RESUMO BIO MOL

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Biologia molecular 
Microarranjos: são um coleções de pontos microscópicos, preenchidos com DNA que contem sondas pra determinadas moléculas alvo, assim produzindo resultados quantitativos com uma expressão gênica, essa técnica pode ser distinguida por diferentes característica como a natureza da sonda, o suporte solido usado que podem ser usados 3 ( vidro, silicone e plástico ) e o método para o direcionamento da sonda dependendo da sua finalidade. 
Na técnica são sintetizadas as sondas sendo respeitada a sua posição, e sequencia na placa, se tiver uma hibridização forte entra a sonda e a molécula selecionada Raí acontecer uma fluorescência acima dos níveis que os mesmo pode ser medidos em um escâner da fluorescência, assim mostrando uma colocação mais forte e mais visível com aquelas que não se ligaram fortemente a sondas. Essa técnica consiste em uma hibridização de uma sonda de cDNA ou oligonucleotídeo e uma molécula alvo marcada com um fluoróforo, são usada celular que contem um sequencia complementares a moléculas alvo correspondendo a uma parte especifica de um gene que são colocadas a uma superfície solida através de micro agulhas robotizadas, o RNAm extraído da amostra a serem analisadas são utilizados como moldes para a formação do cDNA esse cDNA e marcado com fluoróforo para posterior hibridização. 
 
 
1 passo: é isolamento e amplificação do RNAm 
2 passo: acontece a conversão do DNAc pela transcriptase reversa
3 passo: esse DNAc e marcado com um fluoróforo 
4 passo: transferir esse DNAc com fluoróforo para um chip de microarranjo 
5 passo: vai acontecer uma hibridização do DNAc com a sonda 
6 passo: vai ocorrer a lavagem 
7 passo: depois a detecção por fluorescência
8 passo: analisar em bioinformática 
Na placa de hibridização vamos ter uma fita de DNA simples e a amostra vai ter uma fita de DNAc (complementar) e por complementaridade de base ela vão se juntar e ai vai fazer a fluorescência e assim quando for analisar no software vão aparecer as cores que vão indicar cada tipo de gene assim vai ser dada um expressão genética, pela cor e pela tonalidade das cores 
Expressão gênica: o DNA é o que comanda todas as reações químicas das células o DNA vai comanda a síntese de RNA´s que vai estar ligada a produção de proteínas, que vai ser a transição e a tradução do RNA em proteína , a expressão gênica é ligada a produção de proteínas 
Cada códon de um RNAm vai dar origem a um aminoácidos a cada 3 bases ate se ter uma formação de cadeia de aminoácidos com ligações polipeptídicas que vão forma a proteína em um RNAm temos 2 parte os introns e o éxons os introns são partes inativas ele não codificam uma proteína e os éxons são partes ativas e estão ligados a produção de proteína 
As partes não codificastes os introns são retirados com o processo de splicing assim as partes que são codificastes continuam que são o éxons, apartir de um mesmo RNAm podemos muitas proteínas, que é chamada de expressão gênica diferenciada 
Os promotores isoladamente são geralmente eficientes. Fatores de transcrição seletivos que se ligam a upstream e a enhancers aumentam a iniciação, em alguns caso proteínas adicionais ( mediadores e coativadores ) são requeridos para estimular a transcrição 
 
 
 
 
Seqüenciamento: é uma técnica que vai permitir a identificação de um conjunto de bases que forma uma seqüência para um gene, antes do projeto Genoma humano nos não sabíamos qual era a seqüência, e o que tinha no DNA, só se sabia que tinha as bases nitrogenadas ( C-G A-T ) porem não sabia qual era a seqüência do genoma que é todos os genes que nos temos e qual é a seqüência dele e o que eles estão fazendo, depois do projeto genoma humanos eles conseguiram seqüenciar o nosso genoma, em indivíduos da mesma espécies não é igual mais eles são muitos similar mesmo com cada um tendo sua composição e existindo polimorfismo e mutações mais de uma forma geral e bem parecido, então eles conseguiram seqüenciar o genoma humano e a partir disto obtivemos a seqüência genéticas por exemplo o gene BRCA1 e BRCA2 que são marcadores pra câncer de mama então sabemos que determinadas mutações neste gene podem aumentar as chances de ter esse tipo de câncer, então o seqüenciamento é quando pegamos uma amostra e queremos saber quais são as bases que compõem essa amostra, nos casos de pesquisas muitas vezes precisam identificar e conhecer mutações que podem auxiliar no desenvolvimentos da doença, por exemplo em câncer de mama e existe muitas mutações no genes dessa molécula e elas são muito importantes, ai será que os pacientes com câncer de mama tem alguma mutação especifica, ai para realizar a técnica precisa se extrair o DNA desses pacientes com tecido ou sangue extrai o DNA purifica amplifica ele com PCR pra ter a região necessária ai faz pares de primer pra amplificar exatamente aquele gene que precisamos, depois de ampliado se coloca em um seqüenciamento existe 2 jeitos 
