Coloração Bacteriana - Gram

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COLORAÇÃO BACTERIANA
Profª: Liliane Melo
As técnicas de coloração iniciadas por Paul Erlich eRobert Koch (1843-1910) permitiram ao microbiólogo distinguir as células bacterianas quanto a sua morfologia, tamanho e arranjo celular e diferenciá-las de acordo com as suas características tintoriais.
COLORAÇÃO SIMPLES
COLORAÇÃO SIMPLES
Técnica característica pelo uso de apenas um corante, permitindo a observação da forma, tamanho e o grupamento de célula bacteriana.
É uma técnica utilizada para detecção de cocos que causam a meningite ( Neisseria meningitidis) em amostra de LCR.
COLORAÇÃO SIMPLES
Método:
Preparar o esfregaço bacteriano em lâmina.
Cobrir toda lâmina com solução de Azul de Metileno, aguardar 5 min. e desprezar o corante.
Lavar a lâmina rapidamente em água corrente, secar, sem esfregar e observar com óleo de imersão ao microscópio.
COLORAÇÃO GRAM
COLORAÇÃO GRAM
Hans Christian Joachim Gram
COLORAÇÃO DE GRAM 
(Coloração diferencial)
Este método de coloração foi empiricamente desenvolvido pelo bacteriologista dinamarquês, Christian Gram, em 1884, e permite distinção entre diferentes bactérias que podem mostrar uma morfologia similar, porém com propriedades tintoriais diferentes.
A COLORAÇÃO DE GRAM CLASSIFICA AS BACTÉRIAS EM DOIS GRUPOS: GRAM POSITIVAS E GRAM NEGATIVAS.
Parede Celular Bacteriana
 Estrutura e Propriedades Tintoriais 
CLASSIFICAÇÃO BACTERIANA SEGUNDO AS CARACTERISTICAS TINTORIAIS.
COLORAÇÃO GRAM
BACTÉRIAS GRAM POSITIVAS
 Cocos: Staphylococcus; Streptococcus
 Bacilos: Lactobacillus; Listeria; Corynebacterium
CLASSIFICAÇÃO BACTERIANA SEGUNDO AS CARACTERISTICAS TINTORIAIS.
COLORAÇÃO GRAM
BACTÉRIAS GRAM NEGATIVAS
Cocos: Neisseria; Moraxella; Branhamella
Bacilos:Todos os representantes da família Enterobacteriaceae (Escherichia coli; Klebsiella spp.; Enterobacter spp.; etc.)
COLORAÇÃO GRAM
Componentes e Protocolo
Cristal Violeta
1 min.: Corante
Lugol
1 min.: Mordente
Solução Álcool-Acetona (1:1)
Descoloração Completa:
 Safranina ( fucsina)
15 a 30 seg.: Contracorante (Coloração Vermelha)
Morfologia Celular Bacteriana
 Estrutura e Coloração 
Morfologia Celular Bacteriana
 Estrutura e Coloração 
COLORAÇÃO ZIEHL-NEELSEN
COLORAÇÃO ZIEHL-NEELSEN
É um método para pesquisa de Bacilos Álcool Ácido Resistentes ( BAAR) – ( bacilo da tuberculose, bacilo de Hansen e micobactérias atípicas).
Se coram inicialmente pela carbofucsina e resistem a uma coloração por álcool-ácido.
Apenas um grupo de bactéria que possuem uma parede celular constituída de lipídeos em grande concentração, ácidos graxos de cadeia longa, que confere a célula a característica de álcool resistência.
COLORAÇÃO ZIEHL-NEELSEN
COLETA DO MATERIAL
COLORAÇÃO ZIEHL-NEELSEN
1- Coletar a amostra, antes da antibioticoterapia.
2- Obter, de preferência o primeiro escarro da manha antes da ingestão de alimentos.
3- Orientar o paciente para escovar os dentes com água (não utilizar pasta dental) e enxaguar a boca varias vezes, inclusive com gargarejos.
4- Respirar fundo, umas oito ou dez vezes, e tossir profundamente, recolhendo o material no frasco de coleta estéril.
5- Quando o material produzido for escasso, coletar amostra após nebulização.
6- Enviar ao laboratório o mais breve possível.
Técnica:
Colocar a amostra na Lâmina com um aplicador de madeira. Escolher a partícula mais densa ou uma mistura da amostra. Deixar secar à temperatura ambiente.
Cobrir a lâmina com fuccina.
Com uma chama, aquecer a lâmina pela sua parte interior até emitir vapores. Repetir duas vezes até o corante estriar.Aguardar 5’ minutos não deixando o corante ferver nem secar.
Lavar a lâmina com água corrente, suavemente.
Descorar a lâmina com uma solução de álcool-ácido clorídrico, até não sair mais corante.
Lavar a lâmina novamente com água corrente.
Cobrir o esfregaço com azul de metileno de Loeffler surante 30 segundos.
Lavar a lâmina em água corrente.
Deixar secar e observar ao microscópio, com a objetiva de imersão.
FIM!