Baixe o app para aproveitar ainda mais
Prévia do material em texto
������ ������ ���� �� ���� ��������� � �������� ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � ������ ������ ���� �� ���� ��������� � ���� ��������� ������ � �� �� �! "�#�$�"�"#%�# &���'(����)* "�#�$�+��,$�# &-��(�����() ������� ����� � � ���� ���� ������ ������ ���� � ���������� � � �������� ����� ������ �� "�#�$�"�"���+ ��������� � �������� �� ������� ������ �� ������ � ������� ������ ������ ���� �� ���� ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � ������ ������ ���� �� ���� ��������� � ���� ��������� ������ � �� �� �! "�#�$�"�"#%�# &���'(����)* "�#�$�+��,$�# &-��(�����() � � ����� ����� ���� � � � � ����� . ������ ���(���(�� -/���� � �� 0/�1����� ���2 3 $3,,, 4����/�� ��� ��� � ���� ���� � � �� ���� ����� ��� ������ �������� ������ �� ��������� �� ��� � �� �� ��� �� ��� ���� ��� ���� ������� �� �� ��� � ������� �� ���� �� ������ �� ���� �� ���� �� � �� �������� � � � ������� ������ ��� ���� � ��� ��� �� ����� ����� � � �� �� ��������� �� �� �� ��� ������� �� � ��� ��� ���� ������� ��� ����� � ������� �������� ��� ����������� ����� � � ����� �� ��� �� ���� ���� �� � �� ��� ��� ���������� ���� ��� ��� ���� ��� ���������� � �� �������� �� � ����������� ����� � � ����� �� ��� �� � �� ��� ��� �� ���� �� ����������� ���������� �������� �� ������� ���� .�� ������ �������' &��(�/'��� ����� �5 ����������� �� ����� ����/����)2 � ���� �5 ���� ���6 �� �� �����'/(�' �� ��� 5�� 7 �� ������������� �(��5�� �� ��� ����� ���� 7 ��� ����� ����' �� ���������' ���� � �(���� ����/��� 8����/� 8������ ��� ������ 5�� ��� �/�������2 ���������' �� �� ���'� ��6� ��(2 /��' �� ���� ���6 ���� 8��� ��� ���(�5�(���� ��6�' �� �/(� ��� ��� �� �� (����'���' /������(��' �� ��82 ������' �� ��� 4�'���� ���/���( �5 ��� ��� ������' �� �(�'�5��� �����2 ���� ���� !"�� # $���� %� �� �� &��'� (������� ��� �� � �� �� �� ���� �� &��'� ���� �� ������ �� � )� % �* �� &��' # +�� !&� &�"��� �� � �� "�#�$�"�"#%�# ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � ������ ������ ���� �� ���� ��������� � ���� ��������� ������ � �� �� �! "�#�$�"�"#%�# &���'(����)* "�#�$�+��,$�# &-��(�����() � ������� �� � �� �� �� � ������� ��� ��� ��� ����� ���� �� ����� � ����� ���� ���� �� �� �� ���� ����� � �� � � ���� ����� � � ��� ������� � �� �� � ���� � ��� ������ � � �� �� ��� ��� ���� � ��� �� �� � � � ��� ����� �������� � ��� ���� � ��� � � �� ���� � ��� ������ ��� � � � �� ���� � ��! "��� � ��� �� � ���� � � !"����� � "� �� ���� �� ��� #$ %������� ��� &��� � �� ����� �� ����� &' �� � � �� �%� �� � � � �� � ����� ������ ������� � � � ����� "��� ������� �( �� ���� ��� ������ � ����� ��� �� ������� �( ���%)�*& � ����� �� �� � � �� ��� �� � �� ����� ����� �������� �� ��� �� �������� �� ����� �� �� ��� �� ����� )� ��� ����'��� ��� ��� +��� ���� � �� �� ��� ����� � ���� � � �� ����� � � ������ � � ��� # ������ � �������� �� � ������� � ���� ��� � ������ �� � ������ �������� ,����� -�� �������. # � /�'�� � ������ 0 �11� -����%2�3 2����� *�43 ��5/�( �%��!%�1���%� 63���� '��78 �%��!%�11�!%� 6&��� � ���7 �� ����� #����� ���� ���� � �� �� 6+�9+�7 � ��� )� ��� ���� � ��� � � 4� �� �4��� ��������� � ����� )�� ��� ���� ��������� � � ����� )�� ��� ���� ��������� ��� � �4���� $� � � �� �� � � �� ��� � � � � ����� )�� ��� ���� ��������� � �4���� $� � ��� ��� ��:����� �� ��� � � � � ����� )� ��� � � +�9+� ��:����� �� � �! ����� �� � ' ��:������� �! ��� +� � �� �� � �� �������� � ! ����� ��%+� � ! ����� ;�%+�9+� � � ����� <��� � � �'� �� � ���� � � ���� �� # ���� $����� ��� %��"����� # ����� ���� &������� �� '��" �� '��"�� "��"����� � ��� � � �= � �� � �� ��� � &������� �� � +��� �������� �� � )������ � � � ��� � 5���� �� ���� ��� � 2��� ���� �� 4�� �� ���� �� ! <��� � ��� � � ��! > ��� ������� � 3+- �� ���� ������ � � ��� '��" �� �� �������� � ������ ��� � ,��$������ ��� ��� � ,������ � � � ����� ��� �&" �� �)*�� � � ��� � ����� ��� � �&" �� �� ��� � ����� � ��� � ���� 6������� � � � ���� � ����7 �� � ��� � ����� �&" ��! � � ������ �)* � ���� ��� '��" (� ')' � ������������ ��� ����� "� ����� ��� � ��� ��� ��� � ������������ ���� ��� ��� � �= � �� � �� ��� ��� ����� �� � ��4 �� �� ���� ���� �� ��� +�� ���� *�� ��� �� 6�� �� ����7 � ����� 3 � ���� �� ���� �! ����� *������ ���� �� ��� *�� ��� �� � �� ��� ���� � � ����� ��� �����%���� ���� �� ����� �� �� � )������ � � �� ��� ���� � �� ����� �:������ �������� ��� ��� � �= � �� � �� � �� ������� 4� ��� ��� �� ��� �� �� �� ���� �� ����% �� ����� ��� ����� ��� �� ��� �� �� ��� ��� ��� ����� � &:����4�� � � �� �)* � ���� ��� ���� �� �� ��� ���� ! ��� &:����4�� � � ! ��� ������� � � �� �)* � ���� � �� ��� ���� ! ��� ������� � � � ������� $���� ���=�� �� ���� ��� �%� ������� � ��� ���� �� �)* � ��� ��� �� ��� ��� � � #�� ��� ���� � �� ����� ��� � ��� #�� �� ���� �� ����% �� ����� ��� ����� � ��� #�� ���%��� ��� ����� $� � � ������ � $�� ������ � '��" *� '������� � ��� ���� � � �� ���� � ������ 5������� 5��� � ������ ��� � �� � �� ��� � ������ ! � 3 � ������ 5������� 5��� � ������ ! � ���'�� � ������ � "�� �������� � ������ � � )�����'��� ��� ������ ���� � '��" +� '������� � ���� ��� ����� �������� � � �������� � ��� *��� � ����� $� � '���4�� ���� � ��� �������� �� ������ ���� !� � �� �� �� � � ��� 4��=�� ��� ������ ��� !� ��� �� �� �� �� �� �� � � !� ��� �� �� ����� ! ��� �� ��� ��� ! ��� 5��=�� ��� � ���� � � ! � &'���� � � �%� �� ���� ! ��� ,� ������ ��� ! ��� �� �� �� ��� �� ����� !! ��� / ������� � � ! ��� �� ��� +� ����4�� � � ! ��� �� ������ ���� !� ��� �'������ ���� !� ��! <��� � ��� � � !� ��> ���� ��� ��� � � !� ��? �� ���=��� !� '��" ,� ��� �������� ���������� ��� ������ "� ����� !� � )�������� � ���� ���� � � ��� �4�� $� � ����� ��4������ � � ,�� �� � � ��� �� � �= ����� �� ���� ��� ������� 6�+"7 � � )�������� ����� � �� � � ���� ��4�� �� ���� �������� ���� '��" -� '" � �!���� � '��" .� '��"�� ���������� � '��" /� ��0��� ������� � �� '��" �1� $��� ����� ��������� ��� � ��������� � � ���"�� � '��" ��� #������� ������������ � � ��� "�"���� ������ � '��" ��� $' �������� �� '��" �(� #��� ���� � � ��� $�2)�0� � $' � '��" �*� ���"����� � � � ���� ��� ������ �� '��" �+� �$� ���� ��� ������ ������������ �� � �� � �� �� ���� � � #$ %������� ��� &��� � �� ����� � ��� �� ���� ��� ������ �� �)* � ���� � ��� ��� )�*& � ��� � ������ �� ��� ��*& �� �������� ��4������ �� ��� ,���� � �� �%� ���� � �� ����� �� � +��� ���� � �� �� �� &��������� � ����! �� �������� ��� ������ � �� � ����� �� � � ��� �� � �� � � �� ��� ���� � �� � ���� ����� � ��� ���� ��� ������ �� �� �� ��� ���������� ������ � � �� � ��� �� �� ��� ����� ���� �� � ��� ���� ����� ���� �� ��� ��� �� ��� ���� ��� ���� � �� ��� ���� �� �� ������� ��� �� �� �� ��� �������� ��� �� � �� ��� �� ��� � � ���� � �� �� ����� �� � �� ���� �� ��� �� ��� � ��� ��� ��� ��� �� �� � ��� � �� � ��� ���� ���� � ������� ��� ���� � �� ������ � ���� �� ��� �� ����� ��� ���� ����� � � ������ ���� �� �������� � �� �� ��� ��������� � �� �� � ������� ���� �� ���� �� ��� ���� �� ����� ���� �� ��� � � ������ ����� ���� ��� ��� � �� � ������ ������ � ��� � ��� ���� ��� ���� � �� �� �� �� ��� ��� ����� ���� �� �� ��� ���� �� ��� ���� �� ��� ���� �� � �� �� ����� ��� ������������ ��� �� ��� ����� ��� �� ����� �� �� ���� � � ����� �� ����� ��� ���� �� ��� ��� ����� ��� � � ���� �� � ������ ������ �� !��� � � ��� � ��� ��� ������� �� ��� ���� � �� ��� ��� ��� ���� �� ����� �������� ��� � �� ������ ����� �� ��� �� � �� ��� ���������� �� �� ��� ����� ���� �� � ��� ���� ����� ���� �� ��� ����� ���� �� � � �� �� ��� ���� ���������� ������ �� ���� �� � � ������ � �� �� ��� �� �� ���� � � �� ��� ������� ��� "�� ������� �� ��� ���� ������� �� �� ����� �� ��� ����� ���� �� � ��� ���� ������ � � �� �� ��� ����� � � ��� ��� ���� �� #���� ������� ��� ��� ����� �� ���� ����� ���� �� �� ����� ��������� ��� ��� �� ��� ��� �� ���������� � ��� � ���� � ��� �� � �� �� � �������� ��� � ��� ��� ���� �� �� ��� ���� � � � �� ��� � ��� �� ������� �� �� ��� ���� ��� � $�� � � � ����� �� ��� �� ��� ������� �� ��� %&���� ���� �� � � � ��� ��' ���� ����� ��� ������� ���� ���� � ��� �� ������ � � ������ �� �� �� �� �� �� � � ��� ���� ��� �� ��� ���� �� � �� ���� �� ��� �� ��� � � ����� �� ���� ��� �� ���� ��� ������ �� �� � � ���� ��� �� ������ ������ ������ �� � ����� �� � � �� ��� �� �� ����� ��� ��� ��� ������� (� �� � ���� ���� ���������� ��� �� ������ �� �� �� ��� ������ � �� ��� %� �� ���' ��������� ��� ��� � ������ ���� �� ������� ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � )� �� *���� �� � � ��� +� �� ,��� ��� - �..� * ����/,! /� ��� 0��! (#1+�2 3�4�5�3.346�4 7!