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REITORIA DE GRADUAÇÃO ENFERMAGEM ELIZABETH DE ARAÚJO PRAXEDES HELOÍSA HELENA DE MEDEIROS SILVA JACIARA MELO DO NASCIMENTO NUNES ZORILDE ADRIANA RODRIGUES ALBUQUERQUE CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS Prática 1 - Caracterização de ovo albumina Prática 2- Precipitação salina do ovo-albumina Prática3- Precipitação por ácido NATAL 2010 ELIZABETH DE ARAÚJO PRAXEDES HELOÍSA HELENA DE MEDEIROS SILVA JACIARA MELO DO NASCIMENTO NUNES ZORILDE ADRIANA RODRIGUES ALBUQUERQUE CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS Prática 1 - Caracterização de ovo albumina Prática 2- Precipitação salina do ovo-albumina Prática3- Precipitação por ácido Relatório solicitado pelo curso de enfermagem da .......................sobre a caracterização de proteínas, para nota na disciplina de processos biológicos. ORIENTADOR: NATAL 2010 OBJETIVOS Esse relatório tem como finalidade a caracterização de proteínas, através de diferentes métodos, como caracterização do ovo albumina, caracterização por precipitação salina e por fim, a precipitação por ácido. Analisando assim, as cores resultantes de cada procedimento. SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO...........................................................................................05 2 CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS......................................................06 2.1 PRÁTICA 1 - CARACTERIZAÇÃO DA OVOALBUMINA..........................06. 2.1.1 Procedimento experimental.................................................................06 2.1.2 Resultados e discussões.....................................................................07 2.2 PRÁTICA 2 - PRECIPITAÇÃO SALINA DA OVOALBUMINA...................08 2.2.1 Procedimento experimental..................................................................08 2.2.2 Resultados e discussões......................................................................09 2.3 PRÁTICAS 3- PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDO.............................................09 2.3.1 Procedimento experimental...................................................................09 2.3.2 Resultados e discussões.......................................................................10 3 CORES DOS EXPERIMENTOS....................................................................11 4 QUETIONAMENTOS.....................................................................................12 5 CONCLUSÃO.................................................................................................13 6 REFERÊNCIAS..............................................................................................14 5 INTRODUÇÃO A detecção de proteínas em materiais biológicos envolve reações especificas com determinados reativos, os quais originam substâncias coloridas que absorvem luz na região visível, permitindo a sua quantificação. Dentre os métodos utilizados, situa-se o método do biureto, que é baseado na reação do sulfato de cobre em meio alcalino (reativo do biureto), com proteínas e peptídeos (no mínimo tripeptídeos). O nome do método provém do fato de que a uréia aquecida dará reação positiva, com desprendimento de amônia. O método da precipitação protéica que envolve supressão de cargas sobre a superfície protéica pelos íons do sal de carga oposta, a eliminação do invólucro de água em torno da molécula protéica. Os íons do sal altamente hidrofílicos passam a competir com as cargas protéicas pelas moléculas da água, resultando na desidratação das moléculas protéicas causando a precipitação. E por fim, a precipitação por ácido, onde ocorre a desnaturação e precipitação de proteínas positivamente carregadas. Alterando assim a estrutura das proteínas. 6 CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS PRÁTICA 1-CARACTERIZAÇÃO DA OVOALBUMINA Essa prática tem como objetivo identificar ligações peptídicas através de testes colorimétricos. 1-Procedimento experimental a) Materiais utilizados: Tubos de ensaio; Água destilada; Uréia; Ovoalbumina; Hidróxido de sódio (NaOH); Sulfato de cobre (CuSo4); Pipetas graduadas; Aquecedor elétrico. b) Procedimentos Numeramos os três tubos de ensaio de 1 a 3. No tubo 1,colocamos 2 ml de água destilada; No tubo 2,colocamos uma pequena quantidade de uréia (com a ponta da espátula), aquecemos brandamente e adicionamos 2ml de água destilada; No tubo 3, colocamos 2ml de solução de ovoalbumina, e por fim, adicionamos o reativo de biureto em cada tubo (5 gotas de hidróxido de sódio e 5 gotas de sulfato de cobre), aguardamos alguns segundos e agitamos.vale a pena salientar que quando colocamos as primeiras gotas de hidróxido de sódio 7 não observamos nenhuma cor, porém quando adicionamos 5 gotas de sulfato de cobre, foi essencial para que as cores surgissem, identificando assim as cores. Observamos os seguintes resultados: 2 - Resultados e discussões