Estudo dirigido 2 - ciclo de krebs

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Estudo dirigido 2
Faça uma dissertação descrevendo a ativação catalítica do Ciclo de Krebs em homogeneizados de músculo após a adição de intermediários dessa via. Compare com a ativação do ciclo provocada pela adição de piruvato. Explique.
Os intermediários são os substratos de um determinada reação no ciclo de Krebs, assim, a sua adição provoca a ativação catalítica desse ciclo, aumenta a velocidade, pois esses intermediários não são consumidos, e sim regenerados, sendo consumido o Acetil COA, produzindo mais CO2 do que a quantidade de carbono contida na cadeia desses intermediários. Já na adição do piruvato acontece a ativação estequiométrica, sendo três carbonos para três CO2, pois o piruvato é consumido. 
Discuta a regulação do Ciclo de Krebs
O ciclo de Krebs é regulado por elétrons alostéricos e por modificação covalente. As altas concentrações de NADH e acetil COA inativam diretamente a enzima piruvato desidrogenase por regulação alostérica e também estimulam a proteína quinase especifica, a qual fosforila e inativa o piruvato desidrogenase, diminuindo o funcionamento da fosfoproteína fosfatase, pois suas altas concentrações indicam um suprimento de energia suficiente. Essa quinase também é inativa por altas concentrações de ATP,NAD+ e piruvato, parando de fosforilar o piruvato desidrogenase, aumentando a ação da fosfatase, que remove o grupo fosfato por hidrólise, ativando o piruvato desidrogenase. 
Um dos intermediários do Ciclo de Krebs atua como um regulador da glicólise.Explique.
Esse intermediário que atua como regulador da glicólise é o citrato. Quando ele começa a acumular ele inibe a PFK, pois o aumento da glicose forma muito acetil COA, o acetil COA forma o citrato, mas em uma condição de muito NADH ou ATP a sua conversão é inibida, acumulando citrato e seu acumulo inibe a fosfofrutoquinase (principal enzima da via glicolítica). Isso porque está formando mais citrato através do acetil COA do que está sendo usdo pelo ciclo de Krebs, se está acumulando é sinal de que já tem muito citrato para as reações que utilizam para síntese de outras moléculas, como os lipídios. 
Considere a seguinte afirmativa: O Ciclo de Krebs não consome oxigênio. Portanto, ele continua ativo na sua ausência.”
Proponha em linhas gerais uma experiência para verificar a afirmativa acima. Deixe claro: as condições experimentais, o que você vai medir e discuta o resultado obtido.
Para testar a veracidade da afirmação deve ser feito dois experimentos, no qual utizamos o músculo homogeneizado de uma rã e o monômero para medir a produção de CO2 no primeiro experimento, na presença de acetil COA e O2 e no segundo, as mesmas condições, mas sem o O2. A quantidade de CO2 produzida nos dois casos determinará se a afirmação procede ou não. Isso porque o CO2 é padrão para se medir o ciclo de Krebs, pois é o produto do ciclo e não é utilizado, sendo eliminado no ar. Usar o NADH como produto da afirmação não é bom por ser usado em outras coisas. Decidir fazer o experimento com levedura não é uma boa escolha por ser produzido CO2 mas da fermentação alcoólica e a adição da glicose não é boa para ser usada como substrato desse experimento por fazer parte da via glicolítica e não é esta vista que queremos testar.