simulado plataformas moleculares 1

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(Fiocruz, 2010): Sobre a utilização da técnica de PCR com a finalidade de diagnóstico molecular, analise as afirmativas a seguir.
I. Uma vez que na reação de PCR se utiliza uma DNA Polimerase dependente de DNA, somente os vírus cujo genoma é constituído por DNA podem ser detectados pela técnica de PCR.
II. É possível detectar microorganismos diferentes em uma mesma reação de PCR, desde que se utilize na reação pares de iniciadores específicos para cada microorganismo que se queira detectar.
III. A utilização da técnica de PCR para diagnóstico molecular terá sempre e somente caráter qualitativo.
Assinale:
	
	
	
	se somente a afirmativa II estiver correta;
	
	
	se todas as afirmativas estiverem corretas.
	
	
	se somente a afirmativa III estiver correta;
	
	
	se somente as afirmativas I e II estiverem corretas;
	
	
	se somente a afirmativa I estiver correta;
	
Explicação:
É possível detectarmos patógenos cujo genoma seja RNA através de RT-PCR, ou seja, transcrição reversa acoplada à PCR. Também podemos quantificar o nosso alvo através da PCR em tempo real ou, indiretamente, mensurar aproximadamente a sua quantidade através de gel de agarose, reagente Low mass e sistema de coloração adequado para análise dos amplicons.
	
	
	
	 
		
	
		2.
		(INMETRO, 2010): A técnica de PCR (reação em cadeia de polimerase), a mais utilizada para amplificação (clonagem) do DNA in vitro, revolucionou o acesso a informações genéticas. Com relação a essa técnica, assinale a opção correta:
	
	
	
	Na PCR, os primers (iniciadores) se hibridam com moléculas de DNA fita dupla;
	
	
	A PCR também pode ser aplicada na análise de proteínas;
	
	
	A PCR necessita ser acompanhada de um método de purificação para separar o fragmento amplificado do restante do genoma.
	
	
	Com a PCR, a enzima Taq polimerase é capaz de manter sua atividade mesmo nas altas temperaturas necessárias para desnaturar a molécula de DNA;
	
	
	Com a PCR, a clonagem molecular necessita de 48 a 72 horas para ser executada;
	
Explicação:
Os primers só são capazes de hibridizar na molécula de DNA após a sua desnaturação. A PCR é utilizada apenas para análise de ácidos nucleicos. É executada em 2h aproximadamente. Não é necessário purificar o fragmento amplificado do resto do genoma.
	
	
	
	 
		
	
		3.
		(Fiocruz, 2010): A retrotranscrição de RNA genômico viral em moléculas de DNA complementar para a sua detecção por técnica de PCR é denominada:
	
	
	
	RT-PCR;
	
	
	microscopia ótica;
	
	
	sequenciamento.
	
	
	Imunoperoxidase;
	
	
	PCR em tempo real;
	
Explicação:
Do inglês: Reverse transcription polymerase chain reaction.
	
	
	
	 
		
	
		4.
		(UFRJ, 2012): Para uma reação de PCR ocorrer corretamente, são necessários os seguintes componentes:
	
	
	
	uma polimerase de DNA termoestável, desoxirribonucleotídeos trifosfatados, dois pares de iniciadores e um molde de ácido nucleico;
	
	
	uma polimerase de DNA termoestável, desoxirribonucleotídeos trifosfatados, um par de iniciadores e um molde de DNA.
	
	
	uma polimerase de DNA termolábil, desoxirribo-nucleotídeos trifosfatados, um iniciador e um molde de RNA;
	
	
	uma polimerase de DNA termolábil, desoxirribonucleotídeos trifosfatados, um par de iniciadores e um molde de ácido nucleico;
	
	
	uma polimerase de DNA termoestável, desoxirribonucleosídeos, um par de iniciadores e um molde de DNA;
	
Explicação:
A polimerase deve ser termoestável para aguentar as oscilações de temperatura a que será submetida no termociclador. Desoxirribonucleosídeos não possuem grupamento fosfato, e portanto, não são considerados monômeros úteis para a polimerização. Apenas um iniciador não será capaz de delimitar a região de amplificação. Um molde de RNA só é utilizado em reações de RT-PCR, ou seja, reações de transcrição reversa acopladas à PCR.
	
	
	
	 
		
	
		5.
		(PC, PI, 2018) - Em investigações criminais, alguns fios de cabelo, células da pele, sangue ou outros fluidos corporais podem ser deixados no local e o DNA recolhido a partir dessas amostras tem a capacidade de indicar a solução do crime. Muitas vezes a quantidade de DNA disponível para análise é limitada, contudo com a técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR), o menor vestígio de DNA encontrado pode ser amplificado, aumentando a quantidade de material e proporcionando o suficiente para traçar o perfil genético e assim garantir a análise. A respeito da técnica de PCR, assinale a opção correta:
	
	
	
	As etapas utilizadas para realizar a PCR são a desnaturação, extensão (Taq polimerase) e anelamento (primers) nesta ordem;
	
	
	Atualmente, devem-se adicionar enzimas de polimerização a cada etapa de desnaturação.
	
	
	Para realizar a PCR é necessário utilizar apenas o DNA a ser amplificado, Taq polimerase e nucleotídeos (dNTPs);
	
	
	A PCR convencional permite a quantificação dos produtos por meio de fluorescência;
	
	
	Na PCR convencional, o resultado é comumente analisado por meio de uma eletroforese em gel de agarose ou de poliacrilamida;
	
Explicação:
A Taq polimerase só pode realizar a extensão da nova fita de DNA se houver o anelamento prévio dos primers na fita molde. Uma solução tampão contendo íons e o par de iniciadores também são necessários para a viabilização da reação de PCR. A PCR convencional em si não permite a quantificação dos produtos por fluorescência como a PCR em tempo real, embora indiretamente possamos alcançar uma quantificação indireta por meio de gel de agarose, reagente Low mass, e sistemas de coloração para a análise dos amplicons.
	
	
	
	 
		
	
		6.
		(POLÍCIA CIENTÍFICA, PE, 2016) - Acerca da reação em cadeia da polimerase (PCR), assinale a opção correta:
	
	
	
	Os iniciadores são pequenos fragmentos sintéticos de DNA de fita dupla, usualmente com extremidade 3'-OH, e complementares à sequência do segmento de DNA de interesse;
	
	
	A reação de PCR é dependente da atividade de cópia de fragmentos de DNA, catalisada pela enzima DNA sintetase;
	
	
	A enzima termoestável direciona o posicionamento dos precursores de DNA ― dNTP ― iniciando a síntese de novas fitas de DNA. A temperatura ideal para a polimerização varia entre 25 ºC e 45 ºC;
	
	
	O último passo da PCR, a polimerização, é a excisão da fita de DNA no sentido 3'→5', começando no primeiro nucleotídeo do primer iniciador incorporado;
	
	
	PCR é a tecnologia por meio da qual são produzidos bilhões de cópias de fragmentos de DNA. Os fragmentos do DNA amplificado pela PCR são chamados amplicons e podem ser tipificados usando-se diferentes métodos.
	
Explicação:
A enzima é chamada DNA polimerase. Os iniciadores são moléculas fita-simples com a extremidade 3´OH livre, complementares às bordas do fragmento de interesse. A fita de DNA molde lida no sentido 3´--> 5´ não é removida após a polimerização/extensão da fita nascente no sentido 5´ --> 3´ na última etapa de um ciclo de PCR. Na ciclagem subsequente, esse DNA hídrido será desnaturado, disponibilizando ambas as fitas como molde para novas reações de polimerização. O estabelecimento dos dNTPs a serem incorporados pela enzima termoestável se dá pela fita de DNA molde, em função da complementariedade de bases. A temperatura ideal de polimerização varia entre 50-55°C.
	
