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Prova 1 Microbiologia Geral 4/10/2018 Profa Elisa Esposito Nome: GABARITO RA: Questões Descritivas 1) O Sistema CRISPR-Cas9 foi desenvolvido em laboratório e é constituído de um RNA-guia (CRISPR) associado a uma enzima de restrição (Cas9). O RNA-guia é uma sequência curta de RNA sintético complementar à sequência de um determinado trecho de DNA. Quando introduzido em células vivas, o CRISPR-Cas9 detecta a sequência de DNA complementar e a enzima corta o DNA em um ponto específico. Em seguida, o sistema de reparo do DNA é ativado, unindo novamente os segmentos que foram separados. Nesse processo, podem ocorrer alterações na sequência original, causando a inativação de um gene. Sistemas semelhantes ao CRISPR-Cas9 são encontrados naturalmente em algumas bactérias, e ativados quando estas são infectadas por vírus. Cas9 DNA RNA-guia corte sistema de reparo do DNA alteração de sequência (http://www.aati-us.com. Adaptado.) a) Cite uma vantagem que sistemas semelhantes ao CRISPR-Cas9 conferem a bactérias atacadas por um vírus cujo material genético seja o DNA. Supondo que no DNA viral exista a sequência de bases nitrogenadas CCCTATAGGG, qual será a sequência de bases no RNA- -guia associado à Cas9 bacteriana? b) Por que a alteração na sequência de DNA provocada pelo CRISPR-Cas9 pode inativar um gene? a) O Sistema CRISPR-Cas9 é capaz de reconhecer sequências específicas de DNA. Sendo assim, caso uma sequência de DNA viral tenha sido inserida no cromossomo de uma bactéria, como no ciclo lisogênico, ela pode ser reconhecida e inativada pelo sistema CRISPR, livrando a bactéria da ação viral. A sequência de bases do RNA-guia associado deve ser complementar ao DNA que será inativado. Considerando-se a sequência fornecida: CCCTATAGGG, o RNA complementar será GGGAUAUCCC. b) Uma vez que a sequência do DNA foi alterada pela ação do Cas9, o RNA transcrito a partir dessa sequência também será alterado. Consequentemente, a proteína traduzida a partir desse RNAm pode não ser funcional, ou seja, o gene pode ser inativado. 2) Pela primeira vez, a edição de genes foi utilizada para remoção do HIV de organismos vivos. Usando a CRISPR, cientistas eliminaram o material genético do vírus tanto em infecções agudas quanto em infecções latentes em três modelos animais. Além dos avanços médicos, a CRISPR também contribui com um planeta mais sustentável. Recentemente, cientistas utilizaram uma combinação de ferramentas de edição de genes para engenheirar algas que produzem duas vezes mais material de biocombustível que os tipos selvagens. Comente sobre a aplicação desses sistemas de edição de genes: Baseado na discussão que tivemos em aula. 3) Quais características de Archaeas favorecem seu desenvolvimento em ambientes extremos? 4) Muitos procariotos são móveis, apesar de não possuírem flagelos. As cianobactérias são capazes de se movimentar sobre superfícies sólidas, por um processo denominado “deslizamento”. Explique como esses organismos se movimentam. O movimento se deve a Secreção de um polissacarídeo limoso que se adere à superfície, e a célula é gradativamente puxada. Envolve a movimentação de proteínas na superfície celular. Acredita-se que as proteínas do envelope celular formam o motor que impulsiona as adesinas, como SprB e RemA, ao longo da superfície da célula. Os exopolissacarídeos aumentam a motilidade por meio do revestimento do substrato e da interação com as adesinas específicas. 5) Foi manchete da Folha on Line recentemente, uma notícia intitulada “Cientista modifica forma de bactérias para combatê-las”. Explique qual o papel destas proteínas e porque podem ser a chave para o combate de bactérias patogênicas: Basicamente, a proteína MreC se aproxima da PBP2 e as estruturas desta começam a se afastar, se abrem por interações hidrofóbicas –como se fosse um zíp. 6) Quais processos são mediados por plasmídeos em bactérias? Ex. Plasmídeo, R=Resistência à drogas, F=Fertilidadede, Virulência,Metabólico, Col, Críptico, etc DNA cromossômico também pode ser transferido durante a conjugação. 