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Isolamento de Fungos
O isolamento de fungos pode ser feito diretamente a partir de algum substrato ou
de um compartimento ambiental (ar, água, solo), utilizando vidraria (tubos de ensaio,
placas de petri) e instrumentos (estiletes, pinças, agulhas) esterilizados, com a
manipulação em uma zona de segurança próximo a uma chama e/ou em uma câmara de
fluxo laminar. Para que ocorra o isolamento dos fungos, é necessário oferecer condições
propícias para o desenvolvimento dos mesmos. O isolamento pode ser realizado a partir
de câmaras úmidas (recipiente semi-fechado com fonte de umidade (ex. placas de petri
forradas com papel filtro embebido com água destilada estéril) ou a partir de um meio de
cultura sólido ou líquido, semi-sintético ou sintético (ex. tubos de ensaio ou placas de petri
contendo meio de cultura). 
Protocolos das técnicas
Placa de solo:
1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
2. Flambar as bordas de uma placa de petri esterilizada
3. Abrir a placa de petri e colocar, com uma espátula, uma quantidade bem pequena de
solo na placa de petri
4. Colocar 1 ml de água destilada esterilizada e misturar, com movimentos circulares, a
porção de solo com a água 
5. Verter meio de cultura com antibiótico, ainda líquido, a uma temperatura aproximada de
40°C, sobre a placa de petri com a solução de solo
6. Espalhar o meio de cultura, fazendo movimentos circulares com a placa de petri
7. Tampar imediatamente a placa de petri
8. Flambar as bordas da placa de petri
Diluição de solo
1. Identificar as placas de petri (data, nome da técnica, nome do grupo) 
2. Retirar o capuchão de um tubo de ensaio esterilizado com 9 ml de água destilada
3. Flambar a abertura do tubo de ensaio
4. Colocar 1 g de solo no tubo de ensaio com uma espátula
5. Repetir o passo 3
6. Fechar o tubo de ensaio com o capuchão
7. Agitar o tubo de ensaio para homogeneizar a solução de solo
8. Identificar o tubo de ensaio, marcando 1:10
9. Retirar 1 ml da solução de solo do primeiro tubo 
10. Verter este 1 ml de solução de solo do primeiro tubo em um segundo tubo
11. Repetir os passos 3, 6 e 7 (obs.: a cada nova diluição os valores aumentam 
10x: tubo 2, 1:100; tubo 3, 1:1000; etc.)
12. Flambar as bordas de uma placa de petri com meio de cultura
13. Levantar a tampa até um ângulo máximo de 45°
14. Verter 1ml do primeiro tubo de ensaio na placa de petri 
15. Espalhar o líquido, fazendo movimentos circulares com a placa de petri
16. Tampar imediatamente a placa de petri
17. Flambar as bordas da placa de petri
18. Repetir os passos 12 a 17 para todos os tubos
Exposição de placas de petri com meio de cultura sólido ao ar
1. Selecionar 3 placas de petri com meio de cultura
2. Identificar cada placa de petri, marcando um I (ambiente interno) em todas e os
números 5', 10' e 15' em cada uma delas (e também com data, nome da técnica, nome do
grupo)
3. Repetir os passos 1 e 2 para outras 3 placas, substituindo o I por um E (ambiente
externo)
4. No ambiente interno (sala de aula), abrir simultaneamente as tampas das 3 placas
(marcadas com I), deixando as tampas viradas para baixo sobre uma superfície
5. Tampar a placa marcada com 5' após 5 min, a de 10' após 10 min e a de 15' após 15
min
6. Repetir os passos 4 e 5 em um ambiente externo (área verde) com as placas marcadas
com E
Iscagem com substratos orgânicos I (água de corpo aquático)
1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
2. Preparar as iscas: (a) cortar as sementes ao meio, (b) cortar em pequenos pedaços as
cascas de cebola, ecdises de cobra, papel celofane etc.
3. Abrir uma placa de petri 
4. Verter a água coletada em um corpo aquático até preencher a metade da altura da
placa de petri
5. Colocar os diversos tipos de iscas na placa de petri
6. Tampar a placa de petri 
Iscagem com substratos orgânicos II (solo + água destilada)
1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
2. Preparar as iscas: (a) cortar as sementes ao meio, (b) cortar em pequenos pedaços as
cascas de cebola, ecdises de cobra, papel celofane etc.
3. Abrir uma placa de petri e colocar, com uma espátula, uma quantidade pequena de solo
na placa de petri
4. Colocar água destilada esterilizada e misturar, com movimentos circulares, a porção de
solo com a água
5. Colocar os diversos tipos de iscas na placa de petri
6. Tampar a placa de petri 
7. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
Isolamento de microfungos do filoplano (superfície foliar)
1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
2. Abrir uma placa de petri 
3. Dobrar uma folha com colônias de microfungos na superfície 
4. Fazer a impressão da área da folha com as colônias de microfungos na 5uperfície do
meio de cultura sólido da placa de petri
6. Tampar a placa de petri 
7. Flambar as bordas da placa de petri
Isolamento de microfungos endofíticos
1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
2. Flambar um gilete (segurando-o com uma pinça)
3. Cortar uma folha em pequenos pedaços
4. Abrir um frasco esterilizado
5. Colocar os pedaços de folha no frasco
6. Preencher o frasco, até aproximadamente à metade de sua altura, com água destilada 
estéril 
7. Agitar vigorosamente o frasco por alguns segundos
8. Retirar a água com o cuidado de evitar que os pedaços de folha saiam do frasco
9. Repetir os passos 6 a 8 por, pelo menos, três vezes 
10. Abrir uma placa de petri contendo papel de filtro
11.Colocar um pouco de água destilada (o suficiente para umedecer o papel)
12. Após a última lavagem, retirar os pedaços de folhas com o auxílio de uma pinça, 
colocando-os na placa de petri contendo papel de filtro já previamente umedecido
13. Tampar a placa de petri
Isolamento de microfungos coprófilos (fezes)
1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
2. Abrir uma placa de petri contendo papel de filtro
3. Colocar um pouco de água destilada (o suficiente para umedecer o papel)
4. Tampar a placa de petri
5. Utilizando uma luva em uma das mãos, despedaçar as fezes de herbívoro, expondo as 
porções mais internas
6. Abrir a placa de petri contendo papel de filtro já previamente umedecido
7. Flambar uma pinça, segurando com a outra mão, esperar esfriar e retirar pedaços das 
porções mais internas das fezes 
8. Depositar os pedaços retirados sobre o papel de filtro já previamente umedecido na 
placa de petri
9. Tampar a placa de petri