9- Coleta Fixação Coloração

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TÉCNICAS
Colheita/ Fixação/ Coloração
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 COLHEITA
Exfoliativa:
Fundo de saco vaginal (células descamadas naturalmente)
Espátula de Ayres
Abrasiva:
Raspado da mucosa cervical (ecto e endocervice) e vaginal
Espátula de Ayres e escova de náilon 
OBS: O uso da escova deve ser feita sem traumatizar a mucosa, fazendo uma rotação de 360° assim como a espátula na ectocérvice.
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 INTRUMENTOS PARA COLHEITA 
a) Espátula de Ayres
b) Escova Plástica
c) Escova de Nailon
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 LOCAIS DE COLHEITA
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COLHEITA
Espalhamento na lâmina: 
A lâmina deve ser de borda fosca, para identificação, limpa e nova (sem ranhuras). 
Fazer um esfregaço oriundo da vagina, ectocérvice endocérvice (VCE) sem circunvoluções. 
O esfregaço não pode ser espesso.
Um esfregaço ideal é aquele possui acima de 30.000 células(escamosas, metaplásicas e endocervicais) 
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FIXAÇÃO
OBJETIVO: 
Preservar o estado morfológico das células.
Fixação deve ser realizada imediatamente após a colheita, para evitar dessecamento.
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 TIPOS DE FIXAÇÃO
1) Molhada: 
Álcool-éter (1/1), álcool 95%, álcool absoluto, metanol, isopropanol 80%.
OBS: Pode ser realizada no prazo de 15 a 30 minutos ou deixar no próprio frasco até chegar ao laboratório.
2) Fixação em cobertura (camadas): 
Spray com polietilenoglicol + álcool isopropilico (carbowax) 
OBS: Lançar o spray a 30 cm da lâmina, antes de corar retirar a camada em álcool a 95% durante 15’ 
Pouco recomendado em função de erros que provocam a dessecação do esfregaço.
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OUTROS TIPOS DE FIXAÇÃO
Fluidos: Álcool 50 a 70%
Material mucoide: Álcool 50% + 2% poliglicol
Cell-block: Formalina a 10%
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 COLORAÇÃO
SHORR: 
	Realizada por alguns laboratórios
PAPANICOLAOU: 
A mais preconizada. 
Mundialmente conhecida (1942) 
Corante nuclear: 
	Hematoxilina de Harris (cora o núcleo em azul)
Corantes Orange G e EA 36 ou 50: 
	Cora o citoplasma de acordo com a maturação do citoplasma 
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COLORAÇÃO DE PAPANICOLAOU
Vantagens do método:
Definição dos detalhes nucleares
Transparência citoplasmática
Diferenciação celular
 
Fases do método:
Hidratação
Desidratação
Diafanização
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 COLORAÇÃO DE PAPANICOLAOU
CONFORME O INCA
1) HIDRATAÇÃO PROGRESSIVA
	Álcool a 96%
	Álcool a 70%................ 01 min.
	Água corrente............... 01 min.
2) COLORAÇÃO NUCLEAR
	Hematoxilina de Harris....... 1,30 min.
	Água corrente
	HCl aquoso 1 ou 0,5%........... 05 dips
	Água corrente....................... 1,30 min.
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COLORAÇÃO DE PAPANICOLAOU
3) DESCOLORAÇÃO
	Álcool a 95%............................................. 05 dips
	Duas cubas com álcool absoluto........... 05 dips cada
4) COLORAÇÃO CITOPLASMÁTICA
	Orange G....................................................... 30 segundos
	Três cubas com álcool absoluto............... 05 dips cada
5) COLORAÇÃO CITOPLASMÁTICA
	EA 36................................................................ 02 min.
	Quatro cubas com álcool absoluto............. 10 dips
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COLORAÇÃO DE PAPANICOLAOU
6) DIAFANIZAÇÃO
	Xilol + álcool absoluto(1/1)............... 10 dips
	Quatro cubas com xilol..................... 10 dips
7) MONTAGEM
	Lâmina
	Lamínula
	Resina, Bálsamo do Canadá, Verniz, Entelan