	
	 
	
	 1a Questão
	
	
	
	
	Na técnica de extração de ácidos nucleicos (DNA/RNA), quais os reagentes que podem ser utilizados?
		
	 
	Todas as alternativas estão corretas;
	
	Partículas de sílica e tiocianato de guanidina;
	
	Etanol 70% e isopropanol;
	
	Fenol e clorofórmio;
	
	Todas as alternativasestão erradas.
	
Explicação:
Todos os ítens listados podem ser utilizados para viabilizar a técnica de extração de acidos nucleicos.
	
	
	 
	
	 2a Questão
	
	
	
	
	(SESAU, 2010): O RNA difere quimicamente do DNA por apresentar:                                         
		
	
	ribonucleotídeos e possuir a base timina.
	
	desoxirribonucleotídeos e por possuir a base timina;
	 
	ribonucleotídeos e por possuir a base uracila;
	
	desoxirribonucleotídeos e possuir a base uracila;
	
	ribonucleotídeos e possuir as bases timina e uracila;
	
Explicação:
Desoxirribonucleotídeos e a base nitrogenada timina são encontrados apenas no DNA.
	
	
	 
	
	 3a Questão
	
	
	
	
	(IGP, 2008): Analise as afirmações abaixo sobre a estrutura e composição dos ácidos nucléicos.               
I Quatro aspectos principais definem a estrutura da molécula de DNA: a dupla-hélice, o diâmetro uniforme, o giro para a direita e o antiparalelismo.
II Considerando a regra de Chargaff, A+G = T+C; já a razão A+T para G+C varia entre as espécies.
III As ligações químicas existentes entre as bases nitrogenadas são de hidrogênio, já as ligações entre o açúcar e a base nitrogenada são do tipo fosfodiéster.
IV Um nucleosídeo é composto por um açúcar e uma base nitrogenada, já um nucleotídeo é composto por um açúcar, uma base nitrogenada e um grupamento fosfato.
 
Quais estão corretas?
		
	
	Apenas a I, a II e a III;
	
	Apenas a I e a II;
	
	A I, a II, a III e a IV.
	 
	Apenas a I, a II e a IV;
	
	Apenas a III e a IV;
	
Explicação:
As ligações químicas estabelecidas entre as bases nitrogenadas de ambas as fitas de DNA são do tipo pontes de hidrogênio, enquanto as ligações químicas estabelecidas entre o açúcar e a base nitrogenada são as ligações n-glicosídicas..
	
	
	 
	
	 4a Questão
	
	
	
	
	Identifique as principais etapas do protocolo de extração de ácidos nucleicos:
		
	
	Hidratação, Purificação, Lise celular e Precipitação.
	
	Precipitação, lise celular, purificação e Hidratação.
	
	Lise celular, Hidratação, Precipitação e Purificação;
	 
	Lise celular, Purificação, Precipitação e Hidratação;
	
	Hidratação, Lise celular, Purificação e Precipitação;
	
Explicação:
A extração de ácidos nucleicos envolve etapas sequenciais de ruptura celular e exposição do ácido nucleico, seguida da purificação do material de interesse com a remoção de contaminantes. Em seguida, realiza-se a precipitação do alvo e consequente hidratação do mesmo.
	
	
	 
	
	 5a Questão
	
	
	
	
	(IFF, Farroupilha-RS, 2016): O processo de extração e a purificação do DNA genômico compreende vários passos:
		
	
	Quebra de lipídeos, precipitação do RNA e lise das proteínas;
	
	Lise das células, centrifugação e ressuspensão do DNA;
	 
	Lise das células, extração das proteínas mais RNA e precipitação do DNA;
	
	Lise das células, extração de lipídeos e desoxiribonucleicos e precipitação do DNA.
	
	Lise das células, extração de ácidos desoxiribonucleicos e precipitação do RNA;
	
Explicação:
O processo de extração de DNA envolve etapas sequenciais de rompimento celular e exposição do ácido nucleico, remoção dos contaminantes de proteínas e RNA, culminando com a precipitação final do DNA de interesse. 
	
	
	 
	
	 6a Questão
	
	
	
	
	São exemplos de ácidos nucleicos:
		
	
	Monossacarídeos e dissacarídeos;
	
	Adenina e guanina;
	
	Timina e uracila.
	 
	DNA e RNA;
	
	Proteínas e lipídios;
	
Explicação:
As demais alternativas fornecem exemplos de outras macromoléculas ou bases nitrogenadas.
	
	
		Prezado (a) Aluno(a),
Você fará agora seu TESTE DE CONHECIMENTO! Lembre-se que este exercício é opcional, mas não valerá ponto para sua avaliação. O mesmo será composto de questões de múltipla escolha.
Após responde cada questão, você terá acesso ao gabarito comentado e/ou à explicação da mesma. Aproveite para se familiarizar com este modelo de questões que será usado na sua AV e AVS.
	
	 
		
	
		1.
		(Prefeitura de Barra Mansa, RJ, 2010) - Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. Em relação à eletroforese em gel é correto afirmar que:
	
	
	
	Na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;
	
	
	as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de menor massa situam-se na porção superior do gel e as de maior massa na porção inferior;
	
	
	após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluoresce (torna-se visível) vivamente em contato com a luz infra-vermelha.
	
	
	as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de maior massa situam-se na porção superior do gel e as de menor massa na região inferior;
	
	
	na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA positivamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;
	
Explicação:
O DNA possui carga negativa, o que faz com que a migração ocorra do polo negativo (repulsão) em direção ao polo positivo (atração). A facilidade com que isso ocorre depende do tamanho das partículas. As maiores ficam atrasadas na trama do polímero, e são retardadas na migração, fazendo com que ocupem posições superiores no gel. Para a revelação do resultado, é necessário excitar o brometo de etídeo com luz UV.
	
	
	
	 
		
	
		2.
		(SESAU, RO, 2017) - Técnica baseada na separação de partículas em um determinado gel de acordo com sua massa e carga. Pode ser utilizada para separação de diversas moléculas orgânicas, como lipoproteínas, proteínas, RNA e DNA. A técnica de separação descrita no texto é denominada:
	
	
	
	floculação;
	
	
	centrifugação;
	
	
	filtração;
	
	
	cromatografia.
	
	
	eletroforese;
	
Explicação:
As demais técnicas citadas não envolvem a utilização de campo elétrico para a separação das partículas em função de seus respectivos pesos moleculares.
	
	
	
	 
		
	
		3.
		(Adaptada de UFMG, 2013) - Em relação à espectrofotometria, é incorreto afirmar que:
	
	
	
	a luz visível para o olho humano é a região do espectro eletromagnético com comprimento de onda entre 390 e 780 nm;
	
	
	a energia é transmitida por ondas eletromagnéticas que são caracterizadas pela frequência e comprimento de onda;
	
	
	a espectrofotometria é a medida da intensidade da luz em comprimentos de onda selecionados;
	
	
	a absorvância é a capacidade de uma substância em absorver ou transmitir radiação;
	
	
	a espectrofotometria permite estimar a concentração de soluções.
	