sequenciamento Sanger: esse é o modelo mais antigo, nos dias de hoje ele é mais barato esse modelo faz uma reação nova de PCR com a amostra que você tem so que em vez de colocar só os DNTP´s que são as bases nitrogenadas que vão ajudar na composição de novas fitas, você coloca também os ddNTP´s(didesoxiribonucleotídeos) que são bases marcadas que não possuem o grupo OH livre do carbono 3’ da pentose, e impedem o crescimento de um fragmento de DNA em replicação pela DNA polimerase após sua adição. Quando os ddNTP’s tentam se ligar com a fita de DNA, com a ausência do OH, o próximo nucleotídeo não tem onde se ligar e a replicação para, assim, é possível obter fitas do mesmo DNA com número de resíduos diferentes. Esse método tem sido largamente utilizado por centros de pesquisa ao redor do mundo, em cada um dos tubinhos de adiciona um ddNTP´s exemplo um tubinho pra ddNTPA outro ddNTT e assim por diante, ai depois colocar em um gel ai quando corre o gel maior peso molecular em cima e o menor em baixo 
seqüenciamento 454: é dividido em 4 etapas A,B e C a etapa A é preparo da amostra a etapa B é PCR e emulsão e a C seqüenciamento 
No processo A: temos a molécula de DNA que e fragmentada aleatoriamente, podemos fragmentar usando enzimas de restrição esse DNA já fragmentado e ligado a adaptadores com uma coloração verde e vermelha em sua extremidades permitindo que os fragmentos ligados a essa adaptadores possam ser separados caracterizando assim uma biblioteca , utilizando somente os DNA que estão com esse adaptadores 
No processo B: os fragmentos da bibliotecas são ligados a micro esferas magnéticas por meio do pareamento de adaptadores por intermédios de seqüências curtas complementares a esse adaptadores presente na superfície da micro esfera, depois que ele se liga na micro esfera temos um único filamento de DNA se ligando a essa esfera com complementaridade vou colocar essa esfera em óleo de emulsão destro dessa gotículas onde esta a emulsão vou ter a micro esfera La tendo com uma DNA cada uma dela separados e La dentro vai acontecer uma PCR emulsão que vai amplificar esse DNA ate que você tenha a mesma seqüência de DNA em todas essa seqüência que estão na micro esfera, então apenas um tipo de fragmento se liga a essa micro esfera, e as mesma são capturadas individualmente em gotículas oleosas onde a PCR emulsão vai ocorrer e milhares de copia do fragmento alvo vai ser produzidos nessa faze 
No processo C: as micro esfera ligadas a seqüência alvo de fita simples são capturadas individualmente em poços no suporte de seqüenciamento e em seguida são fornecidas os reagentes pirossequenciamento então tem que se garantir que em cada poços desses vai ser colocado apenas uma micro esfera fazendo assim um único DNA sendo seqüenciado em casa poço e logo após adicionar os reagentes o sulfurilase que vai pegar o fosfato que e gerado a partir do seqüenciamento transforma em ATP e através da luciferase se transforma em oxiluciferase e luz ai essa luz vai ser captada por uma câmera que vai captar emtodos os poços e todo o material ao mesmo tempo então ela vai seqüenciar todos os poço as mesmo tempo do genoma inteiro
Então esses programa são codificados por software especializados em uma seqüência de nucleotídeos únicas, representando cada mico esfera da placa 
As enzimas de restrição ou também denominadas de endonucleases de restrição, são as ferramentas básicas da engenharia genética, desempenhando função de clivagem (corte) da molécula de DNA em pontos específicos, em reconhecimento a determinadas seqüências de nucleotídeos. 
Foram inicialmente descobertas em células bacterianas, relacionadas ao mecanismo de defesa contra DNA exógeno, a exemplo parasitose viral, inativando o potencial infeccioso do organismo invasor a partir da fragmentação do material genético do mesmo. 
Hoje em dia, a biologia molecular utiliza centenas de endonucleases capazes de seccionar o duplo filamento polinucleotídico da molécula de DNA em lugares determinados. Dessa forma, submetidos à técnica de eletroforese, os pedaços secionados pelas enzimas passam por análise comparativa de bandas transversais reveladas em um filme, permitindo, por exemplo, a identificação de pessoas: possíveis suspeitos de um crime ou na determinação da paternidade, tendo o laudo legitimidade relativa de competência jurisdicional. Nos exames de paternidade, aplicando-se a eletroforese em fragmentos de DNA, obtidos por ação de enzimas de restrição em amostras sangüíneas dos entes envolvidos: mãe (M), filhos (F1, F2, F3 e F4) e o suposto pai (SP), indicam por bandas eletrondensas que a herança de seqüenciamentos presentes nos filhos e ausentes na mãe, somente pode ter sido transferidos aos filhos pelo pai. No caso exemplificado a seguir, constata-se a contribuição genética provável do suposto pai, indicada por círculos vermelhos no filme revelado da eletroforese. 
