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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MATO GROSSO DO SUL CURSO: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS DISCIPLINA: BIOLOGIA MOLECULAR TRADUÇÃO DO TRADUÇÃO DO RNAmRNAm Prof. Elizangela Leite Vargas TRADUÇÃO DO TRADUÇÃO DO RNAmRNAm 1 TRADUÇÃO � A síntese protéica ocorre no ribossomo, que é montado no citosol a partir de duas subunidades ribonucleoprotéicas provenientes do nucléolo. � No ribossomo, o RNAm é traduzido em uma proteína, processo para o qual é necessária a intervenção dos RNAt.processo para o qual é necessária a intervenção dos RNAt. � O RNAt capta do citosol os aminoácidos e os conduz até os ribossomos pela ordem estabelecida pelos nucleotídeos do RNAm. TRADUÇÃO � A síntese das proteínas começa com uma união entre si de dois aminoácidos e continua pela agregação de novos aa um de cada vez, em uma das extremidades da cadeia. � A chave da tradução está no código genético, constituído por combinações de três nucleotídeos consecutivos – trincas – no RNAm.– no RNAm. � Cada trinca constitui um códon, existem 64 códons, 61 dos quais servem para cifrar os aa e 3 para marcar o término da tradução. � Como existem mais códons (61) que aa (20), quase todos podem ser reconhecidos por mais de um códon – exceto metionina e triptofano. Código Genético • Características: – Especificidade – um determinado códon sempre codifica o mesmo AA; – Universalidade – é conservado em todas as espécies; Degeneração do código em todas as espécies; – Redundância ou Degeneração – um AA pode ter mais de 1 trinca que o codifica; – Contínuo – sempre lido de 3 em 3 bases. 1 códon � 3 nucleotídeos no RNAm Código Genético 7 códons � 21 nucleotídeos 31 TIPOS DIFERENTES DE RNAt �As moléculas intermediárias entre o RNAm é os aa são os RNAt. � Apresenta uma sequência de 3 nucleotídeos chamada anticódon – complementar ao códon.anticódon – complementar ao códon. � Existem apenas 31 RNAt para 61 tipos de códons – capacidade de alguns RNAt reconhecer mais de um códon. 31 TIPOS DIFERENTES DE RNAt CÓDON DE INICIAÇÃO �O primeiro códon que é traduzido nos RNA, é sempre a trinca AUG. � AUG – dupla função: códon de iniciação e codifica metionina.metionina. � O códon de iniciação determina o encaixe das sucessivas trincas. RNAm conectam-se aos ribossomos � Os RNAs mensageiros saem do citoplasma pelos poros do envoltório nuclear. �No citosol cada RNAm se combina com os ribossomos, isso os capacita a exercer a função codificadora na sínteseos capacita a exercer a função codificadora na síntese protéica. � Nos eucariotos, o ribossomo reconhece o Cap 5’ e desloca- se pelo mRNA até encontrar o códon de iniciação AUG. RNAm conectam-se aos ribossomos Molécula adaptadora 2-RNA transportadorMoléculas de RNAt Molécula adaptadora Habilidade de reconhecer o códon no mRNA e transportar um aminoácido específico, correspondente ao códon. Estrutura secundária 2-RNA transportador Estrutura terciária Aceptor do aminoácido Alça do anticodon � Para desempenhar suas funções os RNAt adquirem forma carcterística – trevo de quatro folhas. �Apresentam 4 braços. ��BraçoBraço aceptoraceptor: se liga ao Moléculas de RNAt ��BraçoBraço aceptoraceptor: se liga ao aminoácido; � BraçoBraço dodo anticódonanticódon: contém a trinca do anticódon no centro da sequência, formando uma alça. AminoacilAminoacil--tRNA sintetasetRNA sintetase �Enzima que sintetiza a ligação do tRNA com o aminoácido (existem, pelo menos, 20 sintetases); �O aminoácido ativado é transferido, então, para o tRNA, formando a aminoacil-tRNA;tRNA, formando a aminoacil-tRNA; �A enzima aminoacil-tRNA sintetase tem um mecanismo de correção de erro, para evitar a incorporação de um aminoácido incorreto no tRNA. Estrutura dos RibossomosEstrutura dos Ribossomos �Estrutura compacta de ribonucleoproteínas com 2 subunidades. Cada subunidade é formada por proteínasproteínas associadasassociadas aa moléculasmoléculas dede rRNAsrRNAs; �Ribossomos são organelas assimétricas, compostas�Ribossomos são organelas assimétricas, compostas por uma região de base e outra contendo uma cabeça, ou protuberância. Subunidades RibossomaisSubunidades Ribossomais �� ProcariotosProcariotos: � Subunidade 50S: maior � Subunidade 30S: menor 70S �� EucariotosEucariotos: � Subunidade 60S: maior � Subunidade 40S: menor 80S Estrutura dos RibossomosEstrutura dos Ribossomos Estrutura dos RibossomosEstrutura dos Ribossomos