Explicação:
Absorbância e transmitância são conceitos não sinônimos e inversamente proporcionais; isto é, quanto maior a absorbância, menor a transmitância, e vice-versa.
	
	
	
	 
		
	
		4.
		(Adaptada de IF, RN, 2017) - Entre as técnicas usadas na biotecnologia:
	
	
	
	a biobalística usa microprojéteis revestidos com DNA para identificar trechos que se repetem no DNA;
	
	
	na técnica do DNA recombinante, utilizam-se as endonucleases e a Taq polimerase para unir as duas fitas de DNA;
	
	
	a eletroforese é usada para separar fragmentos de DNA de tamanhos diferentes a partir de corrente elétrica;
	
	
	Nenhuma das alternativas acima.
	
	
	na reação em cadeia da polimerase (PCR), utiliza-se a DNA helicase para separar as fitas de DNA a 94° C;
	
Explicação:
Natécnica de PCR, promovemos a desnaturação das fitas de DNA através de processo térmico, e não enzimático. Na técnica de DNA recombinante, além de endonucleases, utilizamos as DNA ligases para promover o restabelecimento das ligações químicas. A biobalística corresponde a uma estratégia de transferência gênica/transformação de organismos.
	
	
	
	 
		
	
		5.
		(Polícia Científica, PE, 2016): A respeito de eletroforese, uma metodologia amplamente empregada para separação, isolamento, análise e manipulação dos ácidos nucleicos, assinale a opção correta:
	
	
	
	A eletroforese consiste na migração das partículas de uma solução coloidal sob a influência de um campo magnético onde a polaridade negativa atrai as moléculas;
	
	
	A identificação dos fragmentos amplificados de DNA não pode ser realizada em gel de poliacrilamida;
	
	
	A eletroforese em gel de agarose é usada para separar proteínas de tamanhos diferentes, que podem ser detectadas por fluorescência;
	
	
	A quantificação de DNA em gel de agarose é uma técnica de menor precisão, comparada a eletroforese em acrilamida, sendo utilizada como instrumento para averiguação de êxito na etapa de extração;
	
	
	Os ácidos nucleicos possuem uma carga geral total positiva, devido aos seus grupamentos fosfato do arcabouço e, consequentemente, quando aplicados em um gel de agarose ou poliacrilamida, migram em direção ao ânodo.
	
Explicação:
A eletroforese em gel de agarose destina-se apenas a ácidos nucleicos, enquanto a eletroforese em gel de poliacrilamida pode ser empregada para ácidos nucleicos e proteínas. Na técnica de eletroforese, graças à aplicação de campo elétrico, as partículas são induzidas a migrar no polímero. O movimento das partículas é determinado em função da repulsão do pólo negativo uma vez que, em função dos seus respectivos grupamentos fosfato, o DNA possui cargas semelhante.
	
	
	
	 
		
	
		6.
		(FIOCRUZ, 2010) - Analise as afirmativas a seguir:
I. A eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial.
II. A eletroforese em gel é utilizada para separar proteínas e moléculas de DNA e RNA.
III. Existem vários tipos de eletroforese em gel para analisar proteínas durante o processo de purificação. Entre elas, estão a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil de sódio sulfatado (SDS-PAGE), a eletroforese em gel de poliacrilamida não desnaturante (Native PAGE) e o gel em duas dimensões.
Assinale:
	
	
	
	se apenas a afirmativa II estiver correta;
	
	
	se apenas as afirmativas I e III estiverem corretas.
	
	
	se apenas a afirmativa III estiver correta;
	
	
	se apenas a afirmativa I estiver correta;
	
	
	se apenas as afirmativas I e II estiverem corretas;
	
Explicação:
A eletroforese bidimensional não é utilizada para avaliação do grau de pureza, mas sim para a separação simultânea de um conjunto de proteínas presentes em uma amostra, através da diferença entre seus pesos moleculares e pontos isoelétricos.
		1.
		(Fiocruz, 2010) - Assinale a afirmativa incorreta:
	
	
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, quanto maior for a quantidade de DNA alvo presente em uma dada amostra um menor número de ciclos de PCR será necessário para se obter uma quantidade de fluorescência a partir desta dada amostra acima do ruído de fundo do aparelho (Ct);
	
	
	É a curva de dissociação obtida ao final da corrida de PCR em Tempo - Real que permite a verificação da especificidade da amplificação obtida;
	
	
	A técnica de PCR em Tempo - Real é mais sensível que a técnica de PCR convencional.
	
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, a utilização de sondas marcadas com fluoróforos permite a realização de reações multiplex;
	
	
	A metodologia de PCR em Tempo - Real é a única metodologia de PCR quantitativo existente;
	
Explicação:
A metodologia de PCR digital corresponde a um avanço da metodologia de PCR em tempo real, permitindo a quantificação de ácidos nucleicos com grande sensibilidade e dispensando a necessidade de curva-padrão.
	
	
	
	 
		
	
		2.
		(PC, DF, 2012) - O propósito da PCR é fazer um número imenso de cópias de um determinado fragmento gênico, cujo tamanho pode variar de poucos pares de base até milhares de pares de base. A PCR é constituída de três ciclos. Assinale a alternativa que apresenta esses ciclos:
	
	
	
	fase de desnaturação, fase de extensão ou anelamento e fase de fixação;
	
	
	fase de desnaturação, fase de fixação e fase de hibridização ou anelamento;
	
	
	fase de desnaturação, fase de hibridização e fase de fixação ou anelamento;
	
	
	fase de desnaturação, fase de hibridização ou anelamento e fase de extensão;
	
	
	fase de desnaturação, fase de captação e fase de extensão.
	
Explicação:
As fases de fixação e captação não fazem parte da reação de PCR. Além disso, só é possível a fase de extensão se, na fase imediatamente anterior, houver a hibridização ou anelamento dors primers com a fita molde.
	
	
	
	 
		
	
		3.
		(Fiocruz, 2010): A técnica de PCR em tempo real permite ao usuário detectar, diferenciar variantes virais e quantificar ácidos nucléicos provenientes de uma infecção viral em uma única reação em tempo real, enquanto o PCR convencional basicamente permite apenas a detecção de ácidos nucléicos em uma única reação. De acordo com a frase acima, assinale a afirmativa correta:
	
	
	
	Está parcialmente errada, uma vez que é possível quantificar em tempo real o PCR convencional;
	
	
	Está parcialmente errada, uma vez que também é possível distinguir diferentes variantes virais no PCR convencional em uma única reação (por exemplo, PCR multiplex);
	
	
	Está parcialmente errada, uma vez que não é possível diferenciar ácidos nucléicos no PCR em tempo real;
	
	
	Está parcialmente errada, uma vez que não é possível quantificar ácidos nucléicos por PCR em tempo real.
	
	
	Está totalmente correta;
	
Explicação:
O PCR multiplex permite a amplificação de dois ou mais alvos genômicos na mesma reação de PCR.
	
	
	
	 
		
	
		4.
		(INCA, 2014): Um oligonucleotídeo de DNA curto utilizado para amplificação por PCR é adequadamente chamado de:
	
	
	
	vetor.
	
	
	primer;
	
	
	sonda;
	
	
	inserto;
	
	
	polimerase;
	
Explicação:
As sondas são utilizadas para a detecção de ácidos nucleicos. Insertos correspondem a pequenos fragmentos de DNA os quais são clonados em plasmídeos ou vetores, utilizados para a transferência de material genético. A polimerase é a enzima responsável pela amplificação do ácido nucleico.
	
