criopreservação de embriões

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criopreservação de embriões
NOMES: bruno Tavares ra:51711025
 monike de luca mendes ra: 51812356
O que é criopreservação
A criopreservação é uma técnica que usa o congelamento através de temperaturas muito baixas para preservar materiais biológicos, como células e tecidos. A temperatura pode chegar até 196°C negativos (ponto de ebulição do nitrogénio líquido). Isso faz com que a atividade biológica pare, incluindo as reações que levam à morte celular e à degradação do DNA.
Aplicações da criopreservação em embriões
O procedimento é realizado quando existem embriões excedentes e de boa qualidade após uma tentativa de fertilização in vitro ou fertilização in vitro com micromanipulação de gametas. É possível realizar uma avaliação melhor destes embriões e identificar aqueles com alto potencial de desenvolvimento e implantação e até mesmo diminuir as chances de uma gravidez múltipla.
Vantagens
Otimização das biotecnologias reprodutivas. 
Conservação de material genético – extinção/produção. (Preservação de raças em vias de extinção. )
Prevenção de perdas de animais vivos durante o transporte. 
Adequação a época de parições. 
Congelamento lento / vitrificação
Congelamento Lento
 
No congelamento lento, a baixa concentração de crioprotetores não é suficiente para evitar a formação de cristais de gelo;
Necessidade de freezer programável de alto custo para a realização da técnica;
Vitrificação
 
 No processo de vitrificação a redução brusca da temperatura evita a formação de cristais de gelo.
 
 As desvantagens da vitrificação se relacionam com a necessidade da adoção de altas concentrações de crioprotetores, o que aumenta o risco de injúrias tóxicas e osmóticas.
 
 A vitrificação não exige equipamentos específicos, entretanto, para a maioria das amostras vitrificadas, é necessário o uso de ferramentas especiais .
 Métodos de criopreservação 
 Congelamento lento
Convencional
One-Step
 Vitrificação
OPS
Em grade de microscopia eletrônica de transmissão
Cryollop
Micropipetas de vidro – GMP
Em superfície sólida de vitrificação – SSV
Microgotas
Hemi-palhetas (“Hemi Straw”)
 
Congelamento lento
Convencional:
 
 O tecido é resfriado, em média, 2ºC por minuto até alcançar a temperatura entre -4ºC e -9ºC.
 Indução manual da cristalização, utilizando uma pinça com algodão embebida em nitrogênio líquido.
 Evita danos e desidratação celular.
One-Step:
 
 É um método superior ao convencional, apresenta maior taxa de sobrevivência do embrião.
 Pode ser aplicado na criopreservação de embriões em estado de clivagem.
VITRIFICAÇÃO
OPS 
 – Permite contato direto da amostra com o nitrogênio, sendo mais rápida.
 – Risco de contaminação da amostra.
Em grade de microscopia eletrônica de transmissão 
 – O tecido ou célula é posto sob grade eletrônica antes de ser imerso no N². 
 – Permite contato direto da amostra com o nitrogênio.
Cryollop 
 – Permite contato direto da amostra com nitrogênio.
 – Utilização de um instrumento com alça de metal com um laço de nylon preenchido por solução de vitrificação, que confere uma tensão superficial mantendo o material fixado ao mesmo.
Micropipetas de vidro (GMP) 
 – Semelhante ao OPS. 
 – Uso de palhetas com a vantagem de ser padronizadas no tocante ao tamanho e diâmetro. 
 – Utilizadas na manipulação do embrião.
Superfície sólida de vitrificação (SSV) 
 – Sobreposição da amostra (A) em um cubo de metal (B) posicionado acima do nitrogênio liquido.
 – Proporciona rápido resfriamento da amostra , o que é necessário para uma vitrificação eficiente.
Microgotas 
 – Consiste na utilização de agulhas de acupuntura, onde os fragmentos do tecido são perfurados e expostos a solução de vitrificação, em seguida imersos em nitrogênio. 
 – É possível utilizar vários fragmentos simultaneamente, presos na mesma agulha.
Hemi-palhetas / (Hemi Straw) 
 – Maior assepsia. Palheta de polipropileno conjugada a uma haste plástica utilizada para a manipulação, evitando contato direto com o nitrogênio.
Embriões BOVINOS
 Atualmente, a técnica já se encontra bem estabelecida com a utilização de etilenoglicol a 1,5M, atingindo taxas de sobrevivência embrionária, prenhez e nascimento próximas às alcançadas por embriões frescos.
 Além das variações relacionadas à criossensibilidade, embriões bovinos de diferentes raças também mostram variações nas taxas de sobrevivência em embriões da raça Holandesa com morfologia mais preservada do que os da raça Nelore após avaliação ultra estrutural. 
Embriões suínos
Em comparação a outras espécies domésticas, o uso da criopreservação de embriões suínos é significativamente menor. Isso se deve a fatores referentes à própria anatomia e fisiologia do trato reprodutivo da fêmea e à grande sensibilidade embrionária a baixas temperaturas, tornando difícil a sua criopreservação. 
Estágio de desenvolvimento embrionário
Considerações finais
 Ambas as técnicas – por congelamento lento e de vitrificação – podem ser utilizados para a criopreservação de embriões;
 A técnica a ser aplicada influencia no aparecimento das injúrias provocadas nas células.
 A eficiência das duas técnicas podem variar de acordo com diversos fatores, como a forma em que foi empregado, tempo de exposição do embrião ao nitrogênio e de que forma foi exposto, direto ou indiretamente com a substância;
 A técnica por congelamento lento pode ser mais eficiente para preservar folículos pré-antrais, porém a taxa de sobrevivência do embrião é muito maior com a vitrificação.
Bibliografia
 Carvalho, Adeline de Andrade. Vitrificação: Uma alternativa para a preservação de embriões e material genético de fêmeas mamíferas em criobrancos. Disponível em: <https://periodicos.ufersa.edu.br/index.php/acta/article/view/2321> Acesso: 14 de abril de 2020.
 NCBI, Human embryo cryopreservation: one-step slow freezing does it all?. Disponível em: <https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24752713> Acesso: 14 de Abril de 2020.
 Technology Networks. Cryopreservation Freezing Methods and Equipament. Disponível em: <https://www.technologynetworks.com/cell-science/articles/cryopreservation-freezing-methods-and-equipment-292855> Acesso: 14 de abril de 2020.
 UFRGS. Criopreservação – Tópicos Embrião. Disponível em: <http://www.ufrgs.br/topicosembriao/Criopreserv.html> Acesso em: 14 de abril de 2020.