aula 05 - Testes pré transfusionais

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Testes pré-transfusionais
Profa. Alessandra Barone
Prof. Archangelo Fernandes
www.profbio.com.br
Imunohematologia
• Antígenos eritrocitários
Importância do estudo dos antígenos
• Incompatibilidades transfusionais
• Incompatibilidades Materno fetal
• Transplantes
Reações hemolíticas transfusionais
• RHT
– Definida como a diminuição da sobrevida da hemácia 
após transfusão de sangue devido a incompatibilidade 
imunológica entre o doador e receptor
RHTs
• As reações hemolíticas transfusionais podem 
ser de dois tipos:
– Imediata: acorrem durante ou algumas horas após 
a transfusão
– Tardia: ocorrem dias ou semanas após a 
transfusão
RHTs
• Podem ser classificadas em :
– Intravascular : 
• Mediadas por ac que ativam o sistema 
complemento com formação do MAC
• Presença de hemoglobinemia e hemoglobinúria
RHTs
– Extravascular : 
• Mediados por ac que não ativam completamente o 
sistema complemento
• Fixação do C3b na membrana
• Reconhecimento da porção Fc dos ac e do 
fragmento C3b do sistema complemento pelos 
macrófagos do SMF.
• Aumento da bilirrubina
RHTI RHTT
Extravascular
Mediadas pela 
Fc e c3b
Intravascular
mediadas por 
complemento
ABO Rh
Reação hemolítica imediata
• Por ABO:
– Reação hemolítica grave com alto índice de 
mortalidade.
– Ac presentes no plasma do receptor hemolisam as 
hemácias do doador
– Possibilidade de desenvolvimento de CIVD pela 
liberação de estroma celular com ativação do fator XII.
Reação hemolítica imediata
• Sintomas de dor no tórax, no local de infusão, abdome 
e/ou flancos, hipotensão grave, febre e hemoglobinúria. 
• O quadro pode evoluir para insuficiência renal aguda por 
vasoconstrição , por liberação de catecolaminas, 
hipotensão sistêmica e formação de trombos 
intravasculares .
Reação hemolítica tardia
• Ocorre devido à produção de anticorpos 
antieritrocitários (exceto ABO) após transfusão ou 
gestação prévias
• Sintomas de febre, icterícia, diminuição da hemoglobina 
ou aproveitamento transfusional inadequado. 
Provas de compatibilidade 
transfusionais
• Tipagem ABO – doador e receptor
– Direta
– Prova reversa
• Tipagem Rh
– Pesquisa de D fraco
• Pesquisa de anticorpos irregulares
– Teste de coombs direto- TAD
– Teste de coombs indireto – TAI
• Painel de hemácias
• Prova cruzada maior e menor
Testes laboratoriais para tipagem
ABO
• Testes diretos – ABO e Rh
– Verificam a presença do antígeno eritrocitário
– Utilização das hemácias do doador e receptor
– Podem ser realizados em :
• Tubo
• Lâmina
• Gel de centrifugação
Testes laboratoriais para 
tipagem ABO
• Testes indiretos – ABO reverso
– Verificam a presença de anticorpos anti antígenos 
eritrocitários
– Utilização do soro/plasma do paciente
– Podem ser realizados em :
• Tubos
• Lâminas
• Gel de centrifugação
Testes laboratoriais para tipagem ABO
• Tipagem direta –
–Hemácias a 5% (paciente) x soro comercial (anti-A; anti-
B e anti-AB )
– Anti-A = cor azul
– Anti-B = cor amarela
– Anti-AB = cor de plasma
Testes laboratoriais para tipagem ABO
• Tipagem reversa –
– Plasma ou soro (paciente) x hemácias a 5% 
fenotipadas (A1 e B)
– Nome comercial das hemácias A1 e B (Fresenius
HemoCare Brasil Ltda) = REVERCEL
TIPAGENS PARA O SISTEMA ABO
A
B
A,B
O
Tipagem direta = pesquisa a presença de antígenos na membrana dos 
eritrócitos
Tipagem Reversa = pesquisa a presença de anticorpos naturais
Tipagem em gel
Sistema de cartões
• Maior sensibilidade
• Utilização de ac monoclonais (murino) e humanos
• Padronização na intensidade de aglutinação no momento da 
leitura do resultado
• Testes estáveis por 2 dias
• Realização de teste de Coombs sem lavagens de hemácias
• Menor contato do profissional com o sangue (biossegurança)
Positiva
++++
Positiva
+++
Positiva
++
Positiva
+
Negativa
-
Escala de aglutinação
Tipagem em gel
• Tipagem direta e reversa: testes devem ser 
concordantes
• Casos de discrepância do sistema ABO:
– Presença dos subgrupos ABO
• 1-8% indivíduo A2 –produz anti-A1
• 22-35% A2B –produz anti-A1
– imunossupressão, 
– redução de expressão antigênica, 
– presença de anticorpos irregulares, 
– transfusões recentes .
Determinação de fator Rh
• Método direto
– Verificação da presença de antígeno Rh.
– Pode ser realizado em lâmina, tubos e cartão de gel.
– As técnicas são as mesmas utilizadas para verificação do 
sistema ABO.
– A reação de aglutinação positiva indica a presença do 
antígeno D na membrana.
– A reação de aglutinação negativa nem sempre indica 
ausência de antígeno D na membrana – presença de D 
fraco
Pesquisa de D fraco
• Incubar os dois tubos da reação anterior por 30 
minutos em banho maria a 37ºC
• Centrifugar a 3.400 rpm – 15’’
• Ressuspender delicadamente e proceder a leitura
– Teste + para aglutinação no tubo D - terminar o teste
– Teste – para aglutinação no tubo D - continuar o teste
Pesquisa de D fraco
• Lavar as hemácias com sol fisiológica por 3 vx à 
3.500 rpm por 15’’.