	
	
	 
		
	
		5.
		(INCA, 2014): Qual afirmação descreve com precisão o processo de PCR?
	
	
	
	A reação de PCR amplifica geometricamente um fragmento de DNA.
	
	
	Os produtos de PCR são inibidores da reação em cadeia da polimerase;
	
	
	A reação de PCR requer um tipo especial de enzima de restrição;
	
	
	O peso molecular do fragmento de DNA não é diagnóstico de especificidade de um PCR;
	
	
	É necessário um par de primers para a amplificação de um fragmento de DNA;
	
Explicação:
Os produtos de uma etapa da reação de PCR servem como substrato para as etapas subsequentes. Não é necessário utilizar enzima de restrição para essa metodologia. O uso de pesos moleculares auxilia na deteção de amplificações inespecíficas. A amplificação é considerada exponencial.
	
	
	
	 
		
	
		6.
		(UFES, 2015): Considere as seguintes afirmações sobre a reação em cadeia da DNA polimerase(PCR):
 
I. Segmentos específicos de DNA podem ser facilmente amplificados a milhões de cópias.
II. A PCR pode ser utilizada em medicina forense e diagnósticos clínicos. Produtos da reação de PCR podem ser usados em clonagem.
III. A PCR utiliza uma DNA-polimerase termoestável, porque, para cada etapa de amplificação, o DNA de fita dupla deve ser desnaturado pelo calor.
 
É correto o que se afirma em:
	
	
	
	I apenas;
	
	
	I e II apenas;
	
	
	II e III apenas;
	
	
	I, II e III.
	
	
	II apenas;
	
Todas as afirmativas estão corretas.
Atividade
1. FIOCRUZ (2010): A retrotranscrição de RNA genômico viral em moléculas de DNA complementar para a sua detecção por técnica de PCR é denominada:
a) PCR em tempo real.
b) RT-PCR.
c) Imunoperoxidase.
d) Microscopia ótica.
e) Sequenciamento.
Gabarito comentado
Parabéns! Você acertou!
A resposta correta é a alternativa B. RT-PCR significa transcrição reversa (RT) acoplada à reação de PCR.
2. FIOCRUZ (2010): Entre as técnicas moleculares para diagnóstico viral, as listadas a seguir fazem uso de gel de agarose ou poliacrilamida para revelar a presença de material genético, exceto:
a) PCR.
b) RFLP.
c) PCR em Tempo Real.
d) Northern blot.
e) Southern blot.
Gabarito comentado
Infelizmente, você errou!
A resposta correta é a alternativa C. O PCR em Tempo Real utiliza fluorescência como método de revelação do resultado.
3. SEDUCE-GO (2010): Durante a intérfase, o DNA pode atuar de duas maneiras. Observe o esquema a seguir:
Os processos representados pelos números 1, 2 e 3 são, respectivamente:
a) Conjugação, tradução e transcrição.
b) Transcrição, replicação e duplicação.
c) Duplicação, conjugação e transformação.
d) Replicação, transcrição e tradução.
e) Tradução, transcrição e replicação.
Gabarito comentado
Infelizmente, você errou!
A resposta correta é a alternativa D. O fluxograma indica o dogma central da biologia molecular, em que o DNA se autorenova por replicação, e é temporariamente codificado em RNA na transcrição para, posteriormente, ser expresso em proteína na tradução.
4. PC-RJ (2013): A técnica de PCR (reação em cadeia de polimerase) em tempo real revolucionou o processo de quantificação de fragmentos de DNA. Ela realiza a quantificação desses ácidos nucleicos de maneira precisa e com maior reprodutividade. Assinale o fator que permite essa quantificação:
a) O sequenciamento de DNA.
b) A eletroforese.
c) A fluorescência.
d) Os marcadores STRs.
e) O termociclador.
Gabarito comentado
Infelizmente, você errou!
A resposta correta é a alternativa C. A metodologia utiliza sondas ou corantes fluorescentes.
5. Fundação Saúde RJ (2014): Avaliando uma reação de PCR quantitativo, o parâmetro conhecido como CT significa:
a) Limiar de detecção.
b) Centro de temperatura.
c) Ciclo de transição.
d) Ciclo que atinge o limiar de detecção.
e) Ciclo de temperatura.
Western blot
Atividade
1. UFPI (2013) — A eletroforese em gel é uma das principais ferramentas de trabalho no campo da biologia molecular e tem sido utilizada no estudo de proteínas, DNA e RNA. Marque a opção que apresente técnicas de biologia molecular que analisam, respectivamente, proteínas, DNA e RNA:
a) Western blot, Southern blot e Northern blot.
b) Southern blot, Northern blot e Western blot.
c) Northern blot, Southern blot e Western blot.
d) Western blot, Northern blot e Southern blot.
e) Southern blot, Western blot e Northern blot.
Gabarito
Infelizmente, você errou!
A resposta correta é a alternativa A. A técnica originalmente descrita foi a de Southern blot para a pesquisa de DNA. Em seguida, Northern blot para a pesquisa de RNA e, por fim, Western blot para investigação de proteínas.
2. UFTM (2016): A eletroforese é uma técnica muito utilizada nos laboratórios de bioquímica, com a finalidade de acompanhar a purificação, a expressão e o isolamento de proteínas para análise por espectrometria de massa ou determinar a massa molecular (Mr) da proteína. Analise as afirmações a seguir e escolha a alternativa correta:
a) A separação eletroforética de proteínas é comumente realizada empregando-se géis de agarose, os quais possuem alta capacidade de resolução.
b) Eletroforese descreve a migração de uma partícula carregada sob influência de um campo elétrico.
c) A eletroforese desnaturante separa as proteínas com relação à sua carga e forma.
d) Em um gel SDS-PAGE, as proteínas com maior massa molecular (Mr) são encontradas na parte inferior do gel.
e) Todas as alternativas estão certas.
Gabarito
Infelizmente, você errou!
A resposta correta é a alternativa B. Em (A), a separação eletroforética de proteínas é comumente realizada empregando-se géis de poliacrilamida. Em (C), a eletroforese desnaturante visa desfazer qualquer tipo de interferência na migração das moléculas, linearizando-as, e permitindo que sejam separadas em função dos seus diferentes pesos moleculares, e graças à carga elétrica. Em (D), as proteínas com maior massa molecular são encontradas na parte superior do gel SDS-PAGE, por ficarem retidas na trama do gel.
Atividade
3. PC-ES (2011) — A tecnologia do DNA recombinante abrange várias técnicas passíveis de serem utilizadas na identificação humana. Com relação a essas técnicas, responda se a sentença está certa ou errada.
“A técnica de Western blot consiste na análise de sequências de RNA cortados por enzimas de restrição.”
a) Certo
b) Errado
Gabarito
Infelizmente, você errou!
A alternativa correta é a letra b. A sentença está errada. A técnica de Western blot consiste na análise de transferência e hibridização de proteínas. O enunciado misturou a detecção de sequências de RNA que ocorre no Northern blot, com o uso de enzimas de restrição que ocorre no Southern blot.
Um pouco mais de conhecimento
As técnicas de blotting são úteis em biologia molecular, mas podem apresentar algumas limitações como qualquer ferramenta empregada em diagnóstico e pesquisa.
No caso de ácidos nucleicos
Elas dependem de um conhecimento prévio da sequência de interesse para o desenho da sonda complementar de hibridização.
No caso de proteínas
Elas dependem da disponibilidade de anticorpos primários dirigidas contra elas mesmas, e podem necessitar de novos anticorpos dirigidos contra os resíduos associados às modificações pós-tradicionais.
As técnicas de hibridização Southern blot e Northern blot perdem em sensibilidade para as técnicas de amplificação de ácidos nucleicos, como a reação em cadeia da polimerase (PCR) e o PCR em tempo real, por isso, a escolha pelas metodologias de blotting acaba não sendo a preferencial.
Atividade
4. UFES (2016) — Uma mutação que gera um códon de parada prematuro na sequência de DNA de um gene causará nos géis de Southern blot, Northern blot e Western blot, respectivamente, os seguintes resultados:
a) Banda mais alta, banda mais baixa, banda não varia.
b) Banda não varia, banda mais alta, banda mais alta.
c) Banda não varia, banda não varia, banda mais baixa.
d) Banda mais baixa, banda mais baixa, banda mais alta.
e) Banda mais baixa, banda não varia, banda não varia.
Gabarito
Infelizmente, você errou!
A resposta correta é a alternativa C. Uma mutação que gere um códon de parada (UAG, UGA e UAA) representa uma interrupção prematura na cadeia polipeptídica de uma proteína. Desse modo, ela apresentará um peso molecular menor do que original, fazendo com que migre com mais facilidade pelo gel de eletroforese. Portanto, ocupará uma posição mais baixa que a banda original da proteína. A mutação não gera, entretanto, mudança no tamanho dos fragmentos de DNA gerados pelas enzimas de restrição, nem no seu respectivo transcrito de RNA.
5. Adaptada de UFBA (2013) – Com relação às técnicas de blotting, responda se a sentença está certa ou errada:
“O bloqueio dos sítios inespecíficos é uma etapa importante e deve ser realizada antes da incubação do anticorpo primário.”
a) Certo
b) Errad
		.
		(Adaptada de UFG, 2017): Aidentificação e quantificação de moléculas específicas em células e tecidos pode ser realizada pela interação antígeno-anticorpo. Qual metodologia utiliza dessa interação para identificação molecular?
	