� ��� � 89 3�4�5�:..;5�4 7&���� �� �8 ������� � ����� ��� ���� ������ � ����� �� � � ��� ���� �� ��� � �� �� ��������� ��� ��� ���� ��� � ���� ���� ������� ��� ����� � ���� ����� ��� ������ ��� �� ��� ���� ��� ������ � �� ������ ������ ���� ��� � ��� ��� ���� �� ������� ���� �� ��� �������� ��� �� � �� ���� �� ������ �� � ����� ��� "� ���� ��� ���� �� ���� ����� ��� ��� � ��� ��� ����� � �� �� � �� �� ��� ����� � � ��� ���� � � � ����� ���� �� � ��� "�� ������ �� ����� ���� � ����� �� � � �� �� � � �� ��� ���� � ����� �� � � ���� �� ��������� ����� ������� � �� �� ����� � � ���� �� � ��� "� ��� ����� ��� �� ��������� � �� � � ��� � � � ����� �� �� ����� ��� �������� �� ��� ���� ���� �� �� ������� � � � ��� ������� ��� ���� ��� �� � ������ �� � ����� �� �� *(<&=�/,!2 ����2>>���3� �� �� �� ������ �������>??????� �� �� � �� ����� � ��� ������� ����� �� � ��� �� ���� )� �� *���� �� � ��� +� �� @���� � �..� ��� ��� @�� "�������� ��� 1� ������� �� � ��� 1��� �� @���� 1A����� B� � < � ���� ��� C������ B�� ��� ��������� #������ )������� 0A��� ������� ��� � �� ��������� � � � ������� � ��� ������ ��� �� ��� � �� �� � ����� ���� � �� ��� ���� ���� ��� ����� � ������ � �� ���� �� � ��� ���� � ����� ������� � �� ��� �� ������� ��� �������� �� � ����� �� ��� � ��� ��� ��� ��������� �� ����� � � � ���� ��� �� � ��������� ��� �� � � ��� ���� �������� � ���� �� ����� ���� � � � �� � ��� � � ���� ��������� �� �������� � �� �� ���� ������� �� ���� � � ���� �� � �� ������� � �� ������� ����� � �������������� ����� �� ���� ��� ���� � � ������ � ���� � � ��� ���� � � ���� � � � ���� �� � �� �� ������ �� ��� �� � � ���� � �� ����� � � � ����� � ��� � � �� ��� ���� � � � ��������� � ���� �� ��� �������� ���� ���������� ��� � � �� ������ ����� ���� ��� ��� ���� ���� � �������� �� �������� �� ����� � � � ����� ���� � ����� �� ��� �� ��� �� � �� ��� ����� � ����� � ��� ���� � ��� ���� �� ��������� �� �� ��� � � �������� � �� ����� ����� ���� ! ����� �� ��������� � �� ���� �� ��������� � �������� ������ ���� �������� � ��� ���� ���� � �������� � ����� ����� ����� � ��� ����� �� ��������� � � ������� � ����� � � �� ���� ������ ����� ��� ���� ������ ��� �������� � ��� � � � � ������� ��� �� ������ � �� � � �� ��� � ����� � �� � ����� ���� � � ������ � �� �� � ���� ��������� � "���� �� ��������� ����� � � ��� ��� � ��� � � �� � ��������� ��������� � � ��� ������ � ����� � �� � ������ � ������ ����� ��� � �������� ��� ��� � ���� ��� �� � ������� ����� #������� ��� ���� �� ��������� � ������ � ����� ������ ��� ��� � �� � ������ ���� ��� �� ��� ��� ���� ������ ���� ����� � � � ��� �� � ���� �� ����� ��� � ������ �� �� ��� �� � ��� ��� ���� ������ � ����� ������ ������ � ��� ����� ����� $�% ����� � ������ �� ����������� ���� ���� ��� ������ � � ��������� � ���� ����� ��� ���� �� ��������� �� ��� ������� � ������ � ��� �� � ��� �� "�� � ���� $�% ��� ���� ���� � �� � ���� ������� �� � ���� �� ��� � ���� �� �� � �� ������� �� ��� ���� � �� � �� ���� ���� � ���������� ��� � � ����� $�% ��� � �� � �� ��� ���� �� ������� ��� � ��� ������ � ������� �� $�% ��� � ����� ������� � &���� �������� ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � '�� �� &� ��������� ��� (��� )�������� * $++$ &�����,)- ,����� .��- �/0( ! 1�2$3�1+124�2 5-�� �����67 1�2$3�8++93�2 5"������ ��6 �������� � �$�% ��� �� � ��������� ��� � ������ ���������� � ������ ��� �� �� ����� �� � �������� � � ����� � 5� ���� � �� ���� ��� 6 ������� � ��� ���� � ��� � ��� � � ���� ����� ���� � ������� ������� �� $�% ��� ��� ������ �������� ������� � �� ��� �� ������� )������� � � ��� � ����� � ���� � :� � ����� ��� ���; ��������� ����� ���� �� ������� ���� ����������� ����� $�% ��� ���� ����� ������ ��������� �� ��� ��� � � ���� � �� � �������� ����� �� -������ � ���� ��� � � �� ��� �� �� � � �� ������� �� �������� � � � � $� % ��� � ��� �� �������� ��� ���������� � ������ �� ������� �� � ������ ���� ��� ���� ����� � �� � ���� :���; � �� � �� ���� ��� ������� $�% ��� � ����� � ��� �� � �� ������ ��� ���� ��� � � �� ��� ���� ���� �� � ��������� ���� (������ :����� ; �� �� �� ���� � � ��� ����� ��� ���� � ����� ��������� "������� ���� � �� ����������� ��� � �� ����� �������� ���������� ������ �� ��� �� � � ��� ���� ���� ��� �������� � �� � ����� ����� ���� � ������ �������� � � ���� ���� � �� ���� �� ��� � ��� �� �� ���� �� �� �� �� ���� ��� ��� ������� ����� ���� �� �� ���� ��������� ����� ����� ���� ������ �� � ������ � � ��������� � ����� ��� ���� � � �� � �� ����������� ������������ ��� ��� � � ��� �� � ��� ���� � # �������� �� �������� �� ��� ���� � ��� �� �� � ����� ��� ����� ������ � � ��� $�% ��� � �� ����������� ���� ��� � ������� � �� � ���� �� �� ��� �� � ���� ������� � � �� ���� �������� ���� ��� �� � � ���� ������ � ��� ��������� � ���� �� ��� �� ����� ��� ��� � ������� $�% ��� � ��� ����� � �������� �� ��� ��� ������ � � ����� ���� �� ����� � ��� �� ���� � �������� � ��� � ������ ��� � ����� �� ����� ����� ����� � �� ���� ����� ����� � $�% ��� � �� ������������ � �� �� ����������� � ��� ��� ���� ��� ���� ���� ���� � �������� �� �������� �� ��� ����� � � �� ��� ���� �� � � � �� �� ������� ������ � ���� ����� � ���� ��� ��� � � ��� ����������� # ��� ���� � �� �� ��� ������ �� ��� ��� ������� � �� ��� ���� �� �������� �� ���� ��� ���� ����� �� /�� -� � � <%� ��% %������� � �� �� ������ # 2$+ </'0� = ���� ��� �� <������ # #���� <� 4>9+? =/# ��� ���� ��� ������ � ��� � ����� ���� ��� ������ � ��� � ��� ������ � ��� � �� �� ���� ��� ������ � ��� � � �� ��� ������� ���� ��� ��� � ��� ���� ��� ���� �� ���� �� � ����� !��"�����# ��� #�� � �� �$% ��� � ��� � ������� � "�� � �$� ��� � �� �����#��� �& �!� �!���� �� �� �'���� ���"��� �����������(��������� � �� ��� � �� ��� � ������ �������� �� � � )� )�����������! �������� �� �*��� ��� � � ��� �� ������ ������ � � ! ���� � � �$� �� � ��� � !��� ��� � + �� ����� ��!�� � � �� ��� �, �� #��� � -./ �� ���� ����� ��� ���� #��������� � ��0 � ������� ��� � � # ��� � ��$� 1�2���� ��(���� � 3� � ������# � � �� � ��� � ���� � !� �� ��� !��� ��� �������� � ��� ��+ �� �4�$� 1�21��� ��� � � ��3� ��������� � ��� � ��� ���# ���� �� �� ����� ������ � ��� � �%� � �� � � ������ � �� � �� � � �� � ���������� �0 ���! (�������� �05 � ������ � ������� �� ��� ���,�� � ���6 � ������ ���� ������� ��������� � �� !� � �� �� ���� � �� ����!��� ������� ��� � ����� � ��� ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � 7� ��� 5������� ��� � � )�+�� � �� ��� 8 �99� 5 ����:�4 :����� ��!4 %��)�; 1�<�=�191<>�< 24���� +��3? 1�<�=�'99�=�< 2������ � �3 ���������� �� � �� ��� � ��� ��0 � �" !��"�� (������� ��7� � ##����� �� � � ��� ��+���� ������� � � ��� � ����� ��� �� ���� � ������� � ����� ���� ������� �� ���� ��� ��� ������ � ��� � ��<��4� ��<�� ���� (�!��" � �� � � �� � �� �� �� �� �0 � ������ # ���� �� �0�� � ���������# ( �� �)� ��� (�� ! ����� � �� � � � �� �� ��� ��� � �� ������� � � ��� � �� ���� � � � ��� �������� � :@�� ���� ��������� �� ����������� � �� � ��% ������ � ��� � "�� � ��� �( ������ ��A����� ��� �� ��� �� � ! �!������� ��%�7 �� �� �����# �� B % � ���� �� � ��� ����� �*$ � � ��! ��� �� ���� �� �0$ � � ����#����� �� ���� �� � 4 �� 4��� ������ �>����� (�� ���� � �� � 4�)� 4�� �� �� � 4�$�� )������� (������ ���" ���)������������� ���# � � �� � 405 4 �� 0 ������� 5� ��� 4$*� 4 �� $��# ������ * A� � ��� ��� ��� �� % ������� ��� �� %��� %� � � � ��� �## � �� ���� %� %� ������ � # ��� �� %�� %���� �� !�� � � %$� %�� ! � "�� 4 ���� ���� %�$ %� ���� � ��� � ,� C � !���� ,�� C � ���� �� *� * A� � ��� ��� ��� �� *05 * � 0 ������� 5� ��� *�� * � � # ������ � *5� *�! ��� �� � �,#� � ������ 0 ���� �� 0 �� �� ��� 0�*�% 0��� ( ��� ���� ����� ��� � � � � "�� � � � 0 ���� � �@* 0 ������� ���� �� � ��� ��� ���������� �� � �� ��� � ��� �� 7���� +� ������ � ��� � � ! � �� �7)� ��������� 7)� 0� 0��� � ���� ����� 0�� ������ ���� � ���� ����� ����� � � ������� ���� � 0�@0� ������ ���� � ���� ����� 0� ����� +� � ������� ���� ��� ����@������ ��� 2(��( � � � ���� � ������3 ) � ��� ) �� � � ��������� )�$4�� ) � �A� � !� �� 4 ���� ��� ������ � ��� � )4� ������ (� ���� � � �� )7 ) � ��������� �6�6 � � ��� ���� �� $ $ ��� � 5 $�� $ ��������� �� ��� $��� $ ��������� �� ��� ������ � ��� � $��%� $ ��������� �� ��� � ������ � # ��� �� $�� $� � ���� !�##���� ��� �� $�� $ ���������� ���� � % %� ������ � �� C +���� � �� � �� � � ������ $0 $� � �� ���� # ���� � �� $0� $���������������# ��� #�� � �� $$� $ �� � � � ��� �� � ���� �� � �� � 2������� # ���� ��������3 $�� $ �� � ���� ����� $�0 $ ����������� ��� � � # ��� � $:� $ ��+ ������ � �� $:� $ ��+ ��� ���� � #�� � �� D�� A����� �� � ��� #�#� ��� � 0 ������� ��� �� 7# +���� 7���� +� � ������ # � ���� � 7� 7���� +� ������ � ��� � � ! � �� 7)� 7 ! ����� � �� � 7$ 7�+����� $���� � � ��+ ��� �� �� � ���� 7��$� 7����� �� %% �� � 2!��� �������� � �� � ���# ����3 � ��� �� ��� � � �� � ����� ���#��� �@) � ����@� �� ��� � � ��� ������� �� � �������� � -./ � � ��� � �� � �� � ��� �� � !