Nesse experimento podemos observar que o primeiro tubo ficou azul pelo fato da mistura de água destilada com o reativo de biureto,como o cobre em suas reações desenvolve uma cor azul, aqui não seria diferente, a água com o cobre ficaria azul. O segundo tubo ficou rosa, pois dependendo da complexidade da proteína ou dos peptídeos em questão, a cor do produto da reação na presença do biureto varia substancialmente, sendo assim, proteínas dão colocaração violeta como no tubo 3, e os peptídeos dão coloração rosa, como tubo 2. A intensidade da cor depende exclusivamente da concentração de proteínas. Para que a reação de biureto seja positiva, há necessidade da 8 presença de pelo menos duas ligações peptídicas na molécula. Como por exemplo, o tubo de ensaio 3. PRÁTICA 2 - PRECIPITAÇÃO SALINA DA OVOALBUMINA Essa pratica tem como objetivo caracterizar a proteína por saturação salina. 1 - Procedimento experimental a) Materiais utilizados: Ovoalbumina; Sulfato de amônia (75%); Hidróxido de sódio (2,5N); Sulfato de cobre; Tubos de ensaio; Pipetas graduadas; Funil; Papel filtro; Garra de madeira. b) Procedimentos: Utilizamos um tubo de ensaio e colocamos 5ml de solução de ovoalbumina lentamente.Adicionamos 10 ml de solução de sulfato de amônia a 75%, também de forma lenta, até que todo o conteúdo estivesse no tubo. Misturamos por inversão suavemente. Aguardamos 10 minutos, e filtramos para um novo tubo de ensaio. Com o filtrado obtido, fizemos a reação de biureto: Pipetamos 2 ml do filtrado para um outro tudo de ensaio e adicionamos o reativo de biureto (5 gotas de hidróxido de sódio e 5 gotas de sulfato de cobre). 9 2-Resultados e discussões: Na precipitação salina, o tubo ficou azul negativa: Azul por causa do sulfato de cobre e negativa por não conter duas ligações peptídicas, pois houve o filtramento da proteína. PRÁTICA 3 - PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDO Essa pratica, tem como objetivo caracterizar a proteína por desnaturação. 1- Procedimento experimental a) Materiais utilizados: Ovoalbumina; Solução ácida (HCl)10 Tubos de ensaio; Pipetas graduadas. b) Procedimentos: Utilizamos um tubo de ensaio e colocamos 5 ml de solução ovoalbumina lentamente. Adicionamos 3 gotas de ácido lentamente e já pudermos observar a mudança na estrutura da proteína. 2- Resultados e discussões: 11 As proteínas são compostas por 4 estruturas especificas:Estrutura primária, secundaria terciária e quartenária. A desnaturação da proteína ocorre quando se rompe sua estrutura terciária. Quando a proteína foi submetida ao ácido clorídrico, ocorreu o rompimento das ligações peptídicas e ou a perda da estruturas terciária. Dessa maneira ocorreu uma alteração na estrutura, tornando sua função praticamente inerte. Ficando assim, com esse aspecto branco. CORES DOS EXPERIMENTOS Prática 1: Tudo 1:Azul Tubo 2: Rosa Tubo 3:Violeta Prática 2:Tubo 4: Azul 12 Prática 3: Tubo 5:Branco QUESTIONAMENTOS 1) Qual o objetivo de realizar a reação do biureto com a uréia aquecida e com a ovoalbumina? Resposta: O objetivo de realizarmos a reação de biureto com a uréia aquecida é o fato de o biureto ser um composto que se forma pela condensação de moléculas de uréia com liberação de uma molécula de amônia. Esta condensação ocorre pelo aquecimento. Esse composto em contato com o sulfato de cobre em meio alcalino desenvolve uma coloração violeta. Sendo fundamental para a visualização das proteínas. Usamos o ovoalbumina para identificarmos as proteínas presentes, através da sua coloração, pois este alimento é rico em proteínas, sendo fácil a visualização. 2) Explique o que você observou na experiência 2. O que ficou retido no papel filtro? Resposta: Observamos que ao filtrar o ovoalbumina com o sulfato de amônia a 75%, o experimento ficou uma cor clara opaca, porém ao adicionarmos a reação de biureto, ele mudou de cor, para um azul negativo. O componente retido no papel foi o ovoalbumina. 3) Por que a reação de biureto foi negativa para o filtrado obtido? Resposta: Porque ao filtrar a substância, a ovoalbumina ficou retida no papel filtro, sendo assim o líquido resultante do filtrado ficou negativo, pelo fato de não conter as duas ligações peptídicas. 13 CONCLUSÃO Com esse relatório concluímos que existem diferentes métodos para identificar as proteínas como pela saturação salina, reação de biureto e até pela precipitação por ácido, através da desnaturação, podemos fazer esse último método em casa de forma simples e prática, através da clara do ovo e algum tipo de ácido. 14 REFERÊNCIAS Reação de caracterização de proteínas. Disponível em http://www2.ucg.br/cbb/professores/19/Nutricao/Bioquimica/Reacao%20de%20 Biureto.pdf, acesso em 3 de setembro de 2010. Experimentos de química. Disponível em http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/reacoes_cor adasdois.htm acesso em 3 de setembro de 2010. WILSON, Roberto. Biologia atual. 13 º Ed.1995
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