	
	
	espectrofotometria;
	
	
	qRT-PCR;
	
	
	Western Blot;
	
	
	espectrometria de massa;
	
	
	Nenhuma das alternativas acima.
	
Explicação:
As demais metodologias citadas não envolvem interação antígeno x anticorpo.
	
	
	
	 
		
	
		2.
		(Adaptada de INCA, 2010): A respeito dos testes sorológicos, complete a lacuna a seguir:
"_______________ é uma técnica sorológica que detecta a presença de anticorpos específicos contra o HIV."
	
	
	
	PCR;
	
	
	Southern Blot;
	
	
	Clonagem;
	
	
	Western Blot.
	
	
	Northern Blot;
	
Explicação:
Western blot é a técnica de hibridização utilizada para a detecção de proteínas.
	
	
	
	 
		
	
		3.
		Considerando os princípios das técnicas de hibridização e suas aplicações dentro da biologia molecular, assinale a alternativa correta:
	
	
	
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Northern Blotting;
	
	
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Southern Blotting;
	
	
	Não existe técnica de hibridização capaz de avaliar expressão gênica.
	
	
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Western Blotting;
	
	
	Southern, Northern e Western Blotting podem ser utilizadas para estudos envolvendo expressão gênica;
	
Explicação:
A técnica de Northern blot corresponde a uma técnica de hibridização de moléculas de RNA com sondas de oligonucleotídeos marcadas. Trata-se de uma metodologia útil, portanto, na detecção de RNA mensageiro (RNAm), nos estudos de expressão gênica, na avaliação da degradação de RNA e splicing, por exemplo.
	
	
	
	 
		
	
		4.
		(FGV, 2010): Num estudo para verificar se a espécie "A" de bactéria apresenta e expressa um gene similar ao gene tox da espécie "B", seria correto afirmar que:
	
	
	
	uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada com DNA total, indicaria que um DNA similar a este gene está presente em "A" sem informação sobre transcrição ou tradução do mesmo;
	
	
	uma hibridação tipo Western-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que um DNA similar a este gene está presente no genoma da espécie "A".
	
	
	uma hibridação tipo Northern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de RNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é traduzido na espécie "A";
	
	
	uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é expresso na espécie "A";
	
	
	a obtenção de um produto de PCR amplificado a partir de iniciadores para tox da espécie "B" comprova a presença de um gene tox sendo expresso na espécie "A";
	
Explicação:
A obtenção de produtos de PCR amplificados utilizando-se iniciadores para tox apenas detecta a presença do gene, assim como a hibridização por Southern Blot. Para avaliação da expressão gênica por hibridização, seria necessário realizar a técnica de Northern Blot. Para avaliação da tradução do gene por técnica de hibridização, seria necessária a realização de Western Blot.
	
	
	
	 
		
	
		5.
		(UFRJ, 2013): Selecione a opção que contém as etapas necessárias para execução do protocolo de Western blotting:
	
	
	
	Transferência do DNA do gel para membrana; incubação com sonda hibridizadora radioativa; revelação.
	
	
	Transferência de proteínas do gel para membrana; bloqueio da membrana; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	
	
	Imobilização em coluna de afinidade, eluição com tampão glicina, neutralização do eluato, dot blot.
	
	
	Desnaturação de proteínas; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	
	
	Cromatografia de afinidade; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	
Explicação:
É necessária a transferência das proteínas para uma membrana, onde as reações antígeno x anticorpo se processarão. Colunas de afinidade não são necessárias nesse procedimento.
	
	
	
	 
		
	
		6.
		(IF, TO, 2016): As técnicas de hibridação Northern Blotting, Southern Blotting e Western Blotting permitem estudar respectivamente:
	
	
	
	RNA, DNA e proteínas;
	
	
	DNA, RNA e proteínas;
	
	
	Proteínas, RNA e DNA.
	
	
	DNA, proteínas e RNA;
	
	
	RNA, proteínas e DNA;
	