�##���� ��� �� ��� �� ��� � ���� � �� � �� ���������� �� � �� ��� � ��� ��0�� )�)�)��)���������������������� �� �� �4$$ �� �2���� (� � ��3 � � � �� � � �� # � ��� �� � �� )��� �2���� (�������3������� ���� �� �� � �� �2���� (�������3��� � ������ & : �� : : ���� � * + � ��� # � ��� � � �@� +@+ : ���� �� + ���� 5 5��� �@+ 5� ��� �� + ���� 2���� � �������� �3 ��� ���� ���� ������ � � ������ ��� ������ ��� ��� ������������� ���� ���� � ��� ������ ���� ���� �������� �������� ����� ��� ��� �� ��� ������������ ��� ���� ������ ��� ���� ����� ��� ����� ���� ��� �������� �� ��� ������� ���������� �� ��������������� !������� ��� ������ �� ������� � "# �� "## �$� %����� ����� �& ��������� ��� ���� �� ��� ���� ������ ����� �����$� ��������� ���$�� <2093.8> average molecular weight '�� ���� � � �������� � � $���� ��������� ������ ���������� ����$ ��� �����$� ������ ���$��� �� ���� �������� �� �����$� ���� �� �������� �� %�( )�'*+�%, ���� � ��� �� ��� ������������ �������� -��� ������������� ��������� ���$��.� /�� $����� ����������� '�� ������� �� ����� ��� ��� $����� -�������� ��� �������� �����. �� ����������� ������$ ��� ��� � ����� ��� ����� �� ��� ���� ������ /��� ��� '�� ���� ������� ��� �� � ���� ��������� � ���� �������� �� ������� �������0�� �� ���� ���� ��� ��� �� ��������� � "##1� ��������� � �������� ���� �� ��� ����������� � �� ������� ����� ����������� � ������� ����� ���� ������ ��� ����$��� �� ������� �� ��� �� '�� ������� �� �� ������� ��� ���� ����� ���� � �� %, ����������� ������ �� � �� ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � ����� 2����������� '�� ����� ������$�� 3 �##� 2�����4�& 4����$ 5��& ),/��6 7�8�9�7#78:�8 -&��������.; 7�8�9�<##"9�8 -=���������. �������� �� ��� ���� ������ � � ���������� ���� ��� '�� ���������� ���� ��� �� ������� �� ��� ���$���� ������ � ���� � ��� ��� ��� ��� � ��������� ������� ������������ -�) . � ������� ������� �� ��� � ��������� ��� ��������� ���� �� ��������� ��������� ������� ��� ��$������ �� ���������� ���� �� ����� $�� ������ ��� ���� ��������� ����� ����� - �. ��������$ �� ��� $��������� � ��� ,)� ��� ��� � ��� ���� ����� �� "�<<#" > "#?�9 $ �� �� ���$�� ������ ������� &������ �� �� ����� � ������� ���� �� ������� ������� ��$���� ��� -��� ������� �� ��$���� ���. �� ��� ��������$ ��� �) ��� ����� �� � ��������� ��� �����$ � ������� ��� %,@%, ��������� �$������ ������$� � ���A��� ������� �� ����������� ��0����� ��������$ ������� ��� ������������� ���� ������� ������ ,����� ����������� ������ �� %�( )�'*+ %, ���������� �� ��������� ������� ��$���� ��� ��� ���$�� ��������� =����������� ���������� -=,). �� ���������� ������B��� ����� ������� ��� ����� ���� � ���� ��� ��������� �������� ��� ������� �� ��������� '�� ���� ����� �� ���� ������� ��� ������� ������� �������� ����$��� �������� ������� ���� ��������� ������� � ������ ���� ������������ -%,@ %,.� )� �� ������� ������� ���� &!(� �� ��������� ����� ������������ =���������������� )� �� �������� ����� ���� ����$�� �� ��� $�� ������ �� �� � $���� ��� ��� ��� ��������� �� ��� ��������� � �������� ��$�� �� ���� ��� ����� ���� ������ ��$����� '��� ������� �� � ������������ �� ��� ������� ��� � &7* � ���� ������� ��� ������� �� ��$����� �� *&? ���� ������� ��� ����� �� �������� ����$��� )� $���� ���� � ��� �� �������� �� � ����� ���� =��������� ���������� '�� ������� �������� ����� � ��$��� ������$������������� �������� ���� ��$� �����$���� ������B��� �� � �� ��������������� ��� %�( ) ���� ������������� =������� ����������� � ����������� �� ��� ����� ���� � ���� ����������� �������� '�� ��������� ����������� ��������� - ���. ��� ���� ������� �� � �������� ������� +��$���� ��� -������� �� ���$���� ���. ,�� ������� ���� ����� �������� �� ��� ���� ������ � � +��$��������� � �������� ������� � ������������ � ��������� ���� ��$����� �� � ���� ������������� '�� ��������� �������� � ��$����� �� ���B�� �� ��� �������� �� ���� +��$��������� ���� ��� �� ���� �� ��B����� �������� ��� ����������� ������� ���� �� ������� ������ �������� +��� ���$�� ������� �� ������ ����������� ������ �����������$ � ������� �� ��� ������ �� ��������� ������ '�� ��������� ���$�� � ����� ��� �� ���������� ���������� ���� %�( ) ��� =,) %,� +��������� ���������� '��� �������� �� ���� �������� ���� ������������� ���� �������� ��� ��B����� �� ����� ����� ���� �� �������� �������� ��� %�( ) %,� � ������� ������ � ���� ����� �� �������� ��� ��� ��$��� ������$������ ���� ���� ������ ��� �������� ���� ���� ������B��� ���� �� ��� � ��� ������� ��������� ��� ����������������� ����������� )�������0�� �& $�������� !������������� $���� ����� ������� �� �������� �& $�������� ������� �� ���������� ������������ ����� ����� ������ ��� ����� �� ����$ $������ /������ �� ��������0�� �& $������� �� ���������� ����������� ������ �& ��������� ��� �� ��������� ����� ����� ��������� ����������� )��$�� ��$������ '�� �������� ������� �� ��� $�� �� ������� ����$ ��0���� � ���� ����� ������ ����$ ��� �������� �������� ��� ������ ����� ��� ��������� ��� ��� $�� �� �����B���� ��������� )������� ����������� ����������� ����� ���� ������ �� ���� �������� ��� ���� �� ��������� ���� ��������� 5������ ���� �������� ���� �� �������� ������������ )�� ��������� � �������� ���� ����� ��� ��� �������� ���� ���� �� ���������� ��$��� )�� $��� '�������� �� ���������� �� ������ ���� ������� ������� ���� �����$� �� ����� ���$�� � ��� ������ -����.� �� �� ����� �������� ���� ��� � ��� ��� � ��� ����� ���� $�� � ��� ���� ������������� �������� ���� �� ����������� ����� -!, . �������� �� ��� ��������� � � ��������� ���� )�� ������ �$��� � ��� ���� ������������ ����� $�� ����� ���� ��� ��������� )�� ������������ � ������� � ��� �� ��� ������� � ��� ���� �������� �� ��� ������ ��$��� ���� �������� ������� ��� ��������� )��������� '�� ������� � ���������$ � ������ �������� ���� �� ��� �� � ���� ������������� ��� �������� �� ��� ���� ������ � � )���������� ����� -�). '�� �& ����� ����� ��� ��� ����$� � �� ���������� ��������� �� 0���� /������ ��� �C ������ � �� ����$ $����� ��� ���������������������� ���� �� ����� ���� �� ��� �)� '�� �) � � ������� ���� ��� �� ��������� )������ ����� � ��� ���� ������� �����$ �� ����� ���� ������� ��� �� �� ������� �� ��� ������ � ���� ������ )������ ��������� '�� �������� ������ �� ������ � ������� ������ ��������� (��������� ��� ��� ������ ������� ��� �������� ������ �� ��� ����$����� ���������� �� ������� ��� ������ ��� ��� �� ��� ���������� ������� (����� ������ � ��$�� ���� �������� ,������� '*+ ��������� ���������$ � � ��$�� ���� ���� �� ��� ������ �� ��� ��� ��� � �������� �� ��� ������ %��� �������� '�� ������� �� ����$� ��� ������ ���� � �� ���� '��� �� ��������� ��������� �� �� ����� ������ %��� �������� ,����� ���� � ��� ���� ������������� ���������$ ��� ���� ���� �� ��� ��� ������ ��������$ �� ����� ��� ������ =������� � ���� ��������� ������� ��� ����� B���������� ������ � ��$�� ��� ��$����� ������� %��� ���$� '�� ���� � �������� �� �� �������� �� �� ����������� *� ��� ���������� � ��� �������� %��� ������������ �� ���������� ���� �������� ��� ���� �������$� ����� -���. � ����0�� ����� �� ���������� ��������� ����� �����6 �� ��� ������� � ���� ��������� ��� �� ��� ��������� %��� ������������ -%,. � ������B�� �� ��������$ ��� ��������� ���$�� � ��������� ����� ���� ��� ������ � � ����$�� ������ ��� �� �� �������� �� ��$����� ����� %��� �������� � ���� � ��� ��������� -������. �$����� �������� ����$� ����� -������.� %�����������$� ����� -���. � B������� ����� �� �������$ ��� ���� � �� ��� -�� � �����. �� ��� ������ � ����$�� ������� �� ��� ���� %����� ��������� �� ��� ���������� � ������ ��������� �� %�( )� � ������ ��$���� �������� ����� ������� ��$�� �� ��� �������$�� � ��� ������ %�������������� ����� ����������@)��������� -%�( ). )��������� ������B��� �������� ���� �� ��� ���������� � �����$���� ���������� ,����� �� ������ ������� ���� ��� ������� ��������� � ��� ������ ��� ���������� ���� ��� ��$�� ��� � ������ %��������� ��� �� ��� ���� ���������� ���� ��$���� ���� ���@�� ������� �������� �����$ ��� �����$� �����$� ��� ���� ������������� �� �������� �� ��� ���� ������ � � %����������� ��������� ���$�� 20 92 .6 monoisotopic molecular weight '�� ���� � � �������� ���������$ ���� ��� ���� �������� ��������� ���������� ���� ����� ������ ���$���� 2��� ������� �� ������� ��������� ��� ����� �������� ��� �� ��� "�� ��� � ���� ��� ���� ��� �� ��� ������� �������� ��������� %������������$�� ��� )�� ���������$ ���� ���� � ���$�� ����$�� ����������� ���� � =,) �������0����� ��� ��� � ��� �������� ���� ��� ���$��� �������� �� ��� ��$���� ��� ���$�� �� ���� �� ��� ��������� ������� ���� ���� � ���� � %,@%, ����������� D�� �� �� ��� ������� ���� � ���������� ���������� �� � ������� �������� ���������� ����� ���� '�� ����� ���� ������� �� ��� ��� � � ����������� ����� ���������$ ��� ��� ����� $����� !����� ��� -��������� ���. � ��� �� ��� ��� � �� ��� ���� ���� �� �������� �� ��$��������� �� � ������� ��� %,@%, �� !, ����� ����� %�������� ���� -%�. '�� �������� ��������� ���� �� �������������� )� �������� ��� �� ����������� ��� ��������� � - ��� ���. �� ����� !