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1 AD1 – BIOLOGIA CELULAR I – 2015-1 1a Avaliação a Distância – 2015/1 Disciplina: BIOLOGIA CELULAR I Data limite para postagem da AD1 exclusivamente on line: 01/03/2015 AS RESPOSTAS SÃO INDIVIDUAIS. NÃO SERÃO ACEITAS PROVAS ENTREGUES EM PAPEL NEM ENVIADAS POR EMAIL. AS CÓPIAS DIRETAS DE PÁGINAS DA INTERNET OU DE LIVROS NÃO SERÃO ACEITAS! REDIJA SUA PRÓPRIA RESPOSTA. 1 – As grandes moléculas biológicas são polímeros formados por vários monômeros, unidos em sequência por ligações covalentes. As principais dentre estas macromoléculas estão esquematizadas abaixo. Seguindo o esquema, responda: a) qual é a subunidade formadora dos polissacarídeos? Monossacarídeos- 0,5 ponto b) que polímero é formado por aminoácidos? Proteínas- 0,5 ponto c) qual a subunidade formadora dos ácidos nucleicos? Nucleotídeos- 0,5 ponto d) em qual das macromoléculas as subunidades são presas por ligações peptídicas? Proteínas- 0,5 ponto SUBUNIDADE MACROMOLÉCULA POLISSACARÍDEO AMINOÁCIDO ÁCIDO NUCLEICO ? ? 2 AD1 – BIOLOGIA CELULAR I – 2015-1 2 – Todas as fotos abaixo mostram espermatozoides. Responda: a) Qual o tipo de microscopia usado para produzir cada uma das imagens? Imagem A: Microscopia de fluorescência 0,5 ponto; imagem B: Microscopia eletrônica de varredura 0,5 ponto; imagem C: Microscopia eletrônica de transmissão 0,5 ponto b) Sabendo que a barra de aumento em C corresponde a 0,5 m, qual o diâmetro médio da cabeça do espermatozoide? Neste item o que importa é o desenvolvimento da questão e não os números finais. Supondo que a barra tenha a medida de 1,3 cm (pode ter 0,9; 1,0; 1,1 cm, não importa), correspondendo a 0,5 micrômetros, e que o diâmetro da cabeça do espermatozoide na mesma figura tenha um tamanho de 3 cm (pode ser 2,6; 2,7; 3,1, não importa) pode-se considerar que o diâmetro da cabeça do espermatozoide seja igual a 1,15 micrômetros, por exemplo. Cálculo: 1,3 cm – 0,5 micrômetros 3 cm – X micrômetros X = 0,5 x 3 / 1,3 X= 1,15 micrômetros 1,0 ponto para a demonstração correta da regra de três. c) Considerando que o tamanho da cabeça do espermatozoide se mantenha em todas as preparações mostradas, que tamanhos deveriam ter as barras de aumento das imagens A e B? Não é preciso colocar a barra, apenas mencionar a medida. Basta que o aluno aplique a regra de três novamente. Figura A: Se a cabeça do espermatozóide mede 1,3 micrômetros (ou o resultado que deu na regra de três da resposta anterior) e na figura A mede 0,6 cm (ou um número próximo); logo: 0,6 cm ----- 1,3 micrômetros X ----- 0,5 micrômetros x = 0,23 cm. A barra deveria medir 0,23 cm (ou algo próximo) 0,5 ponto Figura B: Se a cabeça do espermatozoide mede 1,3 micrômetros e na figura B mede 1,6 cm (ou um número próximo); logo: 3 AD1 – BIOLOGIA CELULAR I – 2015-1 1,6 cm ----- 1,3 micrômetros X ----- 0,5 micrômetros x = 0,61 cm. A barra deveria medir 0,61 cm ( ou algo próximo) 0,5 ponto 3- Um pesquisador trabalha com uma doença autoimune, em que as células do fígado do paciente são atacadas por anticorpos produzidos por seu próprio sistema imune. Para buscar uma maneira de controlar a doença, o pesquisador desenvolve estudos com os materiais de que dispõe: o soro do paciente, uma cultura de hepatócitos do paciente obtida a partir uma biopsia, soro humano normal, culturas de hepatócitos normais. No Instituto em que trabalha, há possibilidade de usar vários equipamentos, além de reagentes de uso comum. Como ele faria para: a) saber se os anticorpos reconhecem todos os hepatócitos do paciente ou só alguns? Nesse caso, qual a porcentagem dos hepatócitos afetados? Poderia ser realizado um ensaio por fluorescência (ou imunoenzimático), em que colocaria a cultura dos hepatócitos do paciente, fixada em contato com o soro do paciente, em seguida adicionaria anticorpo secundário anti-humano conjugado a fluorocromos (ou o substrato da enzima). Se os anticorpos do paciente (Soro) reconhecerem os hepatócitos e se ligam a eles, a reação antígeno-anticorpo poderia ser detectada. A visualização da reação poderia ser A B C 4 AD1 – BIOLOGIA CELULAR I – 2015-1 por microscopia de fluorescência (ou campo claro/óptica para os ensaios imunoenzimáticos). Até aqui 0,5 ponto. Para complementar, poderia colocar o soro do paciente com hepatócitos normais (de outro doador) e verificar se a reação ocorreria. E também o soro de um doador (normal) com os hepatócitos do paciente. Ambos usados como grupos controle para verificar se os anticorpos do paciente reagiriam aos hepatócitos do mesmo. Se mencionar os controles + 0,5 ponto Para calcular o percentual de hepatócitos afetados, é necessário contar o total de células por campo do microscópio e destas quantas são positivas. Nos cálculos considerar o total de células como 100% e as células reconhecidas pelos anticorpos como a porcentagem a ser calculada. O mesmo cálculo pode ser feito por citometria de fluxo, com a vantagem de a amostra ser bem mais numerosa. + 0,5 ponto para a explicação do percentual. b) saber qual estrutura celular os anticorpos do paciente reconhecem? Para saber qual estrutura celular que os anticorpos do paciente reconhecem é preciso utilizar anticorpos secundários (anti-humano) conjugados a ouro coloidal, que reconheceriam a marcação feita com o soro do paciente. E posteriormente observar por microscopia eletrônica de transmissão 1,0 ponto. Realizar os controles com o soro normal e hepatócitos normais +0,5 Também podemos aceitar a microscopia de fluorescência, mas nesse caso deve haver uma marcação dupla utilizando sondas fluorescentes que marquem especificamente organelas, as identificando. c) saber quantas proteínas são reconhecidas pelos anticorpos? qual seu peso molecular? Para o estudo de proteínas, aplicar a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS, que separaria as proteínas por peso molecular. Em seguida, realizaria a técnica de Western Blotting, transferindo as proteínas do gel de eletroforese para uma membrana de nitrocelulose. A essa membrana aplicaria o soro do paciente que irá reagir com as proteínas celulares. 1,0 ponto A seguir, aplicaria um anticorpo secundário conjugado com uma enzima (reação enzima + substrato), em que seria possível revelar a reação (com cor) e indicar o peso molecular proteína que o anticorpo reconheceu através da comparação com padrões de peso molecular (proteínas de peso molecular conhecido que são aplicadas também no mesmo gel). +0,5 ponto para qualquer detalhamento.
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