Bioquimica ( Enzimas: funções e finalidades clínicas; Cinética enzimática.)

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Enzimas: funções e finalidades clínicas; Cinética enzimática.
Esta atividade é importante para que você possa identificar visualmente, sob o ponto de vista bioquímico, interferência de fatores externos como pH e temperatura na atividade enzimática em um determinado elemento, principalmente no que se refere às mudanças de composição bioquímica em alimentos.
Para realizá-la, é importante seguir os passos descritos.
PASSOS
Passo 1
Com o auxílio de uma faca, os alimentos (maçã e abobrinha verde) devem ser cortados ao meio e deixados expostos (cobertos por uma rede fina – filó) por pelo menos uma hora, sendo que um deles deve ser deixado em geladeira e o outro exposto ao sol. Antes da exposição, deve-se
 registrar através de fotos os alimentos.
Passo 2
Após uma hora de exposição devidamente protegido, os acadêmicos devem anotar e
registrar (através de fotografias) o observado, respondendo as seguintes questões:
1. O alimento alterou sua coloração e estrutura?
R= Sim.
2. Se sim, por qual motivo?
R= Quando descascamos frutas como maçãs, peras e bananas, o que fazemos é causar a ruptura de suas células, as pequenas unidades que as formam. O mesmo ocorre quando elas são machucadas por alguma pancada ou partidas ao meio. 
Dentro das células da maçã, há um tipo de proteína (polifenoloxidases) -- substância que existe nos animais, vegetais e em todos os seres que têm vida -- chamada enzima. Quando cortamos as frutas, as enzimas saem das células. Elas entram, então, em contato com compostos químicos que existem fora das células. Com a ajuda das enzimas, esses compostos unem-se com o oxigênio do ar. Por isso, a maçã escurece.
Passo 3
Na etapa 2 foi observado o alimento em temperatura ambiente. Responda:
1. Houve diferença na coloração do alimento em relação ao proposto no passo 2 da etapa 3?
R=Sim.
2. Se sim, o que pode ter levado a essa alteração?
R=A temperatura da geladeira diminui a atividade enzimática. As enzimas tornam-se quase inativas com a falta de agua, e baixa temperatura.
3. Como a temperatura interfere na atividade enzimática?
R= O calor favorece o encontro das enzimas. A energia também é necessária para romper ligações químicas existentes entre os átomos de cada substancia, favorecendo assim, a ocorrência de outras ligações químicas e a síntese de uma nova substancia a partir das duas iniciais.
ETAPA 4 - Aula-tema: Cinética enzimática.
Esta atividade é importante para que você possa identificar através de ensaios bioquímicos a verdadeira existência de enzimas em alimentos. Para realizá-la, é importante seguir os passos descritos.
Passo 1
Com o auxilio de um estudante de iniciação científica do curso e de seu orientador de ATPS, reserve um horário no laboratório multidisciplinar de forma que não coincida com os horários de práticas e fabrique 100 mL de tampão fosfato de sódio 0,1 mol.L-1, com pH 7,0 (vale ressaltar que o preparo de tampões foi aprendido em aula prática de química geral durante seu primeiro semestre). Para isso serão necessários pHmetros de bancada, tubos de ensaio, espectrofotômetro, cronômetro. Não se esqueça dos equipamentos de segurança em laboratório.
Passo 2
Para o preparo do extrato bruto, as amostras vegetais recém-colhidas serão cortadas e liquidificadas com soluções extrativas preparadas na proporção de 50g/50mL de tampão fosfato de sódio, a 4ºC, e em seguida filtradas em trama de naylon, armazenadas em frasco âmbar.
Passo 3
Em tubos de ensaio serão adicionados 2,4 mL de catecol preparado em tampão fosfato de sódio 0,1 mol.L-1 pH = 6,0, variando-se a concentração do extrato bruto em de 10 a 100μL de extrato bruto (EB) do extrato dos alimentos, com escala de 10 em 10 μL. A reação se inicia quando adicionarmos 500μL de peróxido de hidrogênio (H2O2) 0,05 mol.L -1, no tempo de 60s. A variação da absorvância a 380nm será analisada através de um espectrofotômetro.
Passo 4
Após esses resultados, deve-se montar um gráfico da concentração de EB x unidade de enzima, no qual a mesma é calculada usando-se a proporção de 1 unidade de enzima equivale a 0,1 de absorvância.