• Adicionar duas gotas do soro de Coombs a cada um 
dos tubos e homogeneizar.
• Centrifugar.
• Proceder a leitura.
Hemácias+ soro anti D 
+ centrifugação
negativo 37º C
NegativoCOOMBS
Soro de coombs
• Anticorpo anti-imunoglobulina humana 
monoespecífico
– Anti-gama
• Dirigidos contra fração Fc das imunoglobulinas 
humanas
• Preparado a partir de soro de coelhos e/ou cabras 
imunizados à fração IgG (gamaglobulina) do soro 
humano. 
Pesquisa de D parcial
• Utilização de ac monoclonais com clone 
específico
Pesquisa de D parcial
Identificação de ac. irregulares
• Identificação de ac irregulares realizado através do 
teste de Coombs.
– Coombs direto ou TAD: pesquisa de anticorpos fixos a 
membrana eritrocitária.
• Ex: DHRN, anemias autoimunes, transfusões 
incompatíveis.
– Coombs indireto ou TAI: detecta a presença de 
anticorpos livres no soro.
• Ex: sensibilização materna por gravidez.
Coombs direto (TCD)
• Coleta com Edta – lavar as hemácias.
• Realizar suspensão de hemácias a 5%.
• Pingar em um tubo 2 gotas da suspensão.
• Lavar mais uma vez, decantando o sobrenadante.
• Adicionar 2 gotas de soro de Coombs e 
homogeneizar.
• Centrifugar por 15’’ a 3.400 rpm.
• Proceder a leitura.
Coombs direto (TCD)
• Resultado negativo: ausência de aglutinação.
– As hemácias não estão sensibilizadas.
• Resultado positivo: presença de aglutinação
– As hemácias estão sensibilizadas com anticorpos.
– Para identificação do ac, realizar eluição. 
Coombs direto
Coombs indireto
• Pesquisa de anticorpos irregulares livres no 
plasma
• Realizado em 4 fases
– 1ª, 2ª e 3ª fase: mais eficientes na detecção de IgM
– 4ª fase: utilização do soro de Coombs para detecção 
de IgG
• Utilização de hemácias comerciais I e II- Triacel ® 
Coombs indireto
• 1ª fase: fase salina temperatura ambiente
• 2ª fase: fase protéica temperatura ambiente -
albumina bovina 22%
• 3ª fase: fase protéica quente - 37ºC
• 4ª fase: fase de Coombs
• As centrifugações entre uma fase e outra deverão 
respeitar 1 mim a 100o rpm ou 15’’ a 3400 rpm
Pesquisa de Anticorpo Irregular
“Coombs indireto”
Meio 
salino / TA
Meio Protéico/ TA Meio Protéico / 37ºC Soro de Coombs
He I - - +3 +4
He II - - - -
He I ou He II 
(comerciais)
Soro do 
Paciente
Centrifugação Albumina
37oC
45min
Soro de 
Coombs
Objetivo: Verificar a existência de Ac irregular no Soro do paciente a ser 
transfundido, doadores, gestantes, etc.
Coombs indiretoPainel de hemácias
• Painel formado por 11 lotes de hemácias
– 10 lotes obtidos de doadores do tipo O
– 1 lote obtido de sangue de cordão umbilical de 
recém-nascidos do grupo O
• Utilizado para a pesquisa dos anticorpos 
irregulares 
Coombs indireto
• Homogeneizar e submeter os tubos as todas as 4 fases do 
teste de Coombs indireto 
– Temperatura ambiente
– Meio protéico
– 37ºC
– Coombs
• Verificar o antígeno em comum nos tubos onde houveram 
aglutinação
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 H10 H11
Soro
(gotas)
2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
Prova cruzada
• Utilizada para transfusões sanguíneas ou 
transplante de órgãos
• Finalidade de determinar a presença de 
anticorpos pré-formados no sangue do 
receptor contra as células do possível doador
Prova cruzada
• Prova cruzada maior e menor
• Maior
– Finalidade de testar os glóbulos vermelhos do 
doador contra o soro do receptor.
Tubo de hemólise
Hemácias do doador 1 gota se suspensão 5%
Soro do receptor 2 gotas do soro
• Homogeneizar e submeter os tubos as todas 
as 4 fases do teste de Coombs indireto 
– Temperatura ambiente
– Meio protéico
– 37ºC
– Coombs
• Verificar a presença ou não de aglutinação
Referência bibliográfica
• AZEVEDO, Maria Regina A. Hematologia Básica: fisiopatologia e estudo 
laboratorial. 4 ed. São Paulo: Editora Luana. 2008. 420 p
• BORDIN. José O.; JÚNIOR, Dante M. L.; COVAS, Dimas T. Hemoterapia. São 
Paulo: Editora Atheneu. 2007. 632p
• GIRELLO, Ana L.; KUHN, Telma .I.B. Fundamentos da Imunohematologia
eritrocitária. 2.ed.SãoPaulo: Editora Senac. 2007. 208p.
• Hemocentro Unicamp. Manual de Orientações para uso de 
hemocomponentes e derivados .2008
• OLIVEIRA,Luciana C. O. COZAR, Ana Paula C. N .C. Cozac. Reações 
transfusionais: diagnóstico e tratamento. Medicina, Ribeirão Preto, 36: 
431-438, abr./dez. 2003.