Ultra violeta • Limite de Resolução O limite e resolução é diretamente proporcional ao comprimento de onda e inversamente proporcional a abertura numérica. LR = K . AN Aumento vazio Microscópio Ocular Objetiva AN AT $$ A 10x 100x 1,25 1000 Y B 25x 100x 1,25 2500 Y+R$1000,00 Qual microscópio você compraria? Aumento vazio Microscópio Ocular Objetiva AN AT $$ A 10x 100x 1,25 1000 Y B 25x 100x 1,25 2500 Y+R$1000,00 AT≤1000xAN oc x obj ≤1000x1,25 oc x 100 ≤ 1000x1,25 oc ≤ 12,5 Aumento vazio • Quando é utilizada uma ocular com um aumento maior que o recomendado. Ela amplia tanto a imagem que rouba luz do sistema, sendo a observação prejudicada pela falta de luz. PROFUNDIDADE DE CAMPO Incapacidade das lentes de mostrar todos os planos da imagem DISTÂNCIA DE TRABALHO OU FOCAL OBJ DT
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