����������� �� ��������������� ��� ���� E%�������� ���$��F �� ��B������ ����� *������ ������ -*� �. '�� ����*� � �� ��� ������� ������� �� ������ ���� �� �����$� ��� ������������ ��� �� �� ���� �� ������6 "*� � �� ��� ������ � ���������� ����� ��� �� ���������� � " ���� ��������� ��� �������� �� " �( �� � ������� ���� � ���� ���� � " ��� !����������� ��$������� ���$ '�����B�� �� ��������$ ������� ��������� �� ������� ) � ,��A��� ������� �� ������� ��� ��� ��������� ����� ��� ������� ������ ��� ���� �� � �������� ������� !�� ���� '�� ���� ������� �� ��� ��� ��� ��� ���� ����� ��� �� ���������� �� ����$�����$ ��� ���������� ��� ��� ��� ����� �� ��� ��� ���� !�� ���$�� '�� �������� ������� ��� ��� ������� ��� ��� ��������� !�� ���������� '�� ������ �� ����� ��� ��� � � ��� ���������� ������� �� ��� ���������� ������� ���� +2&%� !�� ����� '�� ����� � � ��� �� � $���� ���$��� ��� �������� �� ��� ���� ������ � � !�������� �� ���� ������ -!/,.6 ":# ���@( ����� ��9 ����@( C��� <�8 ����@( ���&!*:� "�8 ����@( C&�!*:� �& 9�:� !���������� ����� -!, . � ������B�� ���������$ ��$��������� � � ��������� ��� ���� ������ �� ��� ���� ���� ��� ��$��� � ��� '*+ �� ��� ��� �� �������� !����������������� ���� ������� -!'%. %��� �������� � �������� �������$ � ��� �����$; ���� ��� �������� ������� ��������������� ��� $������������� !'% �������� �� �� ����$��� ���� � ����������� !�������� ��� -������ ���. )�� �������� �� �����$� ��$��������� ������ ��� ���� ������������ �� � ������� ��� %,@%, �� !, ��������� !�������� ��� ���� � ���� � %,@%, ����������� D�� �� �� ��� ������� ���� � ���������� ���������� �� � ������� �������� !���������� �� ��������������� !������� ��� ������ �� ��� ����� �$ ��������%����� ������ �& ��������� ��� ���� �� ��� ���� ���������� !������ ��� -��� ���$���� ���. �� ��� ��������$ ��� �) ��� ����� �� � ��������� ��� �����$ � ������� ��� %,@%, ��������� !������ ��� ���� '�� ��������� %,@%, ����������� )������� ��� ������ ���� � � ��������� ��� �� �����$� ��$��������� ������ ��� %,� !������ ����������0����� '�� ������ ������� � ���������� ������� � � �������� )������� ����� ���� ��B������ ��������� ���$��� ����������������� ���������� ������������������ ����� �������� ��� �����$�� �������� � � ���������� �������� !������ ��B������$ '�� ������������� � ��� ����� � ����� ����� �� � ���A��� ������� �� �������� !������� '�� �������� ��� ��� � �������� ��������� �� � $���� ������� ���� �� �����$���� ������ �� � $���� ����� !��������� ,��������� �������� � ��� ������� ���������� � ����� ��� ��� �������� �������� !����� ���� �������� )������� ������ � ��$��� ��� ��������� ���������� ��� B��������� ��� ������ �� ������ ���� �������� �� ���� ������ ��� � ���$�� ����� � ����� G����� ������� )� ���� ������ ��� ���� EB�����������F �� ����� ����� �� ���������� )� $�� ��������������� ���� �������� B����� ������� �� ��������� ��� ��� ��A������ E��������F �� ������� �� ���� ������ �� ���� ���A���� � ������� )������� ���������� � � ���� ������������ �� �����$ ��� �� �� ��� ������� ����������� �� ��� ������������ � ������ ����$�� ���� � ��� ���� ���� ���������� �� ��� ������� ���� �������� �� ��� ���� ������ � � ���������� '�� ������� ���� �� E�������������F� /������ ���� ���� �� � ���$���������� ��� �� ���� ���� ����� �� ��� ���������� ����������� � ��� ���� ��������� ���� �������� ��� ��������� ���� E�����������F �� $�������� ����� ��������� 10 % valley 10 % m∆ � ��� �� ��� ���������� � ��� ���� ����� ����������� H �@��� +�� � ���$�� ��� ���� �� � ���$�� ����� $�� ���� �� ���� � �� � ���� ��������� ��� ���� ������� ����� ��������� �� �@� ����� �� �� ��� ����� � ��� ��� �� � ���$�� ���� �� � ����� ��� ���� ���� � ��� ������� ��� ���$�� - �� �������� ��� ����� �� ��� ������� ���$�� ? +2&%.� � ������ �� ������� �� �� ����$ ���������� �� "#1 ������� '�� ��� � � �B��� ���$�� �� � ���� �������� �� ���� ��� � ��� ���� ��� ��������� �� � ������ ���� �� ��� ������ ����� �� A��� "#1 � ��� ���$�� � ������ ��� � �������$ ����� -����. 50 00 50 01 mass resolution '�� ��������� �� ������$���� ������� ���� �� ����$ ���$���� �� ������������$� ������ ,����� ����������� � ������� ���$� �� ������� � ������� ������� ����������� , , ��������������� !������� ��� ��������� �� � �������������� $�� �� ��$� ������� ����$�� �������������$��� ��������� ,��������� ��������� B��������� ���������� ��� ��� ���������� ����$�� � ��� �������� ��� ���������� '�� ��$������ ��������� � ��� ��������$ 0���� ��� ��� ���$�� ������ ���� ���$��� �� ��� ��$������ � ��� %� � ��� ������� ���� �������� ����� �������� �� ��� ���� ������ � � ,����� ���������������� ��� %����� � ������ ����������� ������� +����� � ���� ����� � ����� ������ �������� �� ����� �� ��� ������ ������ '��� � ������� ���������$ ��� ������� �� ������ �� ��� � ���� ������ '��� �� �� � �� ���� '�� ������� �� ������ �� ��� ��� ������ ����� �� �������� ���� ��� ���� ����� ��������� )� � ������ ����������� � ��� ����� ������� ������� ,�$������������ ����� -,@�. '�� ����� � ��� ��$��� ���$�� ��� ��� ����� ���$��� �� ���������� � ��� ����������� � �� ���������� �� ��������� ,��� ���������0����� %����� � ������ ����������� ������� &���� ���$� ������ ���� ����� ��� $����� '�� ������� �� ����� �� � ��������� ������ ��������� %������������ ��� ������ '�� ������ ������ �� ������� ��� � ������ � �������� �� ����� '�� ������ �� ���� ������� �� ��� ������ ������ ������� �� ��� ��� �������� ���� ��� ���� ������������� ��� �� ���� ���� ��� ����� ������� ������ ��� ����� '����� ���� ������������ -%,@%,. D��� �� ��������� ��������� ������ ��� ���� ����� ��������� '���� ����� � %,@%, ���������� ��� �� ��� ������ '��� ����� ������ � ������ ����������� ������� �������$ ��� ������ ���� ��� ��������� ������� � ���� ���� ����� � ������� � ������� � ��� ������� �� ���� ����� ���� ���� ������ ������������ ��� ��� �� ������ ���� �� ��� ������ �����$ ��� ������ ���� ��� ���� ������������� � ������� � ��� ����� ������� ������� '�������� ������� '�� ������ ����� ������ �� ����� ������� ��� �� ��� ������ �� %�( )� ������ �� ������� ����������� '������� ���������� -���� ��$ �������$ �� ������� ����������. )������� ���������� �� �������� �� � ����� ��� ���� ���$� �� �������$ � ���������� ����� ������� ��� ��� ������ ��� ������������� ���� ������ ������� ������� ����� '����� � ��$�� -'*+. �������� ,�������� ���� �� ���� �� ���� ������ ���� � ��$�� ����� '����$ '�� ������� � ���������$ ��� %�( ) ����������I� ����� ����� ��� ���$�� �������� �� ������ ��� ���� ���� ����� ����������� ��� ��$������������ ����� �� � ����� �� ���� � ����������� '�������������� ��������������� '���� ��� ���� ���� ��� ����������� �� ������� ��� �� ����� ��������������� ���������� ����������� ) ��� ������ ����� ���� �� ��������������� ����� �������� ���� ������$ ����� ���������$ ���������� ������� �� , , �������������� $�� ���������������� D��� ���������� �����$������ ������� ���� ��������� �� " ��� ����� ���� ��� ��� ����� � � �� � � ��� �� ����� �� �� ���� � �� � � �� �������� ��� � ����� ��� � ����� �� ���� ��� ���� ��� � � �!� "�� #��� � � �� �������$� %&� ������ �!� ���'���� �!� �!! ���'���� ��#���# � (� � ���# � (�� �) �������' ��������$����' �� *+���,�� �� �������' ��� ������� ��! �$���� � ����$ �!� ��� ������� �� ��-��� � ��� ����� ��� ��-'������ � ����� ��� �� ��������� � ����� ��� � .� �� ! �������� ���������� ��� ������ ��� ���� �� �� ������ ��� ��� ��� � � ����'����� ������������ �! ��� �� ���� � ��� ����������� ����� �� ������� ���$ ����'��� !� ����� �� �������� � ������� ����� � �(� �# ��$ $ �� �� �# ��$ ���� � ! �# ��$��$ $ �� !)� !� � ����� �� ����� � �� � �� � �� ���- $ �� ���-$���� (� ������������ ���� ����� !� ���-$���� ����������� ��( ���-��$� ���� �� $���� � ����� � ! ����� /0� �� � �� ����� �0 $�� � ��� (�� �)� (! ����� ���� ��� �(���� � �� � ��!� � � 1�� ������ � � �)� �������������� � ������'������ �� 1�� �)) ��� 2���� �� �� ' ���� �� ����� �� 1������ ��� ��� � � � ���� � ���� �������� ( �� ���� ��� � �-�$ � ���- ( ���� ���$ �������' () � ��� ������ ��� � �� � �� +"� �� �����' ���� ��� +"� �"*�% ��� ���� ��# � � � ����������� � ( ��� ��� !� !�� ��� ��� ��� !� !� ����� � � ��) ��������' � �������� ��� �� ������ ��2� ( ����� � ������'� � �(� � ���� ���� ���� ���� �'�� � � ������$� ��� $ �� �!! �����'��� �� ����� �� ���� � ��� ����� ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � 3 �� � 4 �� �� � �� 5�� /�# � +��'��$�� 6 �))� 4�� '�7+0 7 ���$ ���0 %�1/�8 (��� �()(���� 90�� ��# �:; (��� ��))� �� 9�� �������: ��� ����� �������� � �$ �� �( � �� .��#�� ��� � �! � �� <���� �!� �( � ������ �� � � ��������� ���� �� �������� � ����$ ���� �� � � ! �� ����� � ��� � �) �� ������� .�����' �� ����������������' �� �'������� ��� +%� ��� �� ����� -�� � � �� ����$� ����� ��� �� � � �!�� �!