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Enterobactérias Enterobacteriaceae • Bastonetes Gram negativos • Anaeróbios facultativos • Meios seletivos: MacConkey , EMB, ágar SS. • Fermentam açúcares, produção de ácido a partir da glicose • Catalase positiva • Oxidase negativa • Reduzem o nitrato ao nitrito • Não formam esporos • Podem ser móveis (flagelos peritríquios) ou imóveis • Provas bioquímicas • Classificadas sorológica: polissacarídeo somático O, antígeno capsulares K e proteínas flagelares H • Habitat : plantas, solo, água, intestino do homem e animais Fonte: MADIGAN et al., 2010; ANVISA Fonte: Google imagens Gêneros de importância clínica 10 gêneros, aproximadamente 25 espécies: Citrobacter sp. Proteus sp. Enterobacter sp. Salmonella sp. Escherichia sp. Serratia sp. Klebsiella sp. Shigella sp. Morganella sp. Yersinia sp. Fonte: < http://www.uff.br/bacteriologia/AulasTeoricas /Enterobacterias1.doc> Identificação de enterobactérias • Isolamento e identificação de enterobactérias: • Testes bioquímicos: (KONEMAN et al., 2008; Google imagens) Ágar sangue • Colônias acinzentadas e convexas. Fonte: <http://biomedicinaemicro.blogspot.com.br/p/culturas-bacterianas.html> E. coli Proteus spp. K. pneumoniae Coloração de Gram • Bastonetes Gram negativos: corados pela fucsina. Fonte: Google imagens Catalase e oxidase • Catalase: positiva 2 H2O2 → 2 H2O + O2 • Oxidase: negativa + - Fonte: Google imagens Hidróxido de Potássio - KOH • KOH 3%: rompe a parede da bactéria Gram negativa e seu DNA é liberado. Fonte: <http://liaaq.ufsc.br/aulas/Gram%20complemento.PDF>; Google imagens Meios seletivos • MacConkey: cristal violeta e sais biliares – inibidores de Gram positivos; vermelho neutro – indicador de pH. • Lactose +: meio róseo, ácido. • Lactose - : meio amarelo, alcalino. Fonte: Google imagens Meios seletivos • EMB: Eosina e azul de metileno – inibem Gram positivos e são indicadores de pH; lactose e sacarose. • Fermentadores: colônias pretas ou azuladas. • Não-fermentadores: colônias transparentes. • Brilho verde metálico - E. coli Fonte: Google imagens Meios seletivos • Ágar SS: colônias rosa – fermentadores de lactose (indicador vermelho neutro); colônias transparentes – não fermentadores. Coloração negra no centro da colônia – formação de H2S (tiossulfeto de sódio e citrato férrico). • Salmonella spp. – colônia transparente com centro negro • Shigella spp. – colônia transparente Fonte: <http://biomedicinaemicro.blogspot.com.br/p/culturas-bacterianas.html> Testes bioquímicos • TSI – ágar três açúcares-ferro • SIM – sulfito, indol e motilidade • Citrato de Simmons • Gelatinase • VM – Vermelho de metila • VP – Voges-Proskauer • Urease • Nitrato Testes bioquímicos TSI Fonte: Google imagens • Fermentação de açúcares (glicose, sacarose, lactose), produção de gás e de H2S Testes bioquímicos SIM Fonte: Google imagens • H2S, Indol (Reativo de Kovacs), Motilidade. Testes bioquímicos Citrato Fonte: Google imagens • Citrato de sódio; fosfato de amônio; azul de bromotimol Testes bioquímicos Gelatinase Fonte: Google imagens Testes bioquímicos VM • Caldo MR-VP •Detecção de ácidos mistos. Fonte: Google imagens Testes bioquímicos VP via glicolítica via butilenoglicol glicose ácido pirúvico acetoína + 2 CO2 O2 + KOH acetoína diacetila catalizador complexo diacetila + alfa-naftol + arginina produto rosa a vermelho Fonte: Google imagens Testes bioquímicos Urease Fonte: Google imagens • Christensen •Detecção a enzima urease: uréia amônia. Indicador: vermelho de fenol. Testes bioquímicos Nitrato • Reativos de Griess-Ilosva (Reativo A e Reativo B) – o nitrito é evidenciado através da formação de um composto avermelhado.
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