Explicação:
Blotting significa a transferência de macromoléculas, sejam elas ácidos nucleicos ou proteínas, de um gel de eletroforese para a superfície de uma membrana. Em função das moléculas de interesse, existem três variações de técnicas blotting: Southern Blot (DNA), Northern Blot (RNA) e Western Blot (proteínas).
1. INMETRO (2010): A biotecnologia trabalha predominantemente manipulando material genético de seres vivos; para a maioria dos organismos, o material genético é a molécula de DNA. Acerca da estrutura da molécula de DNA, assinale a opção correta:
a) O DNA é composto por quatro tipos de bases nitrogenadas: adenina, citosina, timina e uracila.
b) O açúcar contido na molécula de DNA é a ribose.
c) Em uma cadeia de DNA, os nucleotídeos se ligam aos açúcares e fosfatos por pontes de hidrogênio.
d) As duas fitas que compõem a molécula de DNA são ligadas por pontes de hidrogênio entre suas bases nitrogenadas.
e) Há complementaridade entre as bases nitrogenadas adenina e timina e entre guanina e uracila.
Gabarito comentado
Parabéns! Você acertou!
A resposta correta é a alternativa D. Em (A), a base nitrogenada uracila não faz parte do DNA. Em (B), o açúcar correspondente seria a desoxirribose. Em (C), os nucleotídeos são compostos por açúcar, base nitrogenada e fosfato. As bases nitrogenadas de ambas as fitas de DNA anti-paralelas é que são mantidas por pontes de hidrogênio. Em (E), a complementariedade correta seria de guanina com citosina.
2. SEDUC-RJ (2013): A diferença encontrada entre DNA e RNA em relação às bases nitrogenadas é:
a) DNA tem adenina e guanina como bases pirimidínicas.
b) RNA possui uracila, mas não possui timina como base purínica.
c) DNA apresenta timina e não uracila como base pirimidínica.
d) RNA possui adenina, citosina e guanina como bases purínicas.
e) DNA apresenta adenina e guanina como bases purínicas.
3. IFN-MG (2016): Hoje em dia, o trabalho com material genético tornou-se rotineiro. Para uma correta extração de ácidos nucleicos, é importante a escolha adequada de protocolos e reagentes para aquele material que se quer extrair e para que fim se destina. Em um protocolo de extração de DNA ou RNA, não se deve usar como reagente:
a) Proteases.
b) Tampão.
c) Nucleases.
d) Sais.
e) Nenhuma da opções acima.
4. FIOCRUZ (2010): Para a extração de RNA/DNA, uma das etapas mais importantes é a eliminação das proteínas durante o processo de purificação. Para a eliminação de proteínas na extração de RNA/DNA, assinale a afirmativa inadequada:
a) Digestão das amostras com a enzima proteinase K.
b) Extrações com misturas de solventes orgânicos com fenol e clorofórmio por repetidas vezes.
c) Solubilização em tampões de guanidina.
d) Precipitação salina.
e) Solubilização em tampões ácidos (pH menor que 3,5).
Gabarito comentado
Infelizmente, você errou!
A resposta correta é a alternativa E. O pH ideal para a realização do protocolo de extração é pH 8,0, de forma a inibir as endonucleases e manter a integridade do ácido nucleico final.
5 - Em relação ao protocolode extração de ácidos nucleicos, identifique as principais etapas representadas na figura a seguir, que estão numeradas de 1 a 4 (Imagem adaptada de Biology Videos).
 Fonte: Biolvid
Gabarito
Gabarito
1 – Lise celular;
2 – Purificação;
3 – Precipitação;
4 – Hidratação.
	
	1a Questão (Ref.:201906181490)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	São exemplos de ácidos nucleicos:
		
	 
	DNA e RNA;
	
	Proteínas e lipídios;
	
	Timina e uracila.
	
	Adenina e guanina;
	
	Monossacarídeos e dissacarídeos;
	
	
	
	2a Questão (Ref.:201906181502)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	Identifique as principais etapas do protocolo de extração de ácidos nucleicos:
		
	
	Hidratação, Lise celular, Purificação e Precipitação;
	
	Lise celular, Hidratação, Precipitação e Purificação;
	
	Hidratação, Purificação, Lise celular e Precipitação.
	 
	Lise celular, Purificação, Precipitação e Hidratação;
	
	Precipitação, lise celular, purificação e Hidratação.
	
	
	
	3a Questão (Ref.:201906181547)
	Acerto: 0,0  / 1,0
	(POLÍCIA CIENTÍFICA, PE, 2016) - Acerca da reação em cadeia da polimerase (PCR), assinale a opção correta:
		
	
	O último passo da PCR, a polimerização, é a excisão da fita de DNA no sentido 3'→5', começando no primeiro nucleotídeo do primer iniciador incorporado;
	
	Os iniciadores são pequenos fragmentos sintéticos de DNA de fita dupla, usualmente com extremidade 3'-OH, e complementares à sequência do segmento de DNA de interesse;
	 
	PCR é a tecnologia por meio da qual são produzidos bilhões de cópias de fragmentos de DNA. Os fragmentos do DNA amplificado pela PCR são chamados amplicons e podem ser tipificados usando-se diferentes métodos.
	
	A reação de PCR é dependente da atividade de cópia de fragmentos de DNA, catalisada pela enzima DNA sintetase;
	 
	A enzima termoestável direciona o posicionamento dos precursores de DNA ― dNTP ― iniciando a síntese de novas fitas de DNA. A temperatura ideal para a polimerização varia entre 25 ºC e 45 ºC;
	
	
	
	4a Questão (Ref.:201906181506)
	Acerto: 0,0  / 1,0
	(UFRJ, 2012): Para uma reação de PCR ocorrer corretamente, são necessários os seguintes componentes:
		
	
	uma polimerase de DNA termoestável, desoxirribonucleosídeos, um par de iniciadores e um molde de DNA;
	
	uma polimerase de DNA termolábil, desoxirribo-nucleotídeos trifosfatados, um iniciador e um molde de RNA;
	 
	uma polimerase de DNA termoestável, desoxirribonucleotídeos trifosfatados, um par de iniciadores e um molde de DNA.
	
	uma polimerase de DNA termolábil, desoxirribonucleotídeos trifosfatados, um par de iniciadores e um molde de ácido nucleico;
	 
	uma polimerase de DNA termoestável, desoxirribonucleotídeos trifosfatados, dois pares de iniciadores e um molde de ácido nucleico;
	
	
	
	5a Questão (Ref.:201906178200)
	Acerto: 0,0  / 1,0
	(Prefeitura de Barra Mansa, RJ, 2010) - Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. Em relação à eletroforese em gel é correto afirmar que:
		
	
	Na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;
	 
	as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de menor massa situam-se na porção superior do gel e as de maior massa na porção inferior;
	 
	as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de maior massa situam-se na porção superior do gel e as de menor massa na região inferior;
	
	na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA positivamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;
	
	após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluoresce (torna-se visível) vivamente em contato com a luz infra-vermelha.
	
	
	
	6a Questão (Ref.:201906178201)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(Adaptada de IF, RN, 2017) - Entre as técnicas usadas na biotecnologia:
		
	
	Nenhuma das alternativas acima.
	
	na técnica do DNA recombinante, utilizam-se as endonucleases e a Taq polimerase para unir as duas fitas de DNA;
	
	na reação em cadeia da polimerase (PCR), utiliza-se a DNA helicase para separar as fitas de DNA a 94° C;
	 
	a eletroforese é usada para separar fragmentos de DNA de tamanhos diferentes a partir de corrente elétrica;
	
	a biobalística usa microprojéteis revestidos com DNA para identificar trechos que se repetem no DNA;
	
	
	
	7a Questão (Ref.:201906187722)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(UFES, 2015): Considere as seguintes afirmações sobre a reação em cadeia da DNA polimerase (PCR):
 
I. Segmentos específicos de DNA podem ser facilmente amplificados a milhões de cópias.
II. A PCR pode ser utilizada em medicina forense e diagnósticos clínicos. Produtos da reação de PCR podem ser usados em clonagem.
III. A PCR utiliza uma DNA-polimerase termoestável, porque, para cada etapa de amplificação, o DNA de fita dupla deve ser desnaturado pelo calor.
 
É correto o que se afirma em:
		
	
	I apenas;
	
	II apenas;
	 
	I, II e III.
	
	I e II apenas;
	
	II e III apenas;
	
	
	
	8a Questão (Ref.:201906187724)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(INCA, 2014): Qual afirmação descreve com precisão o processo de PCR?
		
	 
	É necessário um par de primers para a amplificação de um fragmento de DNA;
	
	Os produtos de PCR são inibidores da reação em cadeia da polimerase;
	
	A reação de PCR requer um tipo especial de enzima de restrição;
	
	O peso molecular do fragmento de DNA não é diagnóstico de especificidade de um PCR;
	
	A reação de PCR amplifica geometricamente um fragmento de DNA.
	