Sítios Ativos dos RibossomosSítios Ativos dos Ribossomos ��SítioSítio AA: liga-se com o aminoacil-tRNA; ��SítioSítio PP: liga-se ao peptidil- tRNA; ��SítioSítio EE: sítio de saída das novas proteínas sintetizadas. PolirribossomosPolirribossomos �Cada RNAm pode ser traduzido por vários ribossomos simultaneamente, que deslizam por ele na direção 5’ ͢ 3’ em fila indiana; �A associação de um RNAm com vários ribossomos é denominada de polirribossomo.denominada de polirribossomo. �� INICIAÇÃOINICIAÇÃO Reconhecimento da cap 5’ e aminocil RNAt ��ALONGAMENTOALONGAMENTO Incorporação dos aminoácidos ETAPAS DA SÍNTESE PROTÉICA - TRADUÇÃO Incorporação dos aminoácidos ��TERMINAÇÃOTERMINAÇÃO A síntese da proteína é finalizada quando o sítio A do ribossomo atinge o códon de terminação. 23 �Durante a síntese de proteínas, os ribossomos deslocam-se ao longo do RNAm, possibilitando um pareamento entre esse e os tRNAs que carregam os diferentes aminoácidos que irão compor as proteínas; ETAPAS DA TRADUÇÃO �Os ribossomos deslocam-se ao longo do RNAm, na direção 5’ ͢ 3’; �Um mesmo RNAm é traduzido por diferentes ribossomos. �O ribossomo se desloca expondo novas trincas nos sítios A e P; �O sítio A expõe o códon correspondente ao aminoácido novo que será incorporado, sendo ETAPAS DA TRADUÇÃO aminoácido novo que será incorporado, sendo ocupado pelo aminoacil-tRNA complementar a ele; �O sítio P é ocupado pelo tRNA correspondente ao códon anterior, o qual também carregará a cadeia polipeptídica em formação (peptidil-tRNA). �Complexo de iniciação: ribossomo, mRNA e aminoacil- tRNA inicial � 1º - liga-se a subunidade menor o mRNA, seguido pelo aminoacil-tRNA – códon de iniciação (AUG), formando o complexo de iniciação; � 2º - adição da subunidade maior formando o ribossomo ETAPAS DA TRADUÇÃO - Início � 2º - adição da subunidade maior formando o ribossomo completo. �Em eucariotos, o ribossomo reconhece a cap 5’ e desloca-se até o primeiro AUG. Após, liga-se o aminoacil-tRNA inicial no sítio P, formando o complexo de iniciação. ETAPAS DA TRADUÇÃO - Início �Os aminoácidos são adicionados isoladamente, devendo ocorrer o processo de forma cíclica; ETAPAS DA TRADUÇÃO - Alongamento � Começa quando se aproxima do sítio A do ribossomo outro aminoacil-RNAt compatível com o segundo códon do RNAm; �A metionina ligada no sítio P se liga através de uma ligação peptídica com o aminoácido localizado no sítio A pela peptidil-transferase; ETAPAS DA TRADUÇÃO - Alongamento TranslocaçãoTranslocação �O ribossomo avança 3 nucleotídeos no mRNA: �O tRNA não carregado é liberado do sítio P; �O peptidil-tRNA move-se do sítio A para o sítio P; �Um novo códon é exposto no sítio A, o qual está�Um novo códon é exposto no sítio A, o qual está preparado para receber o aminoacil-tRNA correspondente; �O alongamento será sempre seguido pela translocação e assim por diante; �Ambos eventos não acontecem simultaneamente. �Aparece no sítio A um dos códons de terminação – UAG, UGA, ou UAA; �A peptidil-transferase libera o peptídeo do tRNA; �O tRNA é liberado do ribossomo; ETAPAS DA TRADUÇÃO - Terminação �O peptídeo é liberado através do sítio E; �As subunidadesdos ribossomos são dissociadas; � O RNAm poderá ser utilizado para a síntese continuada da proteína. ETAPAS DA TRADUÇÃO - Terminação Cys Met Ala Asp Glu Phe HisRibossomo Proteína tRNA aa livre Gly Molécula de mRNA A U G G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A 5’ 3’ Direção do avanço do ribossomo tRNA códon Cys Met Ala Asp Glu Phe HisGly A U G G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A Cys 5’ 3’ Asp Met Ala Cys Glu Phe HisGly A U G G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A Asp 5’ 3’ Glu Met Ala Cys Asp Phe Gly His A U G G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A Glu 5’ 3’ Phe Met Ala Cys Asp Glu Gly His Ile A U G G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A Phe 5’ 3’ Gly Met Ala Cys Asp Glu Phe His Ile Lys A U G G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A Gly 5’ 3’ His Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly Ile Lys A U G G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A His 5’ 3’ Ile Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly His Lys A U G G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A Ile 5’ 3’ Lys Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly His Ile Leu G C A U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A A A A Lys 5’ 3’ Leu Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly His Ile Lys Met U G C G A C G A A U U C G G A C A C A U A A A A U U A Leu 5’ 3’ Met Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly His Ile Lys Leu Asn G A C G A A U U C G G A C A C A U A A A A U U A A U G MetLeu 5’ 3’ Asn Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly His Ile Lys Leu Met Pro G A A U U C G G A C A C A U A A A A U U A A U G A A C AsnMet 5’ 3’ Pro Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly His Ile Lys Leu Met Asn Gln U U C G G A C A C A U A A A A U U A A U G A A C C C A Pro 5’ 3’ Gln Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly His Ile Lys Leu Met Asn Pro G G A C A C A U A A A A U U A A U G A A C C C A C A A Gln 5’ 3’ Met Ala Cys Asp Glu Phe Gly His Ile Lys Leu Met Asn Pro Gln C A C A U A A A A U U A A U G A A C C C A C A A U A A 5’ 3’STOP Ala Cys Asp Glu Phe Met Gly His Ile Lys Leu Met Asn Pro Gln A U A A A A U U A A U G A A C C C A C A A U A A A A A 5’ 3’STOP Ala Cys Asp Glu Phe Met Gly His Ile Lys Leu Met Asn Pro Gln A U A A A A U U A A U G A A C C C A C A A U A A T A C 5’ 3’STOP Ala Cys Asp Glu Phe Met Gly His Ile Gln Lys Pro Leu Asn Met A U A A A A U U A A U G A A C C C A C A A U A A T A C 5’ 3’ Código Genético • Toda a atividade celular depende da presença de proteínas. • A função das proteínas depende da sua conformação tridimensional que, por sua vez, é determinada por uma sequência de aminoácidos. • Quem contém a informação para especificar a sequência de aminoácidos das diferentes proteínas é o DNA. • No entanto, os genes (DNA) não codificam diretamente as 51 • No entanto, os genes (DNA) não codificam diretamente as proteínas, fazendo isto por meio de uma molécula mensageira (mRNA). • A unidade básica (códon) do código para um aminoácido consiste em uma sequência de três pares de bases nucleotídicas (códon de trincas) – O código genético também inclui sequências para o início (códon iniciador) e para o término (códon finalizador) da região codificadora – O código genético é universal: os mesmos códons são utilizados por diferentes organismos Gene RNA polimerase hnRNA Transcrição Processamento Núcleo mRNA Citoplasma Processamento Tradução proteína Proteína Pronta! • E agora? • Destinos possíveis... As proteínas assumem a sua conformação nativa com o auxílio das chaperonas. Modificações Pós-tradução e a Estrutura Tridimensional Ajudam as proteínas a se moldar, associar a outras proteínas de maneira estável e tornarem-se estruturas ativas, evitando a associação de proteínas ainda não dobradas corretamente Conformação Desnaturada Conformação Nativa Endereçamento de proteínas • I - Co-traducional (vias de secreção): – Retículo endoplasmático rugoso – Golgi – Membrana plasmática – Meio extracelularextracelular • II- pos-traducional: – núcleo – mitocôndria – Cloroplasto – peroxissomos Sinais de endereçamento na Proteína: 1- Sequência sinal (16-30 aminoácidos no N-terminal) 2- Sinal de endereçamento nuclear ( 4-8 aminoácidos com carga positiva) 3- Sinal de retenção no RE Síntese Protéica no Retículo Endoplasmático Rugoso Síntese Protéica no RER Síntese protéica no reticulo endoplasmático rugoso daquelas proteínas que serão localizadas na membrana plasmática ou nos lisossomos, ou serão secretadas Proteínas organelares • Produzidas com sinal de exportação • Sinal é clivado• Sinal é clivado quando a proteína alcança seu destino celular Proteínas transmembrana • Domínios hidrofóbicos são capazes de invadir as regiões lipídicas (também (também hidrofóbicas) da membrana plasmática Inibidores de síntese protéica • Antibióticos inibem a síntese de proteínas bacteriana • Tetraciclina• Tetraciclina – Liga no RNA 16S (sub 30S) – Inibe a ligação do amino- acyl tRNA no sítio A • Cloranfenicol – Liga na subunidade 50S Conclusões • Tradução é o processo de produção de proteínas • Diferentes tipos de RNAs e proteínas atuam no processo • A tRNA aminoacil sintetase é a protéina responsável pelo código genético • A última molécula a se juntar ao complexo de iniciação é a • A última molécula a se juntar ao complexo de iniciação é a subunidade maior do ribossomo • As proteínas normalmente começam com o aminoácido metionina • A tradução continua até que haja um stop codon • As proteínas precisam ter uma conformação 3D correta pra funcionar (chaperonas ajudam na montagem) • Muitas proteínas contêm sinais de sinalização celular
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