RELATÓRIOPRÁTICASEAD-BIOLOGIA MOLECULAR- aula 1,2 e 3 -1- (5)

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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
AULA _1 e 2___ 
DATA: 
 
18/05/2019 e 25/05/2019 
VERSÃO:01 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular 
 
DADOS DO(A) ALUNO(A): 
 
NOME: AMANDA NAZAÁRIO DE SOUZA MATRÍCULA: 01241696 
CURSO: FARMÁCIA POLO: MACEIÓ 
PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): MARVIN PAULO LINS 
 
ORIENTAÇÕES GERAIS: 
 
 O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e 
 concisa; 
 O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema; 
 Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado); 
 Tamanho: 12; 
Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm; 
 Espaçamento entre linhas: simples; 
 Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
AULA _1 e 2___ 
DATA: 
 
18/05/2019 e 25/05/2019 
VERSÃO:01 
TEMA DE AULA: EXTRAÇÃO DE DNA 
 
 
RELATÓRIO: 
1. Após realizar a atividade proposta pela professora, descrever detalhadamente o que 
ocorreu em cada etapa da extração de DNA do morango. Além de descrever o que está 
acontecendo visualmente, identificar o que acontece biologicamente com as células em 
cada uma das etapas. É obrigatório anexar pelo menos 1 foto de cada etapas do processo 
de extração. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
AULA _1 e 2___ 
DATA: 
 
18/05/2019 e 25/05/2019 
VERSÃO:01 
 
 
 
 
Experimento: Extração DNA Morango. 
- Etapas realizadas: 
1. Lavar o morango e tirar as sépalas. 
2. Colocar o morango no almofariz e macerar com o pistilo. 
3. Em um Becker adicionar 150 ml de água destilada, 10 g de NaCl1 e 20 ml de detergente2. 
4. Colocar 50 ml do preparo sobre o macerado do morango. 
5. Homogeneizar com bastão de vidro. 
7. Deixar a temperatura ambiente durante 15 minutos 
8. Filtrar o extrato do morango com papel filtro 
9. Colocar o filtrado num tubo de ensaio 
10. Inverter delicadamente álcool etílico3 gelado dentro do tubo de ensaio sem 
homogeneizar. 
11. Aguardar 5 minutos. 
12. Observar DNA precipitado. 
 
1 NaCl – Sal 
A adição do sal (NaCl) proporciona ao DNA um ambiente adequado. O sal contribui com íons 
positivos que neutralizam a carga negativa do DNA. Numerosas moléculas de DNA podem 
coexistir nessa solução. 
 
2Detergente 
 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
AULA _1 e 2___ 
DATA: 
 
18/05/2019 e 25/05/2019 
VERSÃO:01 
O detergente afeta as membranas porque elas são formadas por lipídeos. Com a ruptura das 
membranas o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA, soltam-se e dispersam-se 
na solução. A função de algumas dessas proteínas é manter o DNA enrolado numa espiral 
muito apertada 
 
3Álcool Etílico 
Ao colocar o álcool bem gelado na solução de extração misturada com o morango macerado, 
foi possível observar a precipitação da fita de DNA, isso ocorreu devido ao fato de a proteína 
DNA ser insolúvel em álcool, ou seja, ela não se dissolve no álcool, tornando possível sua 
visualização. O DNA é menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares. 
 
 
 
Referência Bibliográfica: 
http://www.cienciamao.usp.br/tudo/exibir.php?midia=fef&cod=_extraindoodnadomorango 
Imagens de autoria da aluna, retirado em sala de aula. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
AULA _1 e 2___ 
DATA: 
 
18/05/2019 e 25/05/2019 
VERSÃO:01 
TEMA DE AULA: ELETROFORESE 
 
 
RELATÓRIO: 
 
1. Identificar todos os equipamentos e reagentes necessários para a realização da 
eletroforese 
 Cuba de eletroforese 
 Gel Agarose 
 Tampão 
 Amostra 
 Sonda (Corante Fluorescente) 
 Transluminador 
 Fotodocumentador 
 Magnésio 
 Taq Polimerase 
 Primers 
 Nucleotídeos 
 Tubos de PCR 
 Termociclador 
 
 
 
 
 
Imagens de autoria da aluna, retirado em sala de aula. 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
AULA _1 e 2___ 
DATA: 
 
18/05/2019 e 25/05/2019 
VERSÃO:01 
 
2. Descrever cada etapa dessa metodologia 
 
Eletroforese ocorre dentro de uma matriz ou gel que possibilita a corrida da amostra. O gel 
é introduzido dentro de uma solução tampão específica para eletroforese que fornece as 
condições ideais para a passagem da corrente e a manutenção do valor do pH. 
Em seguida, as amostras são pipetadas em pequenos poços feitos com um pente no gel. 
Para ocorrer a migração, a cuba e fonte de eletroforese exercem uma voltagem, corrente e 
potência constantes, esses fatores irão determinar o sucesso da técnica. 
E por fim, as bandas são visualizadas sob luz ultravioleta ou LED, através do equipamento 
chamado de transiluminador. 
A agarose é um polissacarídeo composto por agar e pectina. 
Para preparar este gel, simplesmente faz-se a mistura entre o pó de agarose e solução 
tampão. Após fundir, coloca-se brometo de etidium, que tem ampla afinidade pelo DNA, e 
revela sobre presença de UV(ultra violeta) os 
Ácidos nucléicos. 
Quando a mistura esfriar o gel estará duro. Esse endurecimento é feito em um local 
apropriado, o mesmo local onde será feita a corrida da amostra. Um detalhe importante é a 
colocação do pente no gel durante o endurecimento. O pente cria poços que serão utilizados 
para a colocação das amostras. Podemos ver este processo como uma corrida. Cada um é 
colocado numa pista e na presença de uma corrente elétrica vai deixando o seu rasto. São 
estes rastos que serão comparados no método. 
 O gel de agarose e usado pois tem uma maior extensão de separação para 
fragmentos longos de DNA( identifica os ácidos nucléicos presente neste). O tamanho e a 
conformação da molécula de DNA, a concentração do gel de agarose, a corrente elétrica 
aplicada e tipo de tampão usado influenciam a velocidade da partícula no gel. 
 
