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Trabalho de Microbiologia

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Trabalho de Microbiologia 
Cultura de Fezes suspeitas de contaminação por Salmonella e Shigella
Para esse tipo de cultura normalmente utiliza-se um meio seletivo e diferencial, como por exemplo o Agar MacConkey, esse meio tem como princípio a inibição do crescimento de Gram positivos e por apresentar baixas concentração de sais biliares não é tão seletivo para Gram negativos, sua utilidade é isolar bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores).A incorporação de lactose ao meio permite diferenciar se o microrganismo é lactose positiva (bactérias que fermentam a lactose produzem ácido que na presença do indicador vermelho neutro resultam na formação de colônias de cor rosa), e bactérias que não fermentam a lactose formam colônias transparentes .
Salmonella e Shigella diferente de outros bastonetes Gam negativos não apresentam a capacidade de fermentar a lactose.
Para diferenciação entre Samonella e Shigella é usado meio de ágar inclinado contendo tríplice açúcar e ferro.Este meio contém três açúcares: 0,1%glicose, 1,0% lactose, 1,0% sacarose, vermelho de fenol para detecção da fermentação de carboidratos e sulfato de ferro para detecção da produção de sulfato de hidrogênio (indicado pela cor preta na base do tubo). A fermentação é indicada pela mudança da cor do indicador de pH de vermelho para amarelo. O ágar fundido é deixado solidificar, formando uma superfície inclinada essa configuração origina duas câmaras de reação dentro do mesmo tubo. A porção inclinada ou
bico, exposta em toda sua superfície ao oxigênio atmosférico, é aeróbia. A porção inferior,
denominada profundidade ou fundo, está protegida do ar e é relativamente anaeróbia. Tem como utilidade diferenciar bacilos Gram negativos com base na fermentação de carboidratos, produção de sulfato de hidrogênio e gás. A detecção de H²S evidenciado por formação de colônias de cor negra no centro indica suspeita de Salmonella, colônias incolores: suspeita de Shigella spp.
Cultura de Garganta 
Usadas para detectar a presença de estreptococos beta-hemolíiticos do grupo A, como o Streptococcus pyogenes, causador de faringite. O material coletado é inoculado em placa contendo ágar-sangue.
O meio de Ágar sangue, usando uma base rica, oferece ótimas condições de crescimento a maioria dos microrganismos. A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos, úteis para a diferenciação de Streptococcus e Staphylococcus.
A Beta hemólise caracterizada pela presença de halo transparente ao redor das colônias semeadas, causada pela lise total dos eritrócitos.
Alfa hemólise indicada pela presença de halo esverdeado ao redor das colônias semeadas (lise parcial dos eritrócitos) e Gama hemólise (sem hemólise): ausência de halo ao redor das colônias (eritrócitos permanecem íntegros).
Após encontradas as colônias de estreptococo B-hemolíticos utiliza-se um disco de bacitracina para determinar se eles são realmente do grupo A. Streptococcus beta hemolítico do grupo A são sensíveis a concentrações baixas de bacitracina por isso esse meio é utilizado na identificação de Streptoccus pyogenes ,o aparecimento de qualquer halo ao redor do disco da ao teste caráter positivo para sua presença.
Testes de pureza da água 
Para amostras de alimentos, leite e análise de água o meio mais utilizado é o ágar-nutriente cuja composição apresenta Extrato de carne 3 g Peptona 5 g Ágar ágar 15 g Água destilada 1000 ml em pH 6,8 +/- 0,2 , aplicado para cultivo preliminar das amostras submetidas à exames bacteriológicos e isolamento de organismos para culturas puras. O uso mais freqüente é para a conservação e manutenção de culturas em temperatura ambiente neste ágar, como método opcional para os laboratórios que não dispõem do método da crioconservação (congelamento das cepas em freezer à - 70ºC).Usado para observar esporulação de espécies de bacilos Gram positivos como a Escherichia coli , a positividade da inoculação se dá pelo crescimento de colônia na superfície do ágar. 
Outro método usado para a detecção de coliformes é a utilização de um meio que contém dois tipos de substratos (ONPG) e (MUG). O princípio do teste se baseia na capacidade dos coliformes de produzirem a enzima beta galactosidase que atua sobre o ONPG dando ao meio uma coloração amarela, a E.coli é o único coliforme que produz a enzima beta glicoronidase que atua sobre o MUG formando compostos fluorescentes que possuem brilho azul quando incididos pela luz ultravioleta.
O Aquateste Coli é um meio em pó, composto por nutrientes, ONPG (ortonitrofenol-beta-galacto-piranosideo) e MUG (methyl-umbelipheril-glucuronide) apresentado em frascos para diluir 100 mL de amostra.O meio permanecendo inalterado e sem turvação indica ausência de crescimento; - A turvação do meio é sinal de crescimento; - Prova positiva para coliformes: meio amarelo com turvação; - Prova para Escherichia coli: submeter o meio em análise (frasco ou tubos) à ação de uma luz ultra-violeta (comprimento de onda 366 nm) em um ambiente escuro, e observar a ocorrência ou não de uma fluorescência azul esverdeada, que caracteriza a prova positiva. 
Referências bibliográficas 
Apostila de “Descrição dos meios de cultura empregados nos testes microbiológicos” módulo IV da Agência Nacional de Vigilância Sanitária.
Livro de Microbiologia – Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke e Christine L. Case
Aquateste-Coli http://www.laborclin.com.br/produtos/510100/510118_bl.pdf 
Brasil. Farmacopeia Brasileira, volume 1 / Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Brasília: Anvisa, 2010.

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