	
	
	9a Questão (Ref.:201906189006)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(IF, TO, 2016): As técnicas de hibridação Northern Blotting, Southern Blotting e Western Blotting permitem estudar respectivamente:
		
	
	DNA, RNA e proteínas;
	
	Proteínas, RNA e DNA.
	
	RNA, proteínas e DNA;
	 
	RNA, DNA e proteínas;
	
	DNA, proteínas e RNA;
	
	
	
	10a Questão (Ref.:201906189005)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(UFRJ, 2013): Selecione a opção que contém as etapas necessárias para execução do protocolo de Western blotting:
		
	
	Desnaturação de proteínas; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	 
	Transferência de proteínas do gel para membrana; bloqueio da membrana; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	
	Imobilização em coluna de afinidade, eluição com tampão glicina, neutralização do eluato, dot blot.
	
	Cromatografia de afinidade; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	
	Transferência do DNA do gel para membrana; incubação com sonda hibridizadora radioativa; revelação.
	
	
	
	1a Questão (Ref.:201906181492)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	Na técnica de extração de ácidos nucleicos (DNA/RNA), quais os reagentes que podem ser utilizados?
		
	
	Etanol 70% e isopropanol;
	
	Todas as alternativas estão erradas.
	
	Partículas de sílica e tiocianato de guanidina;
	
	Fenol e clorofórmio;
	 
	Todas as alternativas estão corretas;
	
	
	
	2a Questão (Ref.:201906181494)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(SESAU, 2010): O RNA difere quimicamente do DNA por apresentar:                                         
		
	
	ribonucleotídeos e possuir a base timina.
	
	desoxirribonucleotídeos e possuir a base uracila;
	
	desoxirribonucleotídeos e por possuir a base timina;
	 
	ribonucleotídeos e por possuir a base uracila;
	
	ribonucleotídeos e possuir as bases timina e uracila;3a Questão (Ref.:201906181514)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(Fiocruz, 2010): Sobre a utilização da técnica de PCR com a finalidade de diagnóstico molecular, analise as afirmativas a seguir.
I. Uma vez que na reação de PCR se utiliza uma DNA Polimerase dependente de DNA, somente os vírus cujo genoma é constituído por DNA podem ser detectados pela técnica de PCR.
II. É possível detectar microorganismos diferentes em uma mesma reação de PCR, desde que se utilize na reação pares de iniciadores específicos para cada microorganismo que se queira detectar.
III. A utilização da técnica de PCR para diagnóstico molecular terá sempre e somente caráter qualitativo.
Assinale:
		
	 
	se somente a afirmativa II estiver correta;
	
	se somente a afirmativa III estiver correta;
	
	se todas as afirmativas estiverem corretas.
	
	se somente as afirmativas I e II estiverem corretas;
	
	se somente a afirmativa I estiver correta;
	
	
	
	4a Questão (Ref.:201906181543)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(INMETRO, 2010): A técnica de PCR (reação em cadeia de polimerase), a mais utilizada para amplificação (clonagem) do DNA in vitro, revolucionou o acesso a informações genéticas. Com relação a essa técnica, assinale a opção correta:
		
	
	Na PCR, os primers (iniciadores) se hibridam com moléculas de DNA fita dupla;
	
	A PCR também pode ser aplicada na análise de proteínas;
	
	Com a PCR, a clonagem molecular necessita de 48 a 72 horas para ser executada;
	
	A PCR necessita ser acompanhada de um método de purificação para separar o fragmento amplificado do restante do genoma.
	 
	Com a PCR, a enzima Taq polimerase é capaz de manter sua atividade mesmo nas altas temperaturas necessárias para desnaturar a molécula de DNA;
	
	
	
	5a Questão (Ref.:201906181452)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(Polícia Científica, PE, 2016): A respeito de eletroforese, uma metodologia amplamente empregada para separação, isolamento, análise e manipulação dos ácidos nucleicos, assinale a opção correta:
		
	
	A eletroforese em gel de agarose é usada para separar proteínas de tamanhos diferentes, que podem ser detectadas por fluorescência;
	
	A identificação dos fragmentos amplificados de DNA não pode ser realizada em gel de poliacrilamida;
	
	A eletroforese consiste na migração das partículas de uma solução coloidal sob a influência de um campo magnético onde a polaridade negativa atrai as moléculas;
	
	Os ácidos nucleicos possuem uma carga geral total positiva, devido aos seus grupamentos fosfato do arcabouço e, consequentemente, quando aplicados em um gel de agarose ou poliacrilamida, migram em direção ao ânodo.
	 
	A quantificação de DNA em gel de agarose é uma técnica de menor precisão, comparada a eletroforese em acrilamida, sendo utilizada como instrumento para averiguação de êxito na etapa de extração;
	
	
	
	6a Questão (Ref.:201906181489)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(FIOCRUZ, 2010) - Analise as afirmativas a seguir:
I. A eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial.
II. A eletroforese em gel é utilizada para separar proteínas e moléculas de DNA e RNA.
III. Existem vários tipos de eletroforese em gel para analisar proteínas durante o processo de purificação. Entre elas, estão a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil de sódio sulfatado (SDS-PAGE), a eletroforese em gel de poliacrilamida não desnaturante (Native PAGE) e o gel em duas dimensões.
Assinale:
		
	
	se apenas as afirmativas I e III estiverem corretas.
	
	se apenas a afirmativa III estiver correta;
	
	se apenas a afirmativa II estiver correta;
	
	se apenas a afirmativa I estiver correta;
	 
	se apenas as afirmativas I e II estiverem corretas;
	
	
	
	7a Questão (Ref.:201906187712)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(INCA, 2014): Um oligonucleotídeo de DNA curto utilizado para amplificação por PCR é adequadamente chamado de:
		
	 
	primer;
	
	polimerase;
	
	sonda;
	
	vetor.
	
	inserto;
	
	
	
	8a Questão (Ref.:201906187728)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(Fiocruz, 2010): A técnica de PCR em tempo real permite ao usuário detectar, diferenciar variantes virais e quantificar ácidos nucléicos provenientes de uma infecção viral em uma única reação em tempo real, enquanto o PCR convencional basicamente permite apenas a detecção de ácidos nucléicos em uma única reação. De acordo com a frase acima, assinale a afirmativa correta:
		
	
	Está parcialmente errada, uma vez que é possível quantificar em tempo real o PCR convencional;
	
	Está parcialmente errada, uma vez que não é possível quantificar ácidos nucléicos por PCR em tempo real.
	
	Está totalmente correta;
	
	Está parcialmente errada, uma vez que não é possível diferenciar ácidos nucléicos no PCR em tempo real;
	 
	Está parcialmente errada, uma vez que também é possível distinguir diferentes variantes virais no PCR convencional em uma única reação (por exemplo, PCR multiplex);
	
	
	
	9a Questão (Ref.:201906189004)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(FGV, 2010): Num estudo para verificar se a espécie "A" de bactéria apresenta e expressa um gene similar ao gene tox da espécie "B", seria correto afirmar que:
		
	 
	uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada com DNA total, indicaria que um DNA similar a este gene está presente em "A" sem informação sobre transcrição ou tradução do mesmo;
	
	uma hibridação tipo Northern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de RNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é traduzido na espécie "A";
	
	a obtenção de um produto de PCR amplificado a partir de iniciadores para tox da espécie "B" comprova a presença de um gene tox sendo expresso na espécie "A";
	
	uma hibridação tipo Western-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que um DNA similar a este gene está presente no genoma da espécie "A".
	
	uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é expresso na espécie "A";
	
	
	
	10a Questão (Ref.:201906189001)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	Considerando os princípios das técnicas de hibridização e suas aplicações dentro da biologia molecular, assinale a alternativa correta:
		
	
	Não existe técnica de hibridização capaz de avaliar expressão gênica.
	
