Apostila Bioquimica Clinica - Professor Tarcisio 2

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Lei de Lambert-Beer
 Lei resultante da fusão dos conceitos estabelecidos pela lei de Lambert e a Lei de Beer.
Lei de Lambert
 A TRANSMITÂNCIA diminui exponencialmente à medida que a ESPESSURA DO MEIO
ABSORVENTE aumenta aritme�camente.
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Lei de Beer
 A TRANSMITÂNCIA diminui exponencialmente à medida que a CONCENTRAÇÃO do meio
aumenta aritme�camente.
 Assim, a lei de Beer é a mais adequadamente aplicada às técnicas de espectrofotometria.
 Porém, não podemos esquecer da lei de Lambert, pois certos concursos gostam de
 perguntar justamente o que você acha que sabe!
Querem ver?
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Lei de Beer
 Matema�camente, a lei de Beer pode ser expressa por:
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Lei de Beer
 • A proporcionalidade direta entre a absorbância e a concentração deve ser estabelecida
 experimentalmente para um determinado instrumento sob condições especi�cadas.
 • Freqüentemente existe uma relação linear até certa concentração ou absorbância, até onde
 a solução respeita a Lei de Beer.
• Na prá�ca, quando a solução alcança concentração tal que a relação linear com a
 absorbância é perdida, procede-se a diluição da amostra, mul�plicando o valor experimental
ob�do pelo número de diluições realizadas.
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Lei de Beer
 Assim, a Lei de Beer só é seguida se:
 1. A radiação incidente sobre a substância de interesse é monocromá�ca
 2. A absorção pelo solvente é insigni�cante, quando comparada com a absorbância do 
soluto
 3. A concentração do soluto está dentro dos limites
4. Não há interferência óp�ca
 5. Não ocorre reação química entre a molécula de interesse e outra molécula do soluto 
ou solvente
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Espectrofotometria
 Espectrofotometria de UV quando a fonte luminosa emite radiação na faixa ULTRAVIOLETA –
 (entre 180 e 390 nm).
 Espectrofotometria de IV quando a fonte luminosa emite radiação na faixa do –
INFRAVERMELHO (770 e 12.000 nm).
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Fotometria de Re�exão
 A luz difundida incide uma mistura em de reação localizada em um carreador, e a luz re�e�da
 é medida. A intensidade da luz re�e�da é comparada, então, com a intensidade da luz
re�e�da em uma super�cie de referência.
Espectrofotometria de Emissão de Chama
 Baseia-se nas caracterís�cas de emissão de luz por átomos de diversos elementos metálicos
 quando é fornecida energia su�ciente, como, por exemplo, uma chama quente.
 Principal uso  dosagem :de 
LÍTIO
SÓDIO
POTÁSSIO
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Espectrofotometria de Absorção Atômica
 • Nesta técnica, o elemento con�do na amostra é excitado pela chama (que não o faz
 adequadamente), e a energia radiante, ob�da ao longo do processo, é medida enquanto o
 elemento retorna ao nível de mais baixa energia.
• Quando a luz da lâmpada de catodo oco penetra na chama produzida pela queima do
 elemento na amostra, parte dessa luz é absorvida pelos átomos no estado fundamental,
 levando à redução da intensidade dos raios na chama. Este processo é denominado
Absorção Atômica.
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