teste Antibiograma

Prévia do material em texto

�PAGE �
�PAGE �1�
AULA PRÁTICA DE MICROBIOLOGIA
Profa. TATIANA e Profa. MARTA
ANTIBIOGRAMA
INTRODUÇÃO
Antibiograma é um teste utilizado para verificar a sensibilidade de uma bactéria frente a diversos antimicrobianos. Este teste tem como finalidade orientar o médico na terapêutica de modo que ela seja segura e eficaz. Para se fazer um antibiograma é necessário que o agente da infecção esteja isolado. A cultura precede o antibiograma. A maioria dos microrganismos apresenta uma variação muito grande quanto à sensibilidade, mostrando muitas vezes resistência múltipla a diversos antimicrobianos. Não é indicado antibiograma quando o microrganismo isolado faça parte da microbiota normal do local onde o material clínico foi colhido, ou quando o microrganismo for considerado um contaminante. Existem várias técnicas para se fazer um antibiograma, onde a mais utilizada pela sua praticidade é o de difusão com disco.
Difusão com discos (Método de Kirby e Bauer): Este método baseia-se na inibição do crescimento de um microrganismo semeado na superfície de um meio de cultura, onde se colocou discos de papel de filtro impregnado com um antimicrobiano de concentração padronizada A leitura é feita 18 a 24 horas após a incubação e se baseia na presença ou não de um halo de inibição ao redor do disco. Os halos de inibição são medidos em mm e a medição feita no fundo da placa. Os resultados são comparados com os de uma tabela, onde estão relacionados os tamanhos dos halos que significam sensibilidade ou resistência às drogas. 
Existem vários fatores que podem interferir no resultado do antibiograma levando com frequência a resultados falsos, entre estes podemos citar:
-Preparação imprópria do meio de cultura - o meio indicado para realização do antibiograma é o ágar Mueller Hinton, para bactérias exigentes que não cresce satisfatoriamente neste meio utilizamos o ágar Sangue. As placas devem ser colocadas na geladeira (2-8°C), e antes do uso colocá-las em estufa a 37° para eliminar o excesso de umidade.
• Discos fora de validade ou impropriamente estocados - os discos devem ser mantidos na geladeira (2-8°C) e retirados um pouco antes do uso para que a temperatura seja equilibrada com a do ambiente.
• Inóculo não padronizado - turvação da cultura deve ser ajustada a aproximadamente 1,5x108 bac/mL com o auxílio da escala 0,5 de Mc Farland.
• Leitura prematura das placas antes de 16 - 18
• Medição errada dos diâmetros da zona de inibição.
Técnica:
Retirar as placas e os frascos com os discos da geladeira cerca de 20-30 minutos para que adquiram a temperatura ambiente antes da execução da prova.
a- Com uma alça bacteriológica em platina devidamente flambada e resfriada, tocar na colônia recente (18-24h);
b- Suspender as colônias em solução salina estéril (NaCl 0,85%) até se obter uma turvação compatível com o grau 0,5 da escala Mac Farland (1x106 UFC/mL).
c- Embeber um swab estéril na suspensão bacteriana, comprimindo-o contra as paredes do tubo para tirar o excesso da suspensão, e semear em seguida de forma suave em todas direções na placa (cinco direções), procurando abranger toda a superfície;
d- Aguardar (não mais que 15 minutos) a superfície do agar secar;
e- Com auxílio de uma pinça flambada e resfriada, colocar os discos de antibióticos sobre a superfície do meio inoculado, exercendo uma leve pressão com a ponta da pinça para uma boa adesão dos discos;
f- Incubar a placa com os discos em estufa bacteriológica a 37°C por 18 a 24 horas;
g- Resultados:
Com o auxílio de uma régua medir o diâmetro dos halos inibitórios de cada disco, e consultar uma tabela apropriada para determinar se a bactéria em análise é sensível,
intermediário ou resistente ao antimicrobiano testado.
EXERCÍCIO PRÁTICO
1. Realizar antibiograma utilizando a técnica acima descrita.
Bactéria utilizada: __________________________________
Tabela de antibiograma:
	Antimicrobiano
	Diâmetro do halo (mm)
	Interpretação
	Resistente
	Intermediário
	Sensível
	Cefotaxima (CTX)
	
	
	< ou = 22
	23 - 25
	> ou = 26
	Cloranfenicol
(CLO)
	
	
	< ou = 12
	13 - 17
	> ou = 18
	Gentamicina
(GEN)
	
	
	< ou = 12
	13 - 14
	> ou = 15
	Tetraciclina
(TET)
	
	
	< ou = 11
	12 - 14
	> ou = 15