Teste Coombs Direto - POP

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Procedimento Operacional Padrão (POP)
Coombs Direto
LABORATÓRIO CLÍNICAS II
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Nome do Procedimento: Teste de Coombs ou Teste da Antiglobulina Direto (TAD)
Fundamento do Método
O teste de Coombs Direto é uma técnica laboratorial para determinar se os eritrócitos foram fixados in vivo (opsonizados) por imunoglobulinas, complemento, ou ambos. Tecnicamente, baseia-se no fato de que os anticorpos que recobrem as hemácias podem ser identificados pela adição de anticorpos antigamaglobulina humana. 
Quando positivo, ou seja, indicando a presença de anticorpos aderidos às hemácias, formam-se pontes entre elas, levando ao fenômeno visível de aglutinação. 
Principais Aplicações Clínicas
Exames realizados no setor de imunologia e sorologia
Reações transfusionais hemolíticas;
Doença hemolítica do recém-nascido;
Anemia hemolítica auto-imune; 
Hemólise induzida por drogas.
Materiais
- Micropipetas: 50 µl
- Ponteiras para micropipetas
- Pipetas pasteur
- Pipetas de 1mL
- Tubos de ensaio de 5mL
- Estante porta tubos
- Caneta permanente
- Banho Maria 37ºC
- Centrífuga 
- Luvas
- Descarte
Reagentes 
- Amostras de sangue em tubo de 4mL com EDTA com Hemácias tipo O+
- Amostras de Soro em tubos de 4mL
- Reagentes Soro de Coombs
- Solução Salina
Cuidados e Precauções
Realizar a limpeza das bancadas antes de realizar os experimentos;
Atenção na identificação das amostras;
Verificar a validade dos reagentes;
Sinais de hemólise ou contaminação;
Manter a calibração das pipetas atualizadas;
Formação de bolhas e outros sinais que possam interferir no teste;
Manter o equipamento calibrado e com a programação adequada para usar.
Procedimento
Está com os EPIs;
Identificar os tubos;
Realizar uma suspensão de diluição das hemácias do paciente em solução Salina – 10%;
Transferir 50 microlitros da amostra de sangue do paciente com a micropipeta de 50 µl para os tubos de ensaio;
Transferir 1mL de salina com a pipeta de 1 mL para fazer a diluição junto com a amostra de sangue;
Homogeneizar bastante;
 Enumerar os tubos de ensaio em 1 teste, 2 controle – (amostra 1)
 1 teste, 2 controle – (amostra 2)
Colocar 2 gotas desta suspensão em cada tubo de ensaio identificado com a pipeta de pasteur;
Adicionar solução fisiológica;
Centrifugar por 1 minuto a 3.000 rpm;
Retirar o sobrenadante dos tubos com muito cuidado, deixando apenas um “botãozinho de hemácia” no fundo;
Repetir o processo de lavagem das hemácias mais duas vezes, sendo que, na última lavagem retirar toda solução salina;
Adicionar 2 gotas do Soro de Coombs em cada tubo;
Centrifugar à baixa rotação por 15 segundos a 1.000 rpm; 
Agitar levemente os tubos;
Observar se houve presença ou não de aglutinação.
Limite de Detecção
O teste de Coombs é extremamente sensível, um resultado negativo não exclui a presença de anticorpos ligados às hemácias.
Valores de Referência
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Significado Clínico
Esse teste de contribui diretamente para o diagnóstico da anemia autoimune, pois sua positividade confirma que o anticorpo foi fixado in vivo à hemácia do paciente, auxiliando dessa forma o diagnóstico diferencial com outras anemias hemolíticas, como as causadas por alterações da hemoglobina ou da estrutura da hemácia. É importante também no diagnóstico das anemias hemolíticas do recém-nascido e das anemias induzidas por drogas. 
Resultado positivo (presença de aglutinação): significa que há anticorpos ligados às hemácias. 
Resultado negativo (ausência de aglutinação): não há anticorpos ligados as hemácias. 
Referências Bibliográficas
Teste da Antiglobulina Direto, Biomedicina Padrão. Disponível em: <https://www.biomedicinapadrao.com.br/2010/11/teste-de-coombs-direto.html> Acesso em 25 de fevereiro de 2019.
Teste de Coombs, Biomedicina Brasil. Disponível em: <https://www.biomedicinabrasil.com/2017/05/teste-de-coombs-direto-e-indireto.html> Acesso em 25 de fevereiro de 2019.
Imuno-Hematologia Laboratorial. Ministério da Saúde, Brasília, 2014. Disponível em: <bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/imuno_hematologia_laboratorial.pdf> Acesso em 25 de fevereiro de 2019.