� ��������� �� �� ����������� 9+%�: ��� ������ �� +������� 1�������� 1�� �������$ �(( ����������� ����������� �( ���� �������$ �� ����� ��( ���� ���������� ���� � � ��� ����#��' �� �������� ������ !) ��������������� - ����� � � ��� ! ���������� �������� �� ���# ������� ��� �� � �� ����� �(� ������$ ����� �' � +���������� �������$ ������ �� � ��� �������$ ) ��# � ���� � ��# � ���� ( ���������- � �! ��� �����# � �� ���'���'���� $ �� �� ��'������������� �� � (�� ( ��� ��� ��$ ( ��)� �(� � � � � �!� ���� ��� � ����� �� ���# �� � � �� ����� ��) �'���� ' � � �'���$ � ����� �) ���'�������' ��2' ��������� ��� ��(� ��(� ��! +'�' ��! ��� ����$ � �'�� ��� � � ������ � ��� ���$ � !� ������ � ������$= �(� ��#� � .� ����$ ���� �� ��� � #���� �� ���� > � �� �' ������ ��� ��' 2�������� �(� �������$ ��� ������ �� �� ���� �� �� ���� � � ��#��������� �(( ������$ �) � �$ ��� ��� ><��� ������ � ���'��� � ����� �) ��� � �� $ � ��� � �������� ��� � ��� � �� ���� !�� ��� ��� � ������' ��� �� ����� � ! �$ ����� ��� ���$ � ! ���� ��' ��2'� �>��� ��� ��(� ��(� � ) ������������ ���� � � ������ � �� �������� � ��������� �! �������� ���� � �/"� � ����� �� �������� �) ���� �������$ (� �(� ������$ #��# � ��� � �$ �� �( � �= ���� ��� � �� ��) � ��� � .� ����$ �) ��5" �( � ����� ��� ������ %�� �� ��� $ �� � ����� �� � () �� � ��� �$�� ����� � ���� �� �� � ���� � ������� �! � ���� � ������� �� ��� (�� � � �������� ��� ��� ������ !� ������$ � �������' � � ��������' ���������� ��� .����������� ��� �� ��� ���� ��� ���� � ! ��% ��( ���������� �� �% �� ������� ����� � �������$ �(� ��'� �$�'��� �� #�������� ��� $ �� 2����$ ��� �' ��$ �� �(! 2�� �� � .� �� ��$ 9��5: ��� 2�� ����� ���� ����� �� 2� ���� ����������� � � 2�������� ��� � ���� ���� ������ � �� ��� ���� ����� ! �������� ���� � ��# � �! ������������� ��� $ �� � ������������ $ � ������ (� ���� ���$� ����� !� ��2��$ �������� �� ����� ��������� )� �� ����� �� �� � ���$��$ !) ��� ����$ ��! �������$ � �������$ �!� �� �� � ��� �)� �� ��� ���� ������$ � ����� � ��������� ��� �'������� 9�5�%+3: ��� ���$� ������� ��� ������� �� �� ���< � �������� ��� �� �5�%+3 �� ��! � $ � ���� �� ��� �)( $ � ����������� �! $ � ��� � ! $ � ���$� � $ � ��> � ��� (� ����-� �� � $ ������ � $���� $ � �( $����� ��� �' �� �)� $�'� ��� ��� $�'��� � � $�'������ ��� ��� $�'���'��� ���� ��� �� $�'���'������ ��! $�� � �� ���� �(� (� $�� � �� $ �� ��� ((� ��� � � �) $�� � �� ��- � � $��� ��$� ����� 2�������� � � $���� ����� ��� $���� �� ��� � 0 � �����0��� ������ .������ (� ��$� � �$' +%� �� ��$� ��� ����� < �$�� ���� ��� ��� ( � �) ��$�������$���� �� ! � ��( 0�4 ���� ��� � �� � �������$���� �(� ����$ � ��� �)� $ � �) ���'���'���� $ �� �! ����>����� ��� �-��$ �) ��� +������� 1�� �������� �� � �(� 0&*+ �� �'��� ����'� �� 9.�� ����� ��� ��� ���$��: ��( �' ���'��� �� �' �������� �� ���� ��� � � � � ���$ ����'��� �� ����' ������� !� ���$ ��������$ ��� �>�� >��� �������$� %&� ����� �!� ��� �>�� >��� �( ��������� (� ��������> �0 $�� � ��� (�� (� ���$ � �$ ����� �)���)�� ��� ������� -�� ��� � �$' ��� � ��) ��� ����' ��� ���� � � � �� !� �� ��� ���� � ��� 2����$ � (� ��� � �������� �� ��� ����� ��� ���������� ��� %&� ���� � � ����� �(� �) ����'���� � � � � ��� � ����� �������$ �(� () � ����� � �� ����� � �������� � ������ ��+ �)!� �(� �(+ �)! %����� ��� �������' ��$� 9%+"5: ��) ������ � �)! �������� ��� � �(!� �� ?��� � �� �� � - ����� ��� �( � �)� ������������� ��� ��'���� � ��� � ��� -�� ��� � �$' ����������� ��! � ���������' ����� ! ���������' <��-���< �'�� � ��� !)� ! %�� �� ��� &"�� � ���$ $ �� ��� � ) ��� �� ����� � !) �� ����� ��� � ������ ����� ��� ����� �� *+���,�� ���� �� � � � ��� �� ���$ ��� �� 5�� ����'� � ��! ���� �� ��� ��$ �������' (� ��< ���� ����� ���� ��� �) ��< � �$' +%� �� ��< ����� �� �� $���� �)� ��< ��� ����� < �$�� ���� ��� �)� �'��� ��! �'��� ���� � ��� ��! �"*�% ��( �"*�% ������ � ��� ���- � ���� ��� ���� �������' �)!� ��!����� �(�� �(! ���� �� ����� � � ��� ������������' �(( �������$ �(( ���� �� ����� ��'� &������� �)! �������$� ����� $ � !�� ��� ������ � ��( �����2 ��( �����2 ������ ��� � �������� ���������� 9�"*�%: �������� ������( � ���� � ��� �� �% �� � ����� ���� ��� �( ����� �� � ��'� �� ���������� �( ��� �� � � ����� ���'��� �)� � � ��������� ������������ ��( ���������� (�� ( ���������� $ � �� ������� ��� ����$ � ���� �� �#�$ � � ��2 � ��� 2����$ � � � �������' (! ������������ ���� � �( ��� ����� < �$��� � ��������� ! ��� ����� < �$�� ���- � ���� ��� ��� ��� ����� < �$��� � ������������ ���� � ! ��+ ������������ � �- ��� �@4�� �( ��� ��(� ��! �A &%5� �� ������������� �� � �����'> �� � ����� �� ������� *+���,�� �� ������� $ � ���� � ������� $ ��� �������$ �( �������' ����$ ���� ��� ��������� �� ����� 2 � ��! � ��������' � ) ��������' ���������� �� �����< �0 ��� �#��� (� ����# ��� ������ �� /�&0�� �( � � ����$ ���# � � � ����� ���� ���� ���� ��! ������ ������ ��( �������� � �$ �� � ������������� !�� ��� ��� ������ ��� � �� � �� ���� �� ��� �� ����� �� �������� �! � ���$�� �� �( ���$��������� ����'��� � ) �� �� � �������� ��� �# ��������$ �( �# ���' �������� �)� �# ���� ��$� ���� ��� �� �# ��< ����$ (� � ��� � ��� $ ��� ��$ �� �������� ��� ( � �!) ����� � ��� ���� � ����� !� ��� �� ��� ���� ��� &1�� � �� <�����$ �! & ��� � ������$ ��� � � ��� �������� �# ��� �(� � ��� ���� ���$ ������ �(���(�� � �� ����������� ����������� �(� �� � .� �� ����������� �(� ������ <��� ����������� ����������� �( ������ <��� ������� � .� �� ����������� �(! � ��� � .� �� ��)� �() � ��� �� � �������� �� $ �� �� � ��������� ���� � �0 $�� � �� �(� � ����� � ������'� � � $����� �� � ���� � �� �( ������ (( �������� ���� �� ��� ��������'������ ��! �%� � ���� � �� �� ���-��$ � � !! ���� ! ��������- ����� � �� ����� ��2 � �����2 !� ����� ���� ��� �� ������ �������� ��� &�� �(�� �( � ��� ���'���'���� ���� � ������ �( � �� ���$ � ��� ��> �! ���� ����� ��' 9&��: ��)� �() ������������������ �� ��������� ! � �( �������������������' �� ��� � ��� � �( ��< � �����' �� &&" �� �� �������������� �� ���� ��� � �� ���������� �)� � ����$ ����� ����������� (! ����� �� �������� � �� ������ ��� ������ � �() �� ������ ��� ���� �� �� �������������� ��� � ����� �������$ �� �� ������# $ �� �� ���� �� ��� � � �� � �#������ %&� ������ �! �� � �#��$� $ �� �( ��� ��� ���� ��� ��,�� ��� ��,�� � .� �� ��� �(�� ��( ���� ������� �� ����� ���� �(� ���� �� ���������� � ���� �� � (! ���� �� ����' ��� � � �� �#�$ �) 2�� ����� ��! ������ � !) � ����������� �(� ��� (!� � � �� � ) ���� ��'��� �)� ��'���� �)( ���� �� ( ����'��� ��� ���� ����� <��-���< !� &�� �(�� ��)� �� � ��� �� ����� �������� ��� ���� �� ���� � ����������� � � .�� ����� �� � ��) � �� ����� �(���(�� ��) .�� ����� ��� ���� ���� ��!� ��� .�����'� �� ������ �� .������������� ��� � !)� !�� � �� �� .����������� �� ���� �� 2�� ����� ��! .���������# ���� ����� ��! .� �� � !� ������ !� � �� ������# ��� ����$ � <��� �( �� ����� ����$ ! 3�'� �$� ����� ��� � � '��� $ ��� ��� &"�� ��! � ����$ �$ �� � � ������� � � � � ������ �� ��-'������ �)�� ��� � � � �� $ � !� ����� !�� ��� � �� ����� ��!� ���� �()� �(� ���# ������� ��� �� �� � � �� ����� ��) � ����� ���� ��� �!�� �!� � �' ������ (�� ��� ��� �� � #����$ (! � �' ������ ���� �� (� � �' ������ ��� ��$ ( � (!��)� � � �' ������ �������� (�� � � � �' ������ ��� � ! � ������ $ �� !� � ��� ��������' ��� ��� ��� !� � �������� ��!���� ����� � �(! ��� $ �� �) � ���#��$ $ � �� �< ����$ � � �< ����$ ���' (�� �! � # �� ���� ��������$����' �) � # ����� �������$ �( 3/"� � ����� �� �������� �) 3& 0&*+ �� � ���������'� � � � #���� �� � ��! ����� � ) ����� �������$ ��! ����� �� �������� ��� ��( ����� � � !� �������$ �(! ��� ��� �&"�� � ���'���'���� $ �� �!! ����� �� ����� 2 � ����� ���� � � � ����� �� �������� �(� � ( � �����#��' ) � .� �� ����������� ��� � ���� ���� ��� � �� ����� � �� $ �� �� �� #��$ ���� ��' �� ��� ����� ���# � �������$ )� �� �(� ��������� ��� ��(� � ) ���# ���� !�� ��� �� ��� �>� ��� �� ��� � �'� ������� � ����<�� � ���$ ����'��� !) ���������' � � (! ����������� ����� �� �������� �! ������� � �������� �� �� ���� ��� � ���� ������$ ! � ����� !� !�� ��� ���-��$ ���-��$ ���� !� ��������� �) ��������� ��� ���� ������$ !) �������$ ! ����� ������ ��� ����$ � ����-��$ $ � � �������$ �� ���� �� �>����� !� ����� �� �������� � ����������� ����'��� !) ����������� ����� !� �� ����$ �� � �� ����� �(� �����$ � ��� %&� ������ �� �����$ �������� ���$��$ �����$ ��������'� �� $ �� �� ����� $'� %�� ������$ ��� ������ �� ����� ��� �� ��� �!� �!) ������������� ���< ��� � �� ������ ���� �� ������������ �(�� ��� ���������'� �� �'� ������ �(( ��� �������� � �� ������ � � ������� ���� �� � � ��� � ���� �� ����� ��' ���� ��� � �� ����� ��� � ����� �������$ �) � �� ����� ��� � � �� �� ����� ��� � ����� ����� �� �� ���� ��� ����#��' �� ���# ����� �� ���� ���� � ��� ��( ������ � ��� �)� ��! �����$���� � ��� ��$ �������$ ��) ��� �������$�� ����'� � �� ��� ��' ��� 2�������� ��)����� �(� ����� �!� � � ����'��� �� ��������� (� ��������� ���# � � ( 5@�,5@� ��� ����-��$ ' � ������������ �� ������ ��� ����� .�� ����� ����'� � ��� 5��� ��� � 5��� ���� � ��� ��'���� �����'��� � �-� � ( ��'���� � ��� � �� �<�� �� ������� � �������� ��� � � �� ��������$ �( �� � � � �� ��! �� ��� $ �� �� A7 ��� �� ��( � # ������ ���� �������$ !