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Western Blotting;
	
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Southern Blotting;
	
	Southern, Northern e Western Blotting podem ser utilizadas para estudos envolvendo expressão gênica;
	 
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Northern Blotting;
	
	
	1a Questão (Ref.:201906181500)
	Acerto: 0,0  / 1,0
	(IFF, Farroupilha-RS, 2016): O processo de extração e a purificação do DNA genômico compreende vários passos:
		
	
	Lise das células, extração de lipídeos e desoxiribonucleicos e precipitação do DNA.
	
	Quebra de lipídeos, precipitação do RNA e lise das proteínas;
	 
	Lise das células, extração das proteínas mais RNA e precipitação do DNA;
	 
	Lise das células, extração de ácidos desoxiribonucleicos e precipitação do RNA;
	
	Lise das células, centrifugação e ressuspensão do DNA;
	
	
	
	2a Questão (Ref.:201906181496)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(IGP, 2008): Analise as afirmações abaixo sobre a estrutura e composição dos ácidos nucléicos.               
I Quatro aspectos principais definem a estrutura da molécula de DNA: a dupla-hélice, o diâmetro uniforme, o giro para a direita e o antiparalelismo.
II Considerandoa regra de Chargaff, A+G = T+C; já a razão A+T para G+C varia entre as espécies.
III As ligações químicas existentes entre as bases nitrogenadas são de hidrogênio, já as ligações entre o açúcar e a base nitrogenada são do tipo fosfodiéster.
IV Um nucleosídeo é composto por um açúcar e uma base nitrogenada, já um nucleotídeo é composto por um açúcar, uma base nitrogenada e um grupamento fosfato.
 
Quais estão corretas?
		
	
	A I, a II, a III e a IV.
	
	Apenas a III e a IV;
	
	Apenas a I, a II e a III;
	 
	Apenas a I, a II e a IV;
	
	Apenas a I e a II;
	
	
	
	3a Questão (Ref.:201906181510)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(PC, PI, 2018) - Em investigações criminais, alguns fios de cabelo, células da pele, sangue ou outros fluidos corporais podem ser deixados no local e o DNA recolhido a partir dessas amostras tem a capacidade de indicar a solução do crime. Muitas vezes a quantidade de DNA disponível para análise é limitada, contudo com a técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR), o menor vestígio de DNA encontrado pode ser amplificado, aumentando a quantidade de material e proporcionando o suficiente para traçar o perfil genético e assim garantir a análise. A respeito da técnica de PCR, assinale a opção correta:
		
	
	As etapas utilizadas para realizar a PCR são a desnaturação, extensão (Taq polimerase) e anelamento (primers) nesta ordem;
	
	Atualmente, devem-se adicionar enzimas de polimerização a cada etapa de desnaturação.
	
	Para realizar a PCR é necessário utilizar apenas o DNA a ser amplificado, Taq polimerase e nucleotídeos (dNTPs);
	
	A PCR convencional permite a quantificação dos produtos por meio de fluorescência;
	 
	Na PCR convencional, o resultado é comumente analisado por meio de uma eletroforese em gel de agarose ou de poliacrilamida;
	
	
	
	4a Questão (Ref.:201906181540)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(Fiocruz, 2010): A retrotranscrição de RNA genômico viral em moléculas de DNA complementar para a sua detecção por técnica de PCR é denominada:
		
	
	Imunoperoxidase;
	 
	RT-PCR;
	
	sequenciamento.
	
	microscopia ótica;
	
	PCR em tempo real;
	
	
	
	5a Questão (Ref.:201906178198)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(SESAU, RO, 2017) - Técnica baseada na separação de partículas em um determinado gel de acordo com sua massa e carga. Pode ser utilizada para separação de diversas moléculas orgânicas, como lipoproteínas, proteínas, RNA e DNA. A técnica de separação descrita no texto é denominada:
		
	
	floculação;
	
	cromatografia.
	
	filtração;
	
	centrifugação;
	 
	eletroforese;
	
	
	
	6a Questão (Ref.:201906178519)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(Adaptada de UFMG, 2013) - Em relação à espectrofotometria, é incorreto afirmar que:
		
	
	a espectrofotometria é a medida da intensidade da luz em comprimentos de onda selecionados;
	 
	a absorvância é a capacidade de uma substância em absorver ou transmitir radiação;
	
	a energia é transmitida por ondas eletromagnéticas que são caracterizadas pela frequência e comprimento de onda;
	
	a luz visível para o olho humano é a região do espectro eletromagnético com comprimento de onda entre 390 e 780 nm;
	
	a espectrofotometria permite estimar a concentração de soluções.
	
	
	
	7a Questão (Ref.:201906187734)
	Acerto: 0,0  / 1,0
	(Fiocruz, 2010) - Assinale a afirmativa incorreta:
		
	 
	A metodologia de PCR em Tempo - Real é a única metodologia de PCR quantitativo existente;
	
	É a curva de dissociação obtida ao final da corrida de PCR em Tempo - Real que permite a verificação da especificidade da amplificação obtida;
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, quanto maior for a quantidade de DNA alvo presente em uma dada amostra um menor número de ciclos de PCR será necessário para se obter uma quantidade de fluorescência a partir desta dada amostra acima do ruído de fundo do aparelho (Ct);
	 
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, a utilização de sondas marcadas com fluoróforos permite a realização de reações multiplex;
	
	A técnica de PCR em Tempo - Real é mais sensível que a técnica de PCR convencional.
	
	
	
	8a Questão (Ref.:201906187716)
	Acerto: 0,0  / 1,0
	(PC, DF, 2012) - O propósito da PCR é fazer um número imenso de cópias de um determinado fragmento gênico, cujo tamanho pode variar de poucos pares de base até milhares de pares de base. A PCR é constituída de três ciclos. Assinale a alternativa que apresenta esses ciclos:
		
	
	fase de desnaturação, fase de captação e fase de extensão.
	 
	fase de desnaturação, fase de hibridização e fase de fixação ou anelamento;
	
	fase de desnaturação, fase de fixação e fase de hibridização ou anelamento;
	 
	fase de desnaturação, fase de hibridização ou anelamento e fase de extensão;
	
	fase de desnaturação, fase de extensão ou anelamento e fase de fixação;
	
	
	
	9a Questão (Ref.:201906189002)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(Adaptada de UFG, 2017): A identificação e quantificação de moléculas específicas em células e tecidos pode ser realizada pela interação antígeno-anticorpo. Qual metodologia utiliza dessa interação para identificação molecular?
		
	 
	Western Blot;
	
	espectrofotometria;
	
	Nenhuma das alternativas acima.
	
	espectrometria de massa;
	
	qRT-PCR;
	
	
	
	10a Questão (Ref.:201906197076)
	Acerto: 1,0  / 1,0
	(Adaptada de INCA, 2010): A respeito dos testes sorológicos, complete a lacuna a seguir:
"_______________ é uma técnica sorológica que detecta a presença de anticorpos específicos contra o HIV."
		
	
	Northern Blot;
	 
	Western Blot.
	
	Clonagem;
	
	PCR;
	
	Southern Blot;