7) Com base nas interações eletrostáticas, os autores levantaram a hipótese de que as nanopartículas de ouro com uma carga negativa em sua superfície não seriam atraídas pelas superfícies das células bacterianas, significando que teriam impacto mínimo sobre a morte da bactéria. Os autores supuseram que as nanopartículas carregadas positivamente se ligariam fortemente às superfícies celulares, o que poderia causar a morte celular. Com base nessa hipótese, testaram um tipo de nanopartícula de ouro com uma superfície negativa, uma com superfície positiva e outra com um polímero na superfície que lhe conferiu uma carga positiva ainda maior por nanômetro quadrado. Considerando as interações eletrostáticas, como você supõe que essas nanopartículas atuariam sobre as células de bactérias Gram positivas e Gram negativas? Feng et al., 2015 Algo que esses dois tipos de bactérias têm em comum é que ambos têm uma carga negativa em suas superfícies. As cargas positivas e negativas de fato governavam as interações entre essas nanopartículas e as células. Ainda mais interessante, não só mostramos que interações de superfície mais altas levaram a mais morte celular, mas também demonstramos que as diferentes características da superfície celular dos dois tipos de bactérias levaram a diferentes tipos de comportamentos de ligação com as nanopartículas. Questões alternativas: 1. A base da coloração de Gram é: A) A parede celular de bactérias Gram-positivas atua como uma barreira à extração do complexo cristal-violeta-iodo pelo álcool; B) A parede celular de bactérias Gram-negativas atuam como uma barreira à extração do complexo cristal-violeta-iodo pelo álcool; C) A membrana citoplasmática atuam como uma barreira à extração do complexo cristal-violeta-iodo pelo álcool; D) Não há formação do complexo cristal-violeta-iodo em bactérias Gram-positivas; E) Todas estão corretas. 2. A pressão osmótica interna de uma bactéria está entre 5 a 20 atmosfera. A substância responsável pela rigidez da parede celular bacteriana é o (a): A) Lipoproteinas B) Lipopolissacarídeos C) Nucleoproteína D) Peptidoglicano E) Glicoproteínas 3. Assinale as alternativas verdadeiras São funções da membrana citoplasmática: ( ) É uma barreira responsável pela separação do meio interno e externo da célula ( ) Atua em diversas funções como transporte de solutos de maneira altamente seletiva ( ) Produção de energia por transporte de elétrons e fosforilação oxidativa ( ) Participa da biossíntese de várias macromoléculas componentes de estruturas externas à membrana ( ) Está envolvida na secreção de várias substâncias e também na duplicação do DNA, visto que algumas proteínas do complexo de duplicação de DNA estejam na membrana plasmática. 4. Assinale as opções verdadeiras São componentes citoplasmáticos das bactérias: ( ) Grânulos de polissacarídeos (glicogênio e amido) ( ) Grânulos de enxofre (são utilizados como reserva de energia) ( ) Inclusões lipídicas (Mycobacterium, Bacillus...) ( ) Carboxissomos(contêm a enzima ribulose 1,5-difosfato carboxilase ) ( ) Magnetossomos (contêm óxido de ferro) e Vacúolos de gás( flutuação) 5. Assinale as opções verdadeiras A cápsula, apesar de não ser essencial à vida da célula bacteriana, pode desempenhar várias funções: ( ) Reservatório nutricional e de água; ( ) Aumento da capacidade invasiva de bactérias patogênicas (escapam à ação dos fagócitos); ( ) Aderência, pois as cápsulaspossuem receptores específicos que servem como sítios de ligação com outras superfícies; ( ) Aumento da resistência microbiana a biocidas; 06. Assinale as opções verdadeiras São funções dos ácidos teicóico e lipoteicóico: ( ) Facilitar a ligação e regulação de entrada e saída de cátions na célula; ( ) Regular a atividade das autolisinas durante o processo de divisão celular; ( ) Constituir sítios receptores de bacteriófagos; ( ) Servir de sítio de ligação com o epitélio do hospedeiro em algumas células patogênicas; ( ) Constituir importantes antígenos celulares tornando possível a identificação sorológica de muitas bactérias Gram-positivas. 07. Espaço periplasmático é o espaço compreendido entre as membranas externa e plasmática, preenchido por: A) Enzimas hidrolíticas responsáveis pela quebra de macromoléculas, às quais a membrana plasmática é impermeável. B) Por enzimas capazes de inativar drogas, tornando a célula resistente a elas C) Por proteínas transportadoras de solutos. D) Por peptídeo-glicana. E) Todas estão corretas.
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