� # ������ ����� �� ( # ������ �'�� �� � #����� ' � #����$ �� #����$ ������$ �� #������� ��� $���� �( #�������� �(� �!( � <�� � .�����'� � �� �(� <�� � ����� ��������� /0� �� � � �$ �� �(� < � ���<� �� ���$��$ !� < �� �� �������$ (�� � <��-�������� ���� ��� ���$ ! � B���' ����� ! � '���� �� '���� � �� � �� � �((� �� ' ��� � �� �'��� � ( ' ��� �<���'��� � ������$' �� � >��� ��� �>��� � $���# �������$ � � ���� �� ���� � �� � �������� ��������� � ��������� ���������� �� ��� �� �������� ��� � ������ ������ ���� �� ���� ��������� � ���� ��������� ������ � �� �� �! "�#�$�"�"#%�# &���'(����)* "�#�$�+��,$�# &-��(�����() � �. �� ��� (� ����� �/ �� ���� � ��' ��� ����� ���� �� ���� ���� '�(������' .� ���� �� 0�(� ��� 0�(� ���� ��� ���� �( ��1/��(� ��' ������� 0/�(���� (����� �� '���(��� (��������'2 �� � ������ (��� ��� �(�������� ��� ���0�� �' �� ��������2 ���� .� .��� �� ��/'� ��� ����.��� �0 (��� �������� ��' �'����0� �������� '�/� ������� .� ���� �� ������� ��� �������� &�������� �� ���,33#)! ��� (� �������� �0 ��� �������� �4������' �� ��� ������ �0 �� ������� 2 ���� ������ �� ��� ���� (� ���4 ���� ��� (� ����' �0 ������� ���/���' ��������2 ��/'���� ��� ������ � �0 �� ������� ��1/���� �� �������(�� �00��� �����' ��� (���(��� �0 � ����'��' ���������� �1/��� ���2 ��� 0��� �(1/������� �0 ��� �/ �� ���� � .�� ���� �������� �� ��� �����(����� �0 �� ��'/������ ������(�2 -4�(��� ��� �� � ���� ���� ��. 0�� ������ � ��������! ��� �0 ��� '��� .��� (�������� �� '�������' �� 56����� �(� 0�(������72 �(�/�� �0 ��� (� ���4��� �0 ��� �� ��� �.��'� �������� ����� �(���� �'� ��� ���(����������� ��� ���� .�'��� /����8�' �� ��� ����� '��' ���������� ��' '������ ����'2 ��� ������ � �� ��� � ������ �4�/�� �0 ��������2 �� �� � �������� �� '������ �� �� �/����� � ������ �.��'� �������� ���(����������� ���2 9�/���� /������ �� ���� ��� ���'/(�' �� '�00����� ������ �0 � ��� /������ ���� '������� �� �����4� �������� �� '�/� ����� ��� �4���� ���� ��' ��������' �� � �/ ��� �0 ��: ���� &��� 0��/�� ,)2 �� ��� ����� ��� ��' ��� ���������� �0 ��� �������� ��� /�/���� ���0�� �' ����'�� �� ����' ������� �'�0�(�����2 ;�(� ��� �������� ��� �������' �� ��� ��� ����4 ��� ������ �������� ��� /(� ��� ������ ��' (�� �� 0/����� �'����0��' ��' (����(����8�' �� ��� ���(��� ����2 � ������������ �������� � �� ���� ��� ����������� �� ��� ��� ������ ��� ������� ��� ��� �� ��� !����� �� ������"� #$� !�"�%�����"�&% '( )�� &��� �%������ *+ ,*--./ *0-01*0-2( 3��� �"�������� ��� ��� &��� �%������ ��� ��& ���� %�4� � 4��� %��% ������&���� &%� ���� ��� 4��� �55� ���& 5�� &��� ���� � &��� 3%� ���&���� �� 6� �&��� �� &%� ���� ��&�� 5��&%�� �������� ��&%��& ���� �&���( * '�&�� � &��� � '�0������� ���������� � �� ��� �� /������/� �������� �0 (� ���4 ������� �4�/��� ��<� (��� ������� ��' ����/� �4���(�� �� ���< 0�� 1/��� �������� (������ �0 �4�������� ������2 ��� �(��� �0 �����(������ �4���'� 0�� '�/� '��(����� �� '��������(� ������� �(��������� ���(�� ����� ��' ����� ������(�2 �� ��� ��� �/����������� 0�(�������' �� ��� ���� '�(�'� ��(�/�� �0 '������ ���� �� ��� ���(��� ���� ��' ��� ������������ �0 ���� �( ��0�� �����2 :������ ���� �� ������� �(� ���� ���(��'�' �� ��������! � ��� ��(������� 0�� ����������/���� �������� �� �� ����������� �� � ��� ���� (����'������ � �����' .��(� �<�� ��� ���� �' ��� �������� ��' �����'/(����2 ��� �����/���� ��� ���� 0/����� ��(�����' �� .���2 � ��� �������� ��0�.��� �0 ����� (� ���4 ���� �������� ��� ���� '�������' �� �/(� � '����� ���� ���� ����(� �/��� �4����� (�� /�� �� ��' ��� �������� ���/���2 � ���� ����8����� ��(���1/�� ��' '���(���� 0�� �� ����������� ���� ���� �������' .��(� ����. ��� �������� �0 �������� ��' �����'�� .��� ���� ����������� �((/��(� ��' ����/���/�2 ;����� �����'� 0��� �������� ����.� 1/�(< � ��� �(�' ��1/��(� �������� �0 ��. � �/��� �0 �����'�� �� ��. �/����� (���2 =��� ��� �������� �0 ������������������ �'�0�(����� (�� �� �''�����' /���� ���� ��(�������2 � �� ���� � ����<� �� ��� '������ ��� �0 ���� ����/���/� : = ��1/��(��� ���� �( '�������� �0 ��� '�00����� ����� ��� � ���� ���� ����������' �� � ����� �����' �0 �� �2 ����� �( ��1/��(� '��� �� ���.��� .��� � ���� ����'2 9�0���/� ������ 0�� ��� ����� ��� 0/�(���� �� /�<��.�2 = ���� (�'� � nontreated Cell IEF IEF IEF3 3 310 10 10 treated: stage 1 treated: stage 2 S D S P A G E S D S P A G E S D S P A G E d d d u u uu u u d ���� �� ��������� � �������� � � � �� ��� � ��� ���� �� ���� ����� ��� ���� ��� � � �� ��� � ��� � �� �������� ���� ����� � � �� ��� ���� � ��� � �� ��������� 7�� "��� ��� �� ������ �����&��� ���� ��&( ��4����"��&� �� "��� ��� &��� "�&�� ���� � ��� �4����"��& 5�� ���&��"� ��������( ���&��"� �������� ���� 6� �"�����6�� ��&%��& ����"� ��8��� � �&�6����( * '�&�� � &��� 0�� ��� ���� ��� ���� ���'/(� ����������� ����(��� �0 ��� � = (�� ���/�� �� '�00����� ��������2 >/����� ��� ��� ���� ����� ��(� � �'�0��' �� (� ���4 ���� ������(����� (���/��� ������ ��' ������� ����� ��0�/��(�� ���� ���/�� �� ����������� �������� �'�0�(������2 ?��.��'�� �0 ��� : = ��1/��(� �0 ������� � �� �� �������' �� ���� � ������� 0�� ������� �'����0�� (����� ��' (����(����8����� .��� ��� ���(��� ����2 � =(�������� �� ��� '��������� 0���' �0 ���� �������� ���� ���� ��������' �� '������ ����� 0�� (� ������ ��' �/�'���� ��� �/�� � �/�� �0 '��� ���'/(�' �� ��. ���� ����/���/� ������ ��� ����'�2 ;��� �� ���� .�� �� .��� �� �������� �� '��. ��� ����0/� (��(�/����� 0�� ��� �/�� � �/�� �0 '��� ��������'2 =''���������� 0�. '������ ���� �� ������' 0���'� ��� ���� ����0/� 0�� ������ �(� ��������! � ��(�� ����� ��' ��� �'�(�� ������(� ��' 0�(/��' �� ��/� '���� ��� ���/(�/�� ��' 0/�(���� �0 �������� .��(� ���� ���� �������' �� <�� ��8� �� �� ������' ����.���2 ��� ��(������� 0�� �(�� (����(����8����� �0 �������� ��� ���� (�����/�/��� ��0���' .��� �����(� �� ����������� ��' �((/��(�2 �0 ������'��� .��� ��������� �'����0�(����� �0 � ������� .�� �� ������ 2 ���� '� ���� ��1/��(��� �0 �������� �/��0��' �� �6@� �� ���(� ����������( ����'� '�������� ���� ���� (� ����'2 ����� (�/�' �� /��' ���� 0�� (��������(��� ������� �'����0�(����� /���� � ��� �(�' (� �������� ��' ����� ��1/��(� ��0�� �� ����2 /� ��� ��(���1/�� ������' ��� ���������� ���. ��' ����. ���� ��. ����/���/�2 �� ��� (���� ��'��/� ��' �4������� '� ���� � ��� �(�' ��1/��(��� �� �� ������ ���'�'2 ���� ��� ��������� ���� �( '�������� �� �� �/00�(���� �� �(1/��� ����� ��1/��(� ��0�� ����� 0�� � ������� �� ��� ���(��� ���� �� �'����0� �� ��' �� �������� ��� (� ����� � ��� �(�' ��1/��(� .��� ��� ���� �0 �������(� ����������� �0 ��� ���� ���'��� 0��� ��2 � ������� � ���� ���� /���� 0�/����(��� ���� ��' ������ �������� ���� ���� �'� ��������� 0�� '�00�������� �������� �0 ������' �� ����2 A/���������� (������ �� �4�������� ������ (�� ��/� �� ������ /�(�����'2 � �!������ � �� �������� ���� ���� ������ >�� ��� �������� �0 � ����� ������� �/����� ��� '���(���� �0 �������� �� ���� ��. �4�������� ������ '���� ������� ��' ����� �0 ������� 0/�(���� ��� ����� ����'� ��� /�'�� '������ ���2 ��� ������ �����' ����� '��(���� �� ������(� .��(� �� �0��� ���� '�0���' �� �"#��� �� ��������� � �� �$�� ���� ��������� �2 ���� ��� �0 ��� ��(���1/�� � �����' ��� �������� ��(� � '����/��'! ����� � 9����5��"�&� � ���� 6� �&���:� �� ���& �5 &%� ��� � ���� 5�� �"���4� ��"��� &�� ��� &���� �� ��� ��6���&��� ��� &� �( � %��% ��4�� �5 ������ �� ��8���� 5�� &%�� &��� �5 ������ %� ���&� � ������ �� &%� ���� �5 ���&��� %�"��&��( 3%� &� %������ 5�� � ��4� ��8��� ��� ��&% "��� ��� &��� "�&�� ��&����� &� 6� 5��&%�� �4����� ( '��&��� ��6����� ��8����� "��� ��� &��"�&�� ��������( 3%� "��& �"���&��& �� ���"� ����� "�&%� � ���� 6� �� ��6� ��&�� �� &%� �4��4��� %��&��( * '�&�� � &��� ������'� �������� ��' 1/�������� ���/(�/��� ��� '�������' ��0�� �� ����� �� 0/�(����� ��' (� ���4��� �0 ��� �������� (����� �� '����� ���'2 >�� ���� �/����� �%� ���� �� ��������� � ����'� ��� ������' .��(� '� ��� '����/�� ��� �������� ��' <��� (� ���4�� ����(�! �2�2 �00����� (��� ��������� ��' ���(�������� ����8����� ��� ���(��� ����2 ��� ����������� �� ���� � �� ��� �������� �4��(������� 0�� ������ �(� (� � 0�� ���� �(�/��� (�� ������(� 0�� 0����� ��. '�/� ������� ������� �'����0�(����� �� ������ 0�� �' (��� ����� �� '������' ����/��2 =��� ��� ����'����� �0 ��� '���(� ��' ������� �������� ��' ������� ��4�(����� ��/'��� ��' (��(<� 0�� ��'� �00�(�� (�� �� ���0�� �' .��� ���� ������(�2 �����(�� ������(���� .��� �� (� ���� ��� �� ����/� '������ �� ���� '������ ����/� ������ �' �� ���� 0��' ���(/��� ��<��� �� ��'� 0�/�'� 0�� '�������� ������ '������� ��' ����� ����� ���� '���� ��� ��' (����(����8� ������������������ �'�0�(������2 �� (����(�� (�� ����� �� .