Polimorfismo: é por definição, uma variação fenotípica que pode ser separada em classes distintas e bem definidas. O controle genético se dá por um ou poucos loci, sendo a característica pouco suscetível a fatores ambientais. Como exemplos de polimorfismos, pode-se citar grupos sanguíneos do Sistema ABO (classes A, B, AB, O). Nesse caso, só existem 4 fenótipos possíveis. Se fosse possível colocar os fenótipos em um gradiente contínuo, o caso não se trataria de polimorfismo.A cor da pele, em contrapartida do que se pensa geralmente, não é um caso polimórfico, e sim poligênico; entre o branco e o negro, pode-se encontrar milhares de outras pequenas variações fenotípicas, que são fruto de fatores ambientais, além da parte gênica. Isso vale para a maioria dos outros exemplos de 'polimorfias', como a cor do cabelo, tipo de cabelo, altura, peso, etc.Exemplos de polimorfismo:A maneira como se cruza os dedos ou os braços (qual dedão/braço fica em cima, direito ou esquerdo) é um polimorfismo.A variação canhoto/destro é um polimorfismo.A presença de 3º molar é um polimorfismo de 5 classes (0, 1, 2, 3 e todos): pode-se ter apenas o 3º molar superior direito, ter apenas os 3º molares inferiores, pode-se apresentar todos eles, nenhum deles, etc. (5 classes [i.e fenótipos] possíveis).Grosseiramente, a variação macho/fêmea é um polimorfismo, mas é tratada à parte, dada sua importância considerável. Nas bandas formadas por uma eletroforese, pode-se facilmente observar quem é homozigoto. Nesses indivíduos, a proteína produzida pelo gene em questão é fabricada de uma maneira apenas (pois os dois alelos são iguais em homozigotos); logo, ocorre o aparecimento de uma só banda. No caso de indivíduo heterozigoto, ocorrerá o aparecimento de mais de uma banda. 
Uma proteína monomérica é constituída apenas de uma parte, sem necessidade de várias cadeias polipeptídicas intercruzarem-se (1 polipeptídeo = 1 proteína). Se o gene em questão codifica uma proteína monomérica, ver-se-á na eletroforese a ocorrência de uma só banda em homozigotos (dois alelos produzem a mesma parte que caracteriza a proteína) e duas bandas em heterozigotos (os alelos produzem cadeias selvagens [alelo selvagem] e cadeias mutantes [alelo mutante], i.e. duas cadeias diferentes, que possuem pesos moleculares e cargas diferentes, aparecendo por isso em duas bandas distintas no gel de eletroforese). O número total de bandas que poderá ser encontrado na eletroforese, considerando a existência de todos os fenótipos, é de: 2 (se o gene possuir dois alelos), correspondentes a esses dois alelos, selvagem e mutante; 3 (se o gene possuir 3 alelos), etc. 
Uma proteína polimérica (dimérica, tri, ...) é constituída de várias partes peptídicas. No caso de proteínas diméricas, é necessário haver duas partes encaixadas para funcionalizar a proteína (2 polipeptídeos = 1 proteína). Dessa maneira, o que se pode formar de em homozigotos continua aparecendo como uma única banda no gel de eletroforese. No entanto, em heterozigotos há o aparecimento de 3 bandas: as duas mais externas correspondem ao produto de cada um dos alelos, e a banda intermediária corresponde ao produto do conjugado das duas cadeias polipeptídicas. O número total de bandas que poderá ser encontrado na eletroforese, considerando a existência de todos os fenótipos, é de: 3 (se o gene possuir dois alelos), correspondentes aos alelos selvagem e mutante (nas extremidades) e uma banda intermediária*; 5 (se o gene possuir 3 alelos), correspondentes aos alelos selvagens (duas delas nas extremidades e a outra sendo a banda mais central) e uma banda intermediária (mutante) entre cada duas bandas dos alelos selvagens. 
Indivíduos heterozigotos para uma enzima trimérica apresentam duas bandas intermediárias; para uma enzima tetraméria, três bandas intermediárias, e assim por diante. 
*Para diferenciar o resultado de uma eletroforese de proteína monomérica de três alelos e uma eletroforese de proteína dimérica de dois alelos (ambas com três bandas), pode-se observar que, no primeiro caso, a banda do meio é correspondente ao produto de um alelo (e aparece sozinha em caso de homozigoze para esse alelo). Já a banda intermediária do segundo caso é o produto do conjugado entre os peptídeos de dois alelos. Portanto, essa banda intermediária sempre aparecerá junto com as duas bandas das extremidades. Formas Variáveis das Células 
Conhecemos células que mudam continuamente de forma.Dizemos que estas células apresentam polimorfismo.Como exemplo temos os leucócitos e as amebas,que não tem forma definida.Porém há outras células que tem forma constante, não variam de aspecto.Exemplo:as células ósseas, as células da pele, as células dos olhos,entre outras.