DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE DOENÇAS INFECCIOSAS

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DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE DOENÇAS INFECCIOSAS
Autarquia Belemita de Cultura, Desportos e Educação / Centro de Ensino Superior do Vale do São Francisco
INTRODUÇÃO
O diagnóstico molecular das doenças infecciosas vem adquirindo papel preponderante na prática da medicina;
Grandes avanços em relação ao entendimento da replicação do DNA, dos genes e do crescimento e desenvolvimento de células ocorreram graças às técnicas de biologia molecular;
Considerando a alta prevalência de pacientes infectados, os testes de biologia molecular representam não apenas a confirmação dos testes de triagem, mas o avanço no tratamento e orientação da terapêutica através da genotipagem;
HCV;
É um dos maiores e principais avanços técnológicos; 
Amplificação enzimática de regiões curtas de DNA in vitro. A partir disso, ocorre uma cadeia de processos, fases e procedimentos até chegar ao seu resultado final;
Vantagem de rapidez e precisão dos resultados;
Atua no diagnóstico e monitoramento da infecção pelo vírus HIV, vírus da Hepatite e doenças hereditárias.
PCR (Reação em cadeia da Polimerase)
Geração de bilhões de cópias de DNA-alvo tendo como base uma única cópia de DNA, tudo isso em uma altíssima velocidade.
OCORRE EM 3 ETAPAS:
Desnaturação : ocorre a separação da dupla fita de DNA.
Anelamento ou Hibridização: os iniciadores ou primers se ligam à fita de DNA que se pretende amplificar. Um deles é complementar à sequência em uma fita da dupla-hélice de DNA e o outro é complementar à sequência na outra fita.
Extensão ou Polimerização: com o ponto de partida já identificado, a Taq polimerase liga-se à fita sinalizada pelo primer, complementando-a. Inicia-se então a extensão do novo fragmento de DNA, formando novamente uma fita dupla de DNA.
PCR EM TEMPO REAL (qPCR)
Os ensaios de PCR em Tempo Real são muito mais sensíveis, específicos e rápidos.
O equipamento é capaz de detectar a fluorescência eventualmente produzida pela amostra e assim a técnica permite acompanhar a reação e a apresentação dos resultados em tempo real;
Identifica infecções virais e bacterianas, em que a cultura dos agentes causadores pode ser muito difícil ou até mesmo impossível;
Adição de sondas fluorescentes às reações de PCR
SEQUENCIAMENTO 
Determinar a ordem dos nucleotídeos em uma amostra de DNA;
Um dos métodos mais usados é a “técnica de desoxi”.
O método consiste na adição de nucleotídeos modificados, chamados didesoxiribonucleotídeos (ddNTP’s).
Impedem o crescimento de um fragmento de DNA em replicação pela DNA polimerase após sua adição. 
Com a ausência do OH, o próximo nucleotídeo não tem onde se ligar e a replicação pára, assim, é possível obter fitas do mesmo DNA com número de resíduos diferentes. 
Sequenciar peças individuais de DNA, como plasmídeos bacterianos ou DNA copiado em PCR. 
OBRIGADA!
Grupo: Dâmaris Guedes, Mª Eduarda, Mª Fernanda Lima, Ilária Sá, Paloma Silva, Samara Santos e Vitória Pereira.
1° Farmácia 
Biologia Celular e Molecular
Prof: Jackson Menezes