�/�' �� ����������� �� �/����� ��'���'/��� �� ���'�(� �������� �� �������2 ��������� ��/'� ����( (��� 0/�(����� ��' ���(/��� ������8������2 =������ ��� 0���' �� �(��������� 0�� �����/� ������(� �����2 6������ �(� �� ���� ������' 0�� ����� ������(� 0�� ��� '�00����� �/������ 0�� ������(� 0�� ����'��� ������ �0 ������ ��(������ ���� (��' '��/��� ��' ����� ��������(�� ��(������� ��� ����' �0 (��� ��' ��� ���2 >�� ��� ���� ������(� � (� ����' �������� .��� ���� �(� �� � �����'2 ��� � �������� �� �� ���� �� � ��� =� �����'� �������' ����� ����������/���� �.��'� �������� ���(� ����������� �� ��� ����� ������' ���������� ��(���1/�2 ��� ������� ���� �((��'��� �� ��� �.� (� ������� ��'����'��� �����(��(�� �(�� ���� ����� �0 ��� ��������! ������(���( ����� ��' ��8� �00��� ��� ���� ���� �����/����2 ������� ���/���' �������� (�� �� ��������' '��� �����' ��' �����' �� ��� ���2 ��� ������� �0 ���� ��(���1/� ���� ��(< �� � ����� �� ��� �� ����/��� �� ����� ��� &,3$�) (� ������ ���� ���(���( 0�(/���� &�->) ��' �:� �����(���� �'� ��� ���(�����������2 ��� �����/���� �0 ��: ���(����������� .�� (����'������ ��(�����' �� ��� �����'/(���� �0 '����/���� (��'������ '/���� �� ��� ����������� ��' ������(���( 0�(/���� �� ;B>������ �� ��� ���� ,3$#2 ���� ���� �'�� 0�(����� ��� ����' �����' � .�'� �((�����(�2 /� ���� .��� ��� ��� ���(����� �0 � �����8�' �� ���'����� & C���1���� �� ��2 ,3D�) 0�� ��� ! !���4��� ���&��"� � "��& ������ 6� &%� %����&� ������ %( � ;�"��� � ���< ���&��"� � ������ % ��� ��& �=��&( �&���"��� !( ����� %�" >7 ,*-?0/ +20( @AB������ �!( � 9��� %�" 7.0 ,*-?./ 200?1207*( 9����84��& 9� )� #� ���%�&&� ��� �����::� )� �C�� �� ���&��� "���� �� ���&�� �( � 9�� %�" 9���%�� ��&%� � + ,*->7/ D*?1DD-( *(2 '"��� �������� 0���� '� ������ ��� ��(���1/� ��(� � �����'/(���� ���/�� 0�� ���� ��� � ��������2 6������������� �0 (���� ���� ���������� �� (�����0/������ �� ���� /��� 0/� �� ��'/(� ��� �/ ��� �0 �������� ��' 0�� ��(���8����� �0 � ������� .����� ��� (���2 =��� ���0��(��������� �((��'��� �� �����(��(�� �(�� ���� ����� �0 �������� ��<� ������(���( ������ �� '�������� �� ������ ���� �� ��� ���'� �� ��: ���� ��' �� ������� ��������������� ������(� �����2 �(�/�� �.��'� �������� ���(����������� (����� ������ �� �/��� ���' ������������ ��<� /���'� �������� (��� ��������� ��' '���(� ��� ���(��� ���� ����'� ��� �����' ��' 0/����� '�������' 0�� ��� ���������� �0 ����� (� ���4 ������� �4�/���2 ��� " � ����� �'����� ��� ������� �4������' �� � (��� ���/�' �� '���(�����2 ���� ��� (/����� ����� �0 ��(������� ���� �� (� ������� � ��������2 ���� ���� ��'���(���� ��������� ��' �������� ��(���1/�� &0�/����(��(� �� ������ �������� @;: (�2 , �� �������) '�.� �� ,�� �������� ��� (��� (�� �� ���/���8�' �� � ��: ��� .��� ,� � ����� ������� E (��������'��� 0�� ������(� ��,�D (��� �1/�������� �0 �� ��� � (���� E ��� ���'�' �� ��� ������(���( 0�(/���� ��� &������ �� ��2 ����)2 F��� ���(��� ���� ���� �'� ��� ��������� ��� ��������� ���� ����� �������� ����'� ��.�� ��� �� ���(��(� ,� �� �� �� �0 ������� �� � ���� �� ��1/���' 0�� ���' ������� �� ��� ���(��� ����2 ��� � �� ����� � ��� ��: �������� ��� ���� (� ���4 ���� .��� ��0�� ���(� ����� �� �� �������� �� 0��' �4������' (������ �� � ������ �0 ����! ��<� /� ��' '�.� ���/����' �������� ������������������ �'�0�(������2 � ��� �������� ��� ����� ���� ��� ��������(< �� ��� ������ �(� ���(�'/�� ��(�/�� ��� ���� '���(���� ���� ����� ��' �� �� �'C/���' ��' ���� �� 8�' ��/����2 ;��� ���(� � ���� ����� �� � ��. '�������' ��0�.��� (�� ���0�� 0/��� �/�� ���' ��' ���'���00 ����/�����2 ��� ����������� �0 1/���������� '���� �������� �0 ������� � �/��� �� ����� �� �������� '����'��� �� ��� ������� '���(���� ��(���1/� ������'2 6������ ����� �0 �������� ��� ���� 0/����� �������'2 # 3��� �"�������� ��� &���%�� ����� ���� ��"��� &%� "���� ���� ���&��� &� %��8�� 5�� &%� ��=& � � �� 6� ���� �&� ������&��� �� &%� � 4��&��� �5 �&����� &%� �����&� ���&���� �� &%� ��� "�&��= ��&�� 5��&%�� �������� �� ����4���� 6� ��� �5 &%� ��&��� ��&�4� &� %��8���( !�4��� �� ��%�� !� 4�� @��&��" �( )�� &���%������ 7* ,7000/ 7+*?17+7*( '� ��� &� � ��"����� 9�������& 9���� :�� ��"� �:��� �� 5������ � �� � �&���� ���� ��� ��&% %��% &%����%��& "��� ��� &��� "�&�� ��������( 3%� ����&��� �5 � ���& �� &%� 7�� "�� �� ��& �����% ��5��� "�&��� 5�� �� �=� & � ��&�5� �� &��� �5 � ���&���( ' ��&�5� �&��� �� ���� 6� � %��4� ��&% %�"� �� �� "��� ��� &��"�&�� �������� �5 &%� ���&��� ���&( * '�&�� � &��� ����� ����������� �� ���� �� � ���� � ���� ��������� ��� ������� ��' 0������ .�� �� �'����0� �������� �� ���.� �� 0��/�� �! �����'� ��� 0������������� &6F>) .��(� .�� �����'/(�' �� 0�/� ��'����'��� ���/�� ��(�/'��� 6����� �� ��2 &,33")2 ��� ��� ��/� (��������� ��� ������� �0 �������� �� (/� �/� �0 ��� ��� ���� ��� ������� �� '������' ����'� ��� ��� ��/� .��� � ���� �������( ��8� � ����� �������2 ��� (������� ���'/(�� ��� �����'�� ��� ��/��' 0�� ��� ��/� ��' �/� ����' �� ��� ���(��� ���� ����� ����2 F����� F=@:� ��> �����/ ���� ��� � �����' ��(�/�� ���� ��� ������ �� ���'�� ���� ���(�������� ����� �2 ��� ��� ���(��/ .��� ��� �((/������ ���/��' �����'� ����� �� ��(��' .��� ��������(�� �����'� ���(��� �� �����/� '�������� /���� �'�1/��� �����0�� ���(� �����2 ���� �� ��(� �� 0�/�' �� �����'� ��' ������� '�������� ���� �( '�������� (�� �� ����(��'2 ��� : = ��1/��(� �� ��� ���� ���'��� 0�� �� (�� �� ��������(���� ���������' ���� ��� � ��� �(�' ��1/��(� .� ���� �� �� ��� ���� ��(�/�� �� �� ��� ���� ���(��(�� �� ����(� : = .��� F=@:� '��� �� �� ��� ���(�0�( ���/��2 G�/ (�� '� �� ������ .��� F�HF� ���/��2 ���(� ��� (������� ����� �0 ������� ��� <��.� ��������(�� ������( �����'� ����� (�� �� ��������' ��' (� � ����' .��� ��� �4���� ������� '���� ���' �����2 �0 � �/00�(���� �/ ��� �0 �4���� ����� �����'� ����� ��(� .��� ��� ��������(�� �����'�� .����� � ������� ���� ������� �'����0�(����� .��� ���� (��0�� '��(� (�� �� �(�����'2 ���� ���(�'/�� .��<� ���� .��� 0�� ������� �'����0�(�����2 ��.���� ��� ����' (�� �� (� ��� ���' 0�� � �/ ��� �0 �������2 �� ����� (��(/ ����(�� ��� ���(�0�( ��0�� ����� �� ���'�' 0�� /�� ���/�/� ������� �'����0�(����� ���(�0�(���� �����'� ��1/��(� ��0�� �����2 � ��� ���� $� �� ����� � = ��� �(�' ��1/��(� �� ������ '��(�� �� ������ ��0�� ����� 0�� /�� ���/�/� ������� �'����0�(�����2 :/���� ��� ���(��� ���� �������� � �����'� (�� �� ����(��' 0�� ��� ���(� ��/ ��' 0��� ����' ����'� ��� �����/ ��� ��� �' ���'� ��� ���(��� ����2 ��� ���/����� 0��� ��� ��� ����� ��� ��'�(����� �0 � ��� �(�' ��1/��(� ��' (�� �� /��' �� �������� � ��1/��(� ��''��2 = ��� �(�' ��1/��(� '�����' 0�� ��� ���(��� ���� (�� �� /��' �� ����(� ��� ���� ��� ������� '�������� �/� ���� ��� -�� '�������� ��' /��' 0�� �� �!� ��1/��(��� .��� ��(������2 % ������ ��� !����� �� 9����6� ��( ��� 6��� D ,*--D/ D7?1DD7( 3%� &� %��8��� �� �&� 6� �� ����� ���� 6� �� ��6� �� �&��� �� &%� "�&%� %��&���( )4�� 5�� �������"� ��&%��& � ����"� �&�6���� �� ���5�� � ��&�5� �&���� ��� 5����6�� � ���� ��� ���� �%�� &%��� �� �����% ��8��� � %�"����� �� � �����4� ���� �5 &%� ����� ���&� �( *(? B�� &����� ���&��"� � ��! &������ ��'����� �� ���� �� ���'�� � ��� �(�' ��1/��(� ��0�� ����� ���� ����� ���/(�/��� '��� �0 � ������� (�� �� '���� ���' .��� ��� ���(��� ����! '��/�0�'� ���'� ������������������ �'�0�(������ ��<� ��������������� ��/�(�� ���� �(������� ��' ���(���������2 ��� �'����0�(����� �0 ����� �0 '��/�� 0�'� ���'� ��������������� ��' ���(��������� (�� ��� �� '���� ���' /���� ���'� ��� ���(��� ���� ���/�� 1/���������� �0 ����� �'�� 0�(������ �� (����'������ ��� '�00�(/��2 ��# ���������� ���� � �� ��� 0����.��� �������� �� �/��/�'! =� 0���� ������ �������� ��� �'����� 0��' (����(����8�' ��' (��������' .��� 5������� 0� �����72 ;�(� �� � ���/(�/��� ��0�� ������ ��� <��.� � ����� �/����� �0 �������� ��� �������' .��� ��'�� ���������� ��' ���/���� ��(���1/��! 0�� ( Theoretical gene product: amino acid sequence Theoretical tryptic peptides Match ? ! “ ” translationIn silico “ ” digestionIn silico DIPGHGQEVLIRLFKGHPETLEKFDKFKHLK SEDEMKASEDLKKHGATVLTALGGILKKKGH HEAEIKPLAQSHATKHKIPVKYLEFISECII VLQS “ ” digestion elution of peptides with trypsin In vitro Peptide mass spectrum 2-D gel spot cutting Practical Experiment Genomic Database Search DIPGHGQEVLIR LFKGHPETLEK KIHGQEVPLR FDKFKHLK TEGFHVPR SEDEMK ASEDLK m/z m/z Genomic database: DNA Sequence ���� �� � ���� ������������ � ���� � ���� ���� ����� � ������� ��� � ���� ������ � ��� �������� ���� � � ������� ���� � ���� � ��� ������ ������ � � ������ ����� � � �������������� �� ���� � � ��� �� ������ � ���� � ��� ��� �� �������� � � �� ���� ������� !���4��� &%���� �"�������� 5�� ���� �"���=�� �� 5�� � &����� ��5��"�&���� �5 &%� ���&���� ��� �� ���� 6� &%� �""���� ��� ������&��� �� "��� ��� &��"�&�� "�&%� � �� �&�� &���� ���&��"� � ,��� �6�4�/( * '�&�� � &��� ������(� �� � �������� ��� 0����' �/� �0 � (��� ������ .��� �00����� (��� ��������� ��' ���� �������� .��� ����(� �������� ���/(�/�� �� ��������������� (� ���4�� ��� �������' �0��� ���(�������� ����8����� &��� �����.� �� @� ��' ��' F��� ,33$ ��' 6��'�� ��' F��� ����)2 �) $�"�� �'� ���� �( 3��� � ��� 9��� ? ,*--?/ *D-1*27( ��� �� �� ���� �( E�&��� 20. ,7000/ >D?1>2+( �� ��� ����� �� ���� ������������ ���� ����� ��� ���� ��� � �� ���� ���� ���� ���� ��� ������ � �� � ��� ��� ����������� �� � � �� � �� ������ ����� ��� � ��� ������ �� ��� ���� � ��� �� �� � �� �� �� ����� ��������� �� ���� �� �� � �� �� ��� ������� ��� � � � �� ��� � � ��� ���� � ��� � �� ��� � �� ���� ��� ������ � � ��� ����� �� � ����� � ��� ���� � � ��� � � ����! � � �� � � � ��� � �� ���� �� ������� � �� ���� ��������� � ���� ���� � � � ����� �� �� ��� �� � ������ ��� ��� � ��� ����� ���� � �� � "#�### ��� "$#�### � � � �� ��� � �� �� � �� � � � �� �� � � ��� % �� � �� ���� �� ������ ���� �������� ������������� �� �� � �� ������ � � ���� � � �� �� � ����� ���� ������� &� � � �� ������� �� � � �� � ���� �� ��' �� �� � ��� �� � ��������� ��� �� ������� ��� �� �� � � ����� � ���� ��� �� � �� ! �� � � � � � �� �� ����� � �� ��� (��� ���� �� ������ � � ������ � �� � ����� � �� � � �� � � �� � ������� �� �� �� � �� �� �� � � ��� � �� �� ������ ��� � �� � � �� � �� �) * �� "*� &� �� �� �� � ���� �� ��� ������ �� �&� �� � � �� ������ ����������� ������������� ���� ��� �� � �&� � ���� �� ���� ��� � &� � ��� ��� � �) � ��� �� * �� "* �� � ��� ����� &� �� � ��������� � ��� � ����� �� � �� �� ��� ������� � �� ��� ���� �& ���� �) ""�$� � ��� ���� � ���� ��� � +���� � ���� � ��� � ������ � �� ��������� �� � � ��� �� � �� �� �� +�+ ,(-. � ����� )��� ��� � �� � ���� � �� ��� ���� ��' � ���� �$# /�� �� ��� �� �� � �� �� ��� � �� ���� ��� � �� ��� � ����� �� ������ � � �� ���� �� � ����� � � ���� ��� � ������ �� � �� �� ����� � 0 �� 1 �� � � � ��� ��� � ��� ���� 2 �##� 1�� ��3 ) 3 ��� -��) &+%��4 *�$�5�*#*$6�$ 7)� ���� 89 *�$�5�:##"5�$ 7.� �� ����8 �� �� �������� �� ���� � � ���� ��� �� �� ���� � � � � �� � � �� ���� ������ � ���� � ��� �� ���� � � ������ �������� ��� � � � � ������������ �� �� � � ����� ���� �� ��������� ���� �� �� �� � ���� ���� ��� �� ��� �� � �� � �� ���� �� ��� �� ��� � � �� � ��� � � �� ��� �������� ��� ���� ��� � ��� �� � �� �� �� ��� �� �� ��� � ��������� � !�� ����� ���� ����� � ��� ������� � �� �� � +�� � � ��� ������� � �� ��� �� ��� �� �� ��� ����� ��� � � ���� � ��� ����� � �� ����� ��� &.;� � � � ������� �� � � ������ +�� �� �� � �� ��� � �� �� � �� � � ��� ���� � �� �� 1� � �� ���� � ������ � ���� < ������� ����� < ������ � ����� �� �� � �� �� � �� � ���� � �� � ������� ��������� ;� �� � � ����� �� ���� ������ ����� � �� �� ���� � �� � ��� �� �� ( ��� ������� ��� �� �� +�+ � � �� ! � � �� � � �� � ���� �� ������ �� ����� � �������� � ��������������� % �� � � �� ����� �� � � ���� �� ! ��������� ����� ������ �� � �� ��� ��� �� � � ���� � ��� ����� � ��� ����� ��� �� �������� � �� ��� �� � � ����� � ���� � �� ��� ����� ! ��������� ���� ������� � � ������������ &� �� �� ���� �� ���� ���� ���� �� � ��� � � �� ���� � ��� ��� �� �� ��������� �� ���� �� ������� �� � �� ��� � �� � ���� �� ����� �� � ���� � ���������� � ��� � ���� � ��� � � �� � ���� � � �� �� � ��� ��� ������������ ������ ����� ����� ������ �� �� ��� ��� ���������� &� �� � ������ � �� � �� �� �� ��� ������ ��� � �� �� ��� ����� �� � �� ���� ������ ������ � � ��� �� ����� � ������� � � �� �� � � ��� ������� �� � � � ��� � ����� ��� �� � �������� � �� �� � �� �) � ��� �� �� �� � �� �� �� ��� �� ���� �� ����� �� ���� � � ���� �� �������� ��� �� �� � � ��� ����� � ��� � �� ����� �� �� �� � ��� �� �� �� � �� �� �� ��� ���� =�>;� ��? � ����! ��� � � � � �� ��� � ��� � ��� � ����� � ��@� �������������� �� ��� ����� �� �� � ���� �� � ���� � ����� ��� ���� �� � �� � � �� �� ������� ��� � � �����' � � � ����� (�� ��� ��� (�� ��� 7"A5B8 ��� � ���� � ���� � ��� ��� �� ����� � �� � � �� � �� ��� � � ����� ��� � �� �� �� ���� � �� ���� ����������� �� � � �� � � ��� � =) ��� � �� � �� ��� �? 7(�� ��� ��� (�� ���� "AB�8� ��� �� - �� ���� ��� � �# C �# �� ��� � ��� ������ � �� �� �� ! �� ������� ��� ����� &� �� ��� � �� ���� � �� "## ����� ��� � ���� � �� � �# �� ���� �� ���� ������� � �� � �� � ����� � �� �� ���� ���� �� "#�### � �� ��� �� �� � ��� � �� � �� � � �� &� � ��� �� "�� �� ���� � � � ��� ��� �� � ���� �� �� � � �������� �� ��� �� ���� � ������ � ����# �� �� � � � ��� �� �� �� ��� ��� ����� ����� $� ������ ������� �� �� � % �� � ��� � ���� �� � ���� ��� � ���� �� ������� �� �� � ���� ��� ������ �� � � ��������# ��� ������� # �� � ��� ��� � ��� ��������� ��� ����� ��� ����&'# ��� ����&(� ��� )���� � *+ ,�-.*/ 00�10+2� ��� ����&'# ��� ����&(� 3 �� 3� � �* ,�-*�/ .0-1.2*� 4 �� 5# 4��� 6 7� �������� � ��� �8 ,�--+/ �9021�9+-� ��� $������ ������ �������� ��� ��� � � �� ��� ����� �� � �� ��� ��� � � � �� �� 3 � � � � � �� ���� ����� �� ����� ����� � � ��' � ��/ 6# C *# �� 7D��� ��� D����'� "AA$8� ������ �� ����� �� ���� �� � ��������� �� ��� � ���� ��������� ���� E �� � �� ���� � � ������ ���� �� ���� ������� ���� ������ � ���� &� ���� ��� � �� � �� ��� � ����� � ��� �� � �� ����� �� �� � �� ( � �� �� ���� �� � ����� � ����� �� ���� ��� ���� �� � �� � �� ��������� ��� � ���� ��� ������� ��� � (��� ���� �� ���� ������� �� )����� � ��� 7�###8 ���� �� "## ���� � � � �� ��� � � � �� � ���� � ������ ���� �������� �� � � �� ��!�� � �� ��� � � � � �� �� � �������� �� �) � ��� ��� �� ���� � �� �� ��� ���� �� ��� � �� ���� ��� � � �� � �� �� � �������� � ���� � ���� � �� � � � � �� � ���� �� ����� ��� � �� ������ �� � �� �� ����� � ����� ��' � ��� �� �� �� ������ ����/� �� ���� � ������� � �� � ���� ��� � �� �� ������ � ��� ���� �� � � �� � ��� �� �� � � �� �) * �� "#� �� � �� � ���� � �� �� �� � ���� � �� ��� ��� �� �� � ��� � �� �� ������ (� �� � ������� ��� �� � �������� � � ��� � �� � �� � �� � ���� �� � ���� � 1� � �� � �� �� �� �� �� ����� �� �� � ��� � �� ��� �� ���� ���� �� �� � ��� � � ���� �� �� ���� � �� ������ �� ���� � ��� ��� �� � � ����������� ����� �) � ��� ��� � �� � �� � �� � �� �� 1� � �� � ��� �� � �&� �� � ��� �� � ��� � � ��� � �� �� �) ��� �� �� � �&� ���� �� /� � � � �� �� ����� � �� ������� % �� � �� � � ��� ��� ���������� � ����� � �� �� ����� ��� � ���� ��� � ����! � ���� ��� ����� ��� � � � � �� ����� � �� �� � � �������'����� �� �� � ��� ��� (� ���� �� �� �) � ��� �� �� �� �� �� ��� ����� �� � ��� � � �� � � ���� �� � �������� �� �� �������� �� �� � ����! ��� ��� � �� ��� � ��� �� ���� �� � ��� � �� ���� �� ��� %���� �� ����� �� ������� �� �� �� � �������� ���� � � �� ����� �� ���� �� � �� �� � ���� � �� �� �) � ��� ���� - ��� �� � ��� ���� � ����� � ��� � �� �� ��� ���� ��� � �� �� ���� � �� ������ ��� ����� ��� ��� �� �� ������ � �� ���� "� � ����� � ( � �� ��� ���� � � �� �� �� �� ������� �� ����� � �� ���4 �>;� �� � ��� 7"A558 ��� ��� �� � � � ������������ �� �� �� �� ��� ����� �4 �.,)-. 7���� ! ���� � � �) � ��� �� � �� ���� ���8� ) �� ����� �� ���� � ���� �� ������ �� �� �� � � ��� �� � �� ��� � � �� �� � ���� �� � ��� �� � ���� ���� �� �� ������ � �� � �� ����� � ��� � � ��� � ��� � ���� )�� � � � �� �� ��� ����� �� �� �� � �� ���� � � ���� � �� ��������� �� � �� ��� � ��� ��� � � ��/ �� &.;9 �� ��� ���� �� ����� � �� �� � �� �� ���� �� �� � �������� ������� �� �# ������ �# :���� �# ��� ;������ 5� �������� ��� �� ,�999/ �8�.1�8��� $� ����# ����# ��� ��� � ���� � ���� �� �� !� ��� ��� �<� � ) �� � �� 8�. ��� . �� � �� � � ��� � � ��< �� ���� ���� ��� �# ����� �� � ������� ������� �� �� �� ���� � ����# ��� �� ��� �� � �� �� ���� ���� ��� ��� �������� ��� ��� ��� ��� � � � � � �� � � ��� ���� # ����� ������ � �� ������ � � �� �� � �� ��� ) ���� �� � ������ ����������# ���� ������ ���� ��� ��� � � ����� � �� �� ����� ;=%��� >?# '�������"# ;=%��� >�� 3 �� ,�-../ ��001��2�� $� ���� ��� �� ��� ����� �# ��� ����< � � �� � �� ���� � � �� ����� � ����� � ����� ��� �� � !�� ����� ���� ����� $ �! � ��� �% ���� ��� �� �� ��� �� � � ��� ��� ��������' � �) � ��� ��� ��� � � � � ��� � �� �� ��� ����� �� �� � ������ ��� � �� %@ ��!���� � ��! 7"AB�8� �� �) � ��� ��� �� �� � � �� � � � �� � �� �������� �'��� �� ������ ����� � ���� �� ������ � � ������ � ���������� �� ������� ��� � ��� � ����� � � ��� % �� � �� � �� ��� � � ��� �� ���� �� �) � ��� ��� � ��� �� �� � ��� �� ������ � ��� ��� �� ��� ���� �� � �� �� ����� ������������ ��� � ���� ���� ������� �� ��������' � �) � ��� ��� ��� � � ���� � ����������� �� �� � ������ � �� �� �� �� ���/ �� 0��� ��� 7"AA#8� &� � ����� � �� � ��������' � �) � ��� �� � �� � ���� �� � ����� �� ��� ��/ �� ����� � ��� �� � ��� ���� ����� � �������� �' � ���� � ���� � ��� �� ���� � ��� ��� � � � �� � �� ����� ���� ���� �� � ��� (��� ���� �� �� � �� � ��� �� � � �� (�� ��/� -F �� �� ����� � �� ��� � � �� �� � �� ������� �� �� ���� ����� ��� � � � � � �� �� � ������ ��� � � � � ����� 7+� ��� � ��! "AB5� ��� -F � � ��� "ABB� �###8� �� � �� ��������' � �) � ��� ��� �� �� �� �� ��� ����� ��� ����� � ���� � �������� ����������� �� ��� � �� ���� ���� ����� ���� � � �� �� � ��� � +��� � � � � �� � ���� ���� � � � �� ��� ��� � ����� � ���� � ��� � �������� �� ����
Compartilhar