PRATICA 3- RELATORIO pronto

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA- UESB 
CURSO: Engenharia de Alimentos 
DISCIPLINA: Engenharia Bioquímica 
DOCENTE: 
DISCENTE: Gilmara P. Ramos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
AULA PRÁTICA 3 – Medição do crescimento Celular 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Itapetinga – BA 
SETEMBRO/2019 
Resultados e discussão 
Na tabela abaixo estão apresentadas as absorbâncias realizadas a 600 nm em 
espectrofotômetro para leitura de densidade ótica de células: 
Tabela 1 - Valores de diluição e absorbância 
Diluições Absorbância 
Solução – mãe 1,314 
10-1 0,456 
10-2 0,356 
10-3 0,346 
 
Leitura da densidade Ótica (D.O.) de células 
A avaliação da turbidez de uma cultura microbiana constitui um método 
rápido, embora indireto, de estimar a concentração celular. Um feixe de luz focado 
numa suspensão microbiana é parcialmente desviado (dispersão da luz) pelas 
células, e a percentagem de luz não desviada (transmitância, T) é medida por 
recurso de um espectrofotômetro. 
Comprimentos de onda frequentemente usados para medição da Densidade 
Óptica de suspensões de células de bactérias ou leveduras incluem 540, 600, 640 
ou 660 nm, a faixa utilizada nessa pratica foi de 600 nm. Existe, dentro de certos 
limites, uma relação linear entre a absorbância ou D.O. da cultura e o número total 
de células por mililitro de suspensão, ou seja a concentração celular. Contudo, para 
suspensões celulares muito densas (por exemplo, com D.O.560 superior a 0,4) é 
frequentemente necessário diluir as culturas de modo a que todos os valores de 
D.O. Medidos estejam incluídos na parte linear da curva D.O. Versus concentração 
celular, como mostra na tabela 1. 
No entanto o método não permite distinguir entre células viáveis e células 
mortas e não permite obter diretamente valores absolutos da concentração de 
células, sendo especialmente utilizado quando se pretende confirmar se uma dada 
cultura se encontra em crescimento ou para acompanhar o crescimento microbiano 
com base no aumento da D.O. medida a um comprimento de onda particular. Com 
base nos valores de absorbância. 
Para os resultados foi construída uma curva padrão considerando apenas as 
diluições: 
 
 
Para a utilização desse método para acompanhamento do crescimento celular de 
leveduras e bactérias, primeiramente desenvolveu-se uma curva de calibração 
celular, este procedimento envolve o preparo de uma solução padrão ou mãe de 0,2 
g em 200mL de levedura comercial e três diluições sucessivas, nesse experimento 
foram três diluições 10-1, 10-2, 10-3, posteriormente foram realizadas as leituras em 
espectrofotômetro a 600 nm. As concentrações foram plotadas contra a 
absorbância e os dados foram ajustados a um modelo linear, como mostra no 
gráfico acima. 
Na tabela abaixo está expresso o resultado para solução mãe na determinação 
de medida do peso seco: 
Tabela 2 – Resultado da análise de peso seco 
 Cadinho Cadinho + 
amostra 
Cadinho 
pós estufa 
Peso seco 
amostra 
Solução mãe 34,785g 84,692g 34,815g 0,03g 
 
 
y = -0,055x + 0,496 
R² = 0,8176 
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0,4
0,45
0,5
0 1 2 3 4
Curva padrão 
absorvancia y
Linear (absorvancia y)
Determinação do peso seco: 
A determinação do peso seco, que, sendo corretamente executada, constitui 
o processo básico da medida de massa, servindo como referência na padronização 
de outros métodos, podendo ser associada também com a absorbância, realizando 
uma curva padrão. Este processo consiste em um recipiente apropriado (cadinho), 
previamente tarado, adicionado da amostra, e este conjunto são secados na estufa 
até peso constante. Porém, esta técnica possui algumas limitações como: 
 a) São necessárias amostras relativamente grandes para que as medidas tenham 
significado. Isto significa que não é possível acompanhar o crescimento de uma 
população microbiana desde suas massas iniciais, sendo necessário que a massa 
atinja um nível crítico; 
 b) Em caso de lavagem das células antes da secagem pode acarretar perda de 
material. 
Contagem em placas 
Somente a diluição 10-3 que foi submetida a contagem em placa, no entanto, 
a diluição não foi eficaz, seria necessário realizar mais algumas diluições, pois a 
mesma deu um numero incontável de células. 
Contagem em câmara de Neubauer 
Para melhor visualização a amostra foi tingida com azul de metileno, o azul 
de metileno colore as células mortas, como mostra na figura abaixo, e as células 
incolores, são células viáveis. Não foi realizada a contagem, somente a 
visualização. 
 
 
 
 
 
 
Perguntas: 
a) Quais métodos seriam mais adequados para uma leitura rápida do 
crescimento celular? 
b) Qual (is) mede(m) células totais e viáveis? 
c) Porque a densidade ótica não pode ser utilizada para expressar biomassa 
celular? 
d) Quais outros métodos para medição do crescimento celular poderiam ser 
utilizados? 
e) A câmara de Neubauer pode ser utilizada para medir células viáveis?