3. Justificar a aplicação das diferentes concentrações dos géis. 
A agarose é utilizada como gel para a eletroforese. A agarose é um polissacarídeo forma 
uma rede que prende as moléculas durante a migração. Dependendo da concentração de 
agarose, há uma diferença no gradiente de separação, isto é, quanto maior a concentração 
de agarose, menor o tamanho dos poros e maior a dificuldade da migração dos fragmentos 
de DNA e de RNA, aumentando o tempo de migração. 
Para preparar um gel de agarose, faz-se a mistura entre o pó de agarose e a solução tampão 
TBE ou TAE. Após a polimerização do gel, coloca-se brometo de etídio, que fará o DNA e o 
RNA "brilhar" quando exposto ao UV. A menores temperaturas o gel ganha consistência. Um 
detalhe fundamental é a colocação do pente no gel durante o endurecimento. O pente cria 
poços que serão utilizados para a colocação das amostras de DNA e RNA. 
Podemos ver este processo como uma corrida. Cada um é colocado numa pista e na 
presença de uma corrente elétrica vai deixando o seu rastro. São estes rastros que vamos 
comparar. 
 
Referências Bibliográficas 
https://kasvi.com.br/principios-da-tecnica-de-eletroforese/ 
http://www2.dbd.puc-rio.br/pergamum/tesesabertas/0212144_06_cap_02.pdf 
http://www.geocities.com/~esabio/eletrof.htm 
http://www.chemkeys.com/artigo/1/14 
http://ciencia.hsw.uol.com.br/evidencias-de-dna1.htm 
https://pt.wikipedia.org/wiki/Eletroforese_em_gel 
 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
AULA _1 e 2___ 
DATA: 
 
18/05/2019 e 25/05/2019 
VERSÃO:01 
 
TEMA DE AULA: REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE 
 
 
RELATÓRIO: 
 
1. Descrever cada uma das etapas da PCR, explicando detalhadamente cada uma. 
 
1 – DESNATURAÇÃO 
O DNA genômico contendo a sequência a ser amplificada é desnaturado por aquecimentoa 
cerca de 95°C por cerca de 30 segundos. A dupla fita é aberta (desnaturada), tornando-se 
uma fita única. 
 
2 – ANELAMENTO OU HIBRIDIZAÇÃO 
Após a separação das fitas, um par de iniciadores ou primers (uma fita de DNA específica 
para o gene que se quer estudar) complementam a fita oposta da sequência de DNA a ser 
amplificada. Ou seja, um deles é complementar à sequência em uma fita da dupla-hélice de 
DNA e o outro é complementar à sequência na outra fita. O molde é determinado pela 
posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 60°C. 
 
3 – EXTENSÃO OU POLIMERIZAÇÃO 
Com o molde já identificado, a enzima DNA-polimerase adiciona as bases complementares, 
formando uma nova fita e então tem-se novamente a duplicação da fita de DNA. Esse 
processo acontece a uma temperatura de 72°C. 
 
 
Fonte: Bruces, ALBERTS,, JOHSON, Alexander, LEWIS, Julian, ROBERTS, Keith, 
WALTER, Peter, and RAFF, Martin. Biologia Molecular da Celula, 5ª edição. ArtMed, 2011. 
pág 545. 
 
 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD 
AULA _1 e 2___ 
DATA: 
 
18/05/2019 e 25/05/2019 
VERSÃO:01 
O ciclo inteiro é então reiniciado, os produtos do primeiro ciclo de replicação são então 
desnaturados, hibridizados e novamente replicados com DNA-polimerase. O procedimento 
é repetido muitas vezes até́ que o nível desejado de amplificação seja obtido. 
Na prática, a amplificação efetiva do DNA requer de 20 a 30 ciclos de reação, com os 
produtos de cada ciclo servindo como DNA-molde para o próximo – dando origem ao termo 
“reação em cadeia” da polimerase. 
Como cada etapa da reação ocorre em uma temperatura especifica, a reação pode ser 
controlada. É utilizado um termociclador para determinar a temperatura e o tempo de cada 
etapa, bem como o número de ciclos de replicação. 
A detecção do produto de amplificação normalmente é feita em eletroforese em gel de 
agarose, que é corado com brometo de etídio, permitindo a visualização direta do DNA 
pesquisado. Hoje, existem termocicladores que, além de amplificar o DNA, permitem a sua 
detecção – chamada PCR em tempo real (qPCR). 
 
2. Realizar o cálculo para 10 reações da PCR 
Quantidade para 1 reação Quantidade para 10 reações 
Amostra de DNA 5uL Amostra de DNA 50 uL 
dNTPs 2,5 uL dNTPs 25 uL 
MgCl2 1,25 uL MgCl2 12,5 uL 
Primers 2 uL (1 + 1) Primers 20 uL (10 +10) 
Taq Polimerase 1 uL Taq Polimerase 10 uL 
Tampão 4 uL Tampão 40 uL 
H2O ultrapura 
(q.s.p)* 
9,5 uL H2O ultrapura 
(q.s.p)* 
95 uL 
Total preparado 25 uL Total preparado 250 uL 
*Quantidade suficiente para 25 uL 
 
 
Referências Bibliográficas 
https://kasvi.com.br/3-etapas-pcr/