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I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 – Tipos de amostra sanguínea SANGUE TOTAL É o sangue no seu estado “in natura”, contendo todos os seus elementos, mantida a sua fluidez, graças a ação de anticoagulantes. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 – Tipos de amostra sanguínea PLASMA - É a parte líquida do sangue, a qual contém água, sais minerais e fatores da coagulação, sobretudo o fibrinogênio. - É obtido com uso de anticoagulantes e seguido de centrifugação. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 – Tipos de amostra sanguínea PLASMA - O sobrenadante (parte superior) é o plasma. Centrifugação I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 – Tipos de amostra sanguínea OBTENDO O PLASMA - EDTA: quelação com o Cálcio (fator IV) - Citrato: quelação com Cálcio em várias etapas da cascata de coagulação - Heparina: inibe conversão de Fibrinogênio (fator I) em Fibrina Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 – Tipos de amostra sanguínea ATUAÇÃO DO CITRATO: I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 – Tipos de amostra sanguínea SORO - É a parte líquida do sangue, porém, sem o fibrinogênio. - É obtido após a ocorrência do fenômeno da coagulação e posterior centrifugação. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 – Tipos de amostra sanguínea SORO - O sobrenadante (parte superior) é o soro. Centrifugação I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4. Antes da coleta da amostra - Tubo de coleta: independente de como será feita a coleta, a amostra será acondicionada em tubos; - Há diferentes tubos, para diferentes amostras. - Cada tubo é identificado pela cor da tampa, pela presença (ou não) de substâncias anticoagulantes. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.2 - Anticoagulantes a) Ácido etilenodiaminatetracético (EDTA): Usos: em hematologia para obter sangue total (c/ todos os seus componentes); Em bioquímica para dosagem de hemoglobina glicada. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.2 - Anticoagulantes a) Ácido etilenodiaminatetracético (EDTA): Identificação: tubo com tampa roxa (com variações no volume se adulto ou pediátrico). • As paredes internas dos tubos são revestidas com EDTA K2 ou EDTA K3. • Eritrócitos, leucócitos e plaquetas são estáveis em sangue total com EDTA por até 24 horas. •O esfregaço sangüíneo deve ser feito dentro de 3 horas após a coleta do sangue. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.2 - Anticoagulantes a) Ácido etilenodiaminatetracético (EDTA): Mecanismo de ação: quela o cálcio presente no sangue, bloqueando a formação da trombina, da fibrina e, consequentemente, do coágulo. Figura - Cascata de coagulação. Sucessão de eventos no sangue que levam à formação da rede de fibrina e, consequentemente, a coagulação. Note o cálcio que é quelado pelo EDTA, o que bloquea o restante da cascata. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.2 - Anticoagulantes b) Heparina com fluoreto: Usos: em bioquímica, para dosagem de glicose. Justificativa: o fluoreto inibe a glicólise pelas hemácias. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.2 - Anticoagulantes b) Heparina com fluoreto: Identificação: tubo com tampa cinza. •Os tubos para glicemia são disponíveis com diferentes aditivos. • Os tubos contêm um anticoagulante e um estabilizador, por exemplo, EDTA e fluoreto de sódio / oxalato de potássio e fluoreto de sódio / heparina sódica e fluoreto de sódio / heparina lítica e iodoacetato. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.2 - Anticoagulantes c) Heparina (apenas) Usos: Banco de sangue e bioquímica (amônia, carboxiemoglobina etc...) Identificação: tubo com tampa verde. •As paredes internas dos tubos são revestidas com heparina lítica, heparina amônica ou heparina sódica. • Determinações de lítio e de amônia não devem ser realizadas em tubos com heparina lítica e amônica respectivamente. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.2 - Anticoagulantes c) Heparina: Mecanismo: a heparina (sob forma de sal de lítio) impede a coagulação ao bloquear a síntese da trombina, além de impedir a síntese dos fatores IX, X, XI e XII. Figura - Cascata de coagulação. Mecanismo de ação da heparina. Ela liga-se e torna mais ativa a proteína Antitrombina III, a qual bloqueia a síntese dos fatores IX, X, XI e XII além do bloqueio da conversão da protombina em trombina. ANTITROMBINA III ANTITROMBINA III ANTITROMBINA III ANTITROMBINA III ANTITROMBINA III I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 - Anticoagulantes d) Citrato tamponado: contém citrato de sódio na concentração 3,2%. Usos: em hematologia, para estudos de coagulação. Identificação: tubos com tampa azul. • Os tubos para coagulação contêm em seu interior, solução tamponada de citrato trissódico. • Tanto as concentrações de citrato 0,109 mol/l (3,2%) ou 0,129 mol/l (3,8%) estão disponíveis. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 - Anticoagulantes e) Citrato de sódio tamponado: contém citrato de sódio na concentração 3,2%. Usos: em hematologia, velocidade de hemossedimentação. Identificação: tubos com tampa preta. • Os tubos para VHS contêm solução tamponada de citrato trissódico 3,8% (0,129mol/l). • A hemodiluição é de 1 parte de solução de citrato para 4 partes de sangue. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.1 - Anticoagulantes e) Citrato: Mecanismo: semelhante ao do EDTA, complexando-se com o cálcio. OBS: tubos com EDTA (tampa roxa) e citrato (tampa azul) servem para obter plasma. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.2 - Coagulantes a) Gel ativador de coágulo: é um gel à base de que promove a coagulação. Justificativa: coagulação mais rápida e mais eficiente, com mais soro (plasma sem fibrinogênio). Usos: em bioquímica, hormônios e imunologia. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.3 - Coagulantes a) Gel ativador de coágulo: Identificação: tubo com tampa vermelha ou amarela (depende do fabricante). •Os tubos para sorologia com gel contêm uma barreira de gel presente no fundo do tubo. Este material possui densidade intermediária entre o sangue coagulado e o soro. Durante a centrifugação, a barreira de gel move-se para cima posicionando-se entre o soro e o coágulo, onde forma uma barreira estável, separando o soro dos outros componentes celulares. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.3 - Coagulantes b) Sem aditivos: neste caso não há aditivo algum dentro do tubo. As paredes do tubo ajudam na coagulação. Justificativa: por ser sem aditivo, é mais barato. No entanto, requer maior tempo para coagular o sangue. Usos: em bioquímica, hormônios e imunologia. I – Fase pré-analítica Amostras biológicas: obtenção e processamentos 4.3 - Coagulantes b) Sem aditivos: Identificação: tubo com tampa apenas